贝氏柯克斯体外膜蛋白H(OmpH)原核表达载体的构建与鉴定

本试验旨在构建贝氏柯克斯体外膜蛋白H(outer membrance protein H,OmpH)的重组表达载体并分析该蛋白的免疫原性,以贝氏柯克斯体九里株为模板,通过PCR方法扩增出含798bp的贝氏柯克斯体的OmpH基因片段,并将其克隆至原核表达载体pQE-30,得到重组表达质粒pQE-30/OmpH。经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果发现,该重组蛋白大小约为25ku。Western blotting试验结果显示,该方法所诱导产生的重组蛋白具有良好反应原性。

猪多杀性巴氏杆菌可视化LAMP检测方法的建立

该研究旨在建立一种快速检测猪多杀性巴氏杆菌的LAMP方法。根据Gen Bank中猪多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因(omp H)序列,在其保守区域设计了多套LAMP引物,通过LAMP反应,评价其特异性和敏感性,并加入SYBR GreenⅠ,对其进行肉眼判定。结果显示:建立的LAMP方法在56℃水浴中1 h可对猪多杀性巴氏杆菌核酸进行高效扩增,在反应结束后加入SYBR GreenⅠ可肉眼进行判断;该方法具有很强的特异性,对其它相关猪病病原菌检测结果均为阴性;其DNA核酸的检测量为0.05pg,是PCR的100倍,显示出很高的敏感性。用建立的LAMP方法对5株猪多杀性巴氏杆菌阳性样品进行检测,结果表明LAMP法与PCR检测的结果是一致的。结果表明该研究建立了一种操作简便、快速、敏感、特异的可视化LAMP方法,适合在基层使用。