腹腔注射脂多糖对幼鼠癫痫发作及海马TLR4/HMGB1/P-IκB-α表达的影响

目的探讨脂多糖(LPS)预处理对幼鼠癫痫发作及海马炎症介质Toll样受体4/高迁移率族蛋白1/磷酸化核因子抑制蛋白α(TLR4/HMGB1/P-IκB-α)表达的影响。方法出生21d的SD鼠随机分为生理盐水组(对照组),模型Ⅰ组和模型Ⅱ组,模型Ⅰ组采用海人酸(KA)诱导癫痫发作,模型Ⅱ组在应用KA前2h腹腔注射LPS,观察幼鼠癫痫发作的行为学表现,荧光定量PCR检测癫痫持续状态(SE)后3h和24h各组海马TLR4和HMGB1基因的表达,Westernblot法检测SE后3h、24h各组海马TLR4、HMGB1、P-IκB-α蛋白的表达。结果与对照组相比:模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马TLR4基因在SE后3h表达均显著增加(t=4.806,P<0.05;t=4.954,P<0.05),SE后24h也显著增加(t=3.924,P<0.05;t=3.792,P<0.05),模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马TLR4蛋白表达在SE后3h均显著增加(t=7.804,P<0.05;t=8.385,P<0.05),SE后24h也显著增加(t=4.256,P<0.05;t=4.262,P<0.05);模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马HMGB1基因在SE后3h表达均显著增加(t=3.626,P<0.05;t=5.255,P<0.05),SE后24h也显著增加(t=4.046,P<0.05;t=2.836,P<0.05),模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马HMGB1蛋白在SE后3h均无显著性增加(t=0.389,P>0.05;t=0.213,P>0.05),SE后24h也无显著性增加(t=0.106,P>0.05;t=0.279,P>0.05)。模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马P-IκB-α蛋白表达在SE后3h均显著增加(t=4.383,P<0.05;t=6.627,P<0.05),SE后24h也显著增加(t=14.521,P<0.05;t=19.458,P<0.05)。模型Ⅱ组与模型Ⅰ组相比,LPS预处理可显著增加海马TLR4基因在SE后3h的水平(t=2.362,P<0.05),及SE后3hTLR4蛋白表达(t=4.284,P<0.05);且显著增加SE后3h、24hPIκB-α蛋白表达(t=4.249,P<0.05;t=9.120,P<0.05);但对SE后3h、24hHMGB1基因水平无显著性影响(t=0.569,P>0.05;t=0.691,P>0.05),对SE后3h、24hHMGB1蛋白表达也无显著性影响(t=0.168,P>0.05;t=0.385,P>0.05)。结论LPS预处理加重幼鼠癫痫发作,使TLR4/P-IκB-α表达升高,对HMGB1表达无显著改变。

Toll样受体4对人牙周膜成纤维细胞表达p-IRAK1和p-IкB-α的影响

目的:观察Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligamentcells,HPDLCs)在内毒素脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激下表达磷酸化IRAK1(phospho-IRAK1,p-IRAK1)和磷酸化IкB-α(phospho-IкB-α,p-IкB-α)的影响。方法:采用Western印迹和图像分析技术,检测HPDLCs受大肠杆菌LPS(1μg/ml)刺激2.5、5、10和15min后表达p-IRAK1和p-IkB-α的水平;同时检测1∶100滴度的抗TLR4单克隆抗体对HPDLCs在1μg/mlLPS刺激下表达p-IRAK1和p-IкB-α的影响。采用SPSS10.0软件包对结果进行单因素方差分析。结果:LPS刺激HPDLCs 5min后,HPDLCs表达p-IRAK1和p-IкB-α的水平最高,条带灰度与3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)条带的比值分别由0.054、0.19增加到0.785、0.809(P<0.05)。抗TLR4单克隆抗体预处理的HPDLCs在LPS刺激下表达p-IRAK1和p-IкB-α的水平均降低,条带灰度与GAPDH条带的比值分别由0.82、0.874降低到0.099、0.201(P<0.05)。结论:TLR4参与了HPDLCs受LPS刺激后的信号传导过程,可能介导了牙周病的发生和发展。

