斜纹夜蛾inx1,inx4基因的克隆及表达载体构建

无脊椎动物innexin(inx)基因是生物进化上高度保守的基因,区别于脊椎动物的connexin。Inx基因可在细胞膜表面形成功能性的半通道蛋白hemichannel和间隙连接蛋白gap junction,这两种蛋白都与信号传导,胚胎发育,神经系统分化等功能相关。本研究在斜纹夜蛾Spodoptera litura血细胞转录组数据中发现特异的inx1,inx4序列,通过RT-PCR克隆出了Spli-inx1,Spli-inx4,经过比对,确定它们都属于保守的inx基因家族,具有四个保守的跨膜结构域,两个胞外环,一个胞内环,一个位于第二个跨膜结构域前端的YYQWV基序及在胞外环上各有2个半胱氨酸残基。其中,Spli-inx1开放阅读框全长1086 bp,编码361个氨基酸;Spli-inx4开放阅读框全长1116 bp,编码371个氨基酸。构建了包含ORF全长编码区的原核表达载体及真核表达载体,经Western blot证明Spli-inx1和Spli-inx4均可在大肠杆菌及鳞翅目昆虫High Five,Sf9和Spli221细胞系中的表达,初步探索了它们在细胞中的结构和功能。为深入研究Spli Inx1和Spli Inx4的功能奠定基础。