丙戊酸钠对大鼠海马神经元癫痫样放电后P-CREB1表达的影响

目的:研究丙戊酸钠对大鼠海马神经元癫痫样放电后磷酸化腺感苷反应元件结合蛋白1(Phosphorylated cAMP responsive element binding protein 1,P-CREB1)表达的影响。方法:wistar新生鼠,迅速断头取脑,体外培养海马神经元,建立神经元癫痫样放电模型,将神经元分为空白组、模型组、丙戊酸钠低剂量(50mg/L)组、丙戊酸钠高剂量(100mg/L)组,运用免疫荧光技术观察P-CREB1在神经元癫痫样放电后在细胞内的表达部位,采用wester blot技术测定P-CREB1在不同分组中的表达强度。结果:通过免疫荧光技术,在各组中都可以看到P-CREB1在细胞核内表达,以模型组最明显;运用Western blot,发现表达趋势与免疫荧光一致,并且,给予丙戊酸钠后,P-CREB1表达减弱,且高剂量组与低剂量组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:海马神经元无镁处理后呈癫痫样放电,同时P-CREB1被过度激活,而有效浓度的丙戊酸钠可抑制此反应P-CREB1的磷酸化水平。

阿尔茨海默病与野生型小鼠海马中CREB1活性差异研究

目的:检测阿尔茨海默病(Alzhemer’s disease,AD)和野生型对照组小鼠海马CREB1蛋白的活性及意义。方法:D-半乳糖90 mg/(kg·d)联合三氯化铝(Al Cl3)40 mg/(kg·d)连续90 d腹腔注射制造AD小鼠模型;通过糖水偏好实验及Y-迷宫实验初步鉴定模型复制成功;免疫组化检测、比较AD及野生型对照组小鼠海马CA1、CA3和DG区CREB1和p-CREB1蛋白表达水平。结果:与对照组比较,AD模型组小鼠糖水偏好百分比明显下降(P<0.01)。AD组小鼠对新异臂的空间辨别能力明显低于野生型对照组(P﹤0.01)。与野生型对照组相比,AD小鼠海马CA1、CA3和DG区CREB1、p-CREB1蛋白阳性表达强度低,阳性颗粒数目少(P﹤0.01)。结论:D-半乳糖联合Al Cl3通过抑制海马组织关键核转录因子CREB1的活性,影响神经元的存活、损伤后的修复及神经细胞再生,导致小鼠学习记忆能力受损,进而引起AD的发生、发展。

加味盆痛灵方对子宫内膜异位症模型大鼠TRPV1/ERK1/2/p-CREB通路的影响

目的:基于瞬时受体电位香草酸亚型1/细胞外信号调节激酶1/2/磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(TRPV1/ERK1/2/p-CREB)信号通路探讨加味盆痛灵方对子宫内膜异位症(EMs)疼痛模型大鼠的镇痛机制。方法:采用自体内膜移植法建立SD大鼠EMs疼痛模型。造模成功的大鼠采用完全随机设计法分为模型组、TRPV1抑制剂组(CPZ组)、加味盆痛灵方组(JWPTL组)和TRPV1抑制剂+加味盆痛灵方组(CPZ+JWPTL组),每组8只;另设假手术组(n=8)。JWPTL组和CPZ+JWPTL组大鼠自造模成功后第1天起给予7.77 g/kg加味盆痛灵方灌肠,1次/d,其余大鼠灌肠给予等体积0.9%NaCl溶液,连续干预28 d。CPZ组和CPZ+JWPTL组自造模成功后第21天起鞘内注射辣椒平(CPZ),10μL/d,1次/d;其余大鼠鞘内注射等体积助溶剂10%二甲基亚砜(DMSO),连续干预7 d。采用“Up&Down”法测量大鼠的50%机械缩足反应阈值(PMWT),Western blot和RT-qPCR法检测脊髓组织中TRPV1、ERK1/2、p-CREB蛋白和mRNA的表达水平,ELISA法观察即刻早期基因c-fos蛋白的表达情况。结果:给药前,与假手术组比较,各造模组大鼠50%PMWT均明显降低(P<0.05);给药28 d后,CPZ组、JWPTL组和CPZ+JWPTL组50%PMWT较模型组显著升高(P<0.05),CPZ+JWPTL组50%PMWT较CPZ组显著升高(P<0.05)。模型组TRPV1、ERK1/2、CREB蛋白和mRNA的表达水平较假手术组显著升高(P<0.01,P<0.001),模型组c-fos蛋白表达水平较假手术组亦显著升高(P<0.001);与模型组比较,TRPV1抑制剂CPZ和加味盆痛灵方可不同程度下调TRPV1、ERK1/2、CREB蛋白和mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),且CPZ+JWPTL组效果最优。与模型组比较,JWPTL组和CPZ+JWPTL组c-fos蛋白表达水平明显降低(P<0.001)。相关性分析显示,TRPV1、ERK1/2、CREB蛋白和mRNA表达水平及c-fos蛋白表达水平均与50%PMWT呈负相关。结论:加味盆痛灵方可能通过干预TRPV1/ERK1/2/p-CREB通路及c-fos的表达缓解EMs疼痛。

逍遥散对抑郁大鼠大脑皮层cAMP信号通路的影响

目的:观察抑郁大鼠血清前列腺素E_(2)(PGE_(2))、P物质(SP)含量和大脑皮层环磷酸腺苷(cAMP)、元件结合蛋白1(CREB1)mRNA表达水平的变化,探讨逍遥散在治疗抑郁症方面相关的分子机制。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组、氟西汀组。采用慢性束缚应激的方法制备抑郁大鼠模型,造模前30min给予相应药物灌胃治疗,持续21d。通过大鼠宏观表征、糖水消耗实验、旷场实验、强迫游泳实验等观察逍遥散对抑郁大鼠行为学改变的影响。实时荧光定量PCR法检测各组大鼠大脑皮层cAMP和CREB1 mRNA表达水平,酶联免疫法检测大鼠血清PCE2、SP的含量。结果:与模型组比较,逍遥散和氟西汀均可有效减轻抑郁大鼠的抑郁样行为;使得抑郁大鼠糖水消耗量与旷场实验中大鼠的直立活动次数、水平穿格数、整理毛发次数增加;缩短强迫游泳累计不动时间(P<0.01);改善抑郁大鼠大脑皮层病理结构;逍遥散和氟西汀均能提高抑郁大鼠大脑皮层cAMP、CREB1mRNA表达水平,降低血清PCE,和SP的含量(P<0.01)。结论:逍遥散对抑郁大鼠的作用效果明显,可参与调节大鼠大脑皮层cAMP信号通路而发挥抗抑郁作用。