卵巢上皮性癌相关抗原cDNA表达文库的构建

目的:构建人卵巢上皮性癌cDNA表达文库。方法:提取卵巢上皮性癌患者腹腔积液肿瘤细胞mRNA,反转录合成双链cDNA,末端补平后连接EcoRI接头,末端磷酸化,XhoI消化,将双末端黏性化的双链cDNA经过凝胶层析柱,收集大于500bp的cDNA片段,加工后与Uni-ZAP XR Vector连接,经过体外包装,感染宿主菌XL1-blueMRF′,构建cDNA文库,检测文库容量和质量。结果:cDNA表达文库原始库容为1.82×106,扩增后文库的库容为7.5×109,重组效率约为90%,插入片段大小主要集中在1.0～2.0kb。结论:成功构建了一个卵巢上皮性癌cDNA表达文库,为下一步筛选、鉴定卵巢上皮性癌相关抗原奠定了基础。

基于TCGA数据集探讨FAT2基因在上皮性卵巢癌中的作用及机制

目的基于肿瘤基因图谱(TCGA)数据集研究脂肪非典型钙黏蛋白2(FAT2)基因在卵巢癌中的表达情况,预测并分析FAT2在卵巢癌发生发展中的可能机制及临床价值。方法应用cbioprotal在线分析平台分析TCGA数据库中311例上皮性卵巢癌RNA-SEQ数据,并结合患者的完整生存期信息,采用Kaplan-Meier法分析FAT2变异与卵巢癌患者生存之间的关系。应用genecards数据库收集与FAT2基因相关的蛋白,绘制FAT2相关蛋白网络图,对相关蛋白进行富集分析,分析蛋白富集的信号通路、生理过程及关键下游基因。结果 311例卵巢癌样本中有12例发生FAT2基因变异,变异率为4%,扩增7例(2.3%),错义突变3例(1%),缺失2例(0.6%)。Kaplan-Meier生存曲线分析表明,FAT2变异组总生存时间长于无变异组(P=0.033 8),无病生存时间与无变异组差异无统计学意义(P=0.387)。与FAT2相关的蛋白有CTNNB1、ARVCF、CTNND1等21个,其中CTNNB1蛋白在卵巢癌中低表达,相关蛋白富集分析到Wnt信号通路、细胞黏附等细胞生理活动。结论 FAT2基因可能可通过诱导Wnt通路中的关键蛋白CTNNB1降解发挥抑癌基因的作用。卵巢癌组织中FAT2高表达是一种预后良好指标,可作为预测患者生存时间,判断预后的有效生物标志物。