三叶香茶菜介导IκB-α磷酸化对CCl_(4)致大鼠肝纤维化的影响

目的探讨三叶香茶菜通过影响IκB-α及其磷酸化下调核转录因子(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)信号通路减轻四氯化碳诱导大鼠肝纤维化。方法采用CCl_(4)肝纤维化大鼠模型,生化检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、羟脯氨酸(HYP),ELISA检测转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),荧光定量PCR法检测大鼠肝组织Toll样受体4(TLR_(4))mRNA、NF-κB p65 mRNA、NF-κB抑制蛋白-α(IκB-α)mRNA的表达,Western blot法检测大鼠肝组织中TLR_(4)、NF-κB p65、p-IκB-α蛋白表达,HE染色评价肝组织病理损害。结果与模型组相比较,三叶香茶菜能够显著抑制肝纤维化大鼠中ALT、HYP、TGF-β1、α-SMA、IL-6、TNF-α水平,改善大鼠肝组织病理损害,显著抑制肝纤维化大鼠TLR_(4)mRNA、NF-κB p65 mRNA的表达,上调IκB-αmRNA的表达,下调TLR_(4)、NF-κB p65蛋白表达,下调p-IκB-α蛋白的表达。结论三叶香茶菜下调IκB-α磷酸化,抑制NF-κB信号通路的活化,达到抗肝慢性炎症损伤作用。

因宁片含药血清对T3诱导大鼠肝巨噬细胞NF-κB、IκB-α磷酸化的影响

目的:研究因宁片对体外T3诱导大鼠肝巨噬细胞(RHMa)NF-κB、IκB-α磷酸化水平的影响。方法:通过不同浓度的T3作用于RHMa 24、48 h,MTT法检测其增殖率,Western Blot检测p-NF-κB、p-IκB-α蛋白表达,确定最佳干预浓度和干预时间,选用T3500 nmol/L刺激RHMa细胞24 h后,给予10%因宁片含药血清治疗24 h,检测RHMa细胞中p-NF-κB、p-IκB-α蛋白表达的变化。结果:RHMa的增殖率与T3的浓度呈负相关,p-NF-κB、p-IκB-α蛋白表达量随T3浓度的升高而升高。因宁片含药血清对p-NF-κB和p-IκB-α蛋白表达量的抑制作用呈剂量依赖性。结论:高浓度T3(≥300 nmol/L)对肝巨噬细胞均有直接的毒性作用,低浓度T3(≥50 nmol/L)即能诱导肝巨噬细胞中NF-κB、IκB-α的激活;而因宁片含药血清则能有效抑制肝巨噬细胞中NF-κB、IκB-α的磷酸化,这可能是因宁片治疗甲亢性肝损害的作用机制之一。

LY294002抑制TFF3阳性甲状腺乳头状癌TPC-1细胞恶性生物学行为

目的探讨PI3K/AKT通路抑制剂LY294002对肠三叶因子3(intestinal trefoil factor,TFF3)阳性甲状腺乳头状癌细胞TPC-1恶性生物学行为的影响及机制。方法不同浓度LY294002培养的TFF3过表达甲状腺乳头状癌细胞TFF3-TPC-1为实验组;TFF3-TPC-1细胞株为过表达组;野生型TPC-1细胞株为Control组。倒置显微镜观察各组细胞形态变化;生长曲线检测各组细胞增殖水平;Transwell和划痕实验检测侵袭和迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡比例;Western blot检测与通路和凋亡相关蛋白的表达。结果形态学显示,实验组细胞间隙随LY294002浓度增加而变大,且圆形透亮细胞增多。LY294002呈浓度依赖性地抑制TFF3-TPC-1细胞的增殖、侵袭和迁移并逐渐诱导细胞凋亡(P<0.05或P<0.01)。Western blot显示通路蛋白和抗凋亡蛋白p-Akt、p-IκB-α、NF-κB-p65、Bcl-2随LY294002浓度增加而被下调,促凋亡蛋白IκB-α、cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9、Bax表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论LY294002可有效抑制TFF3阳性TPC-1细胞恶性生物学行为,其机制可能与LY294002通过抑制Akt磷酸化,下调PI3K/AKT通路及下游NF-κB等转录因子活性有关。

食管癌与螺杆菌感染及炎性信号通路关系

目的研究食管癌中是否存在螺杆菌感染及其与炎性信号通路的关系，探讨螺杆菌感染以及所产生的慢性炎症在人食管癌发生发展中的作用。方法随机收集食管癌标本37例和正常食管标本10例，采用聚合酶链反应（PCR）扩增螺杆菌16S rDNA，并进行基因测序及与幽门螺杆菌（Hp）同源性比较。阳性者再扩增Hp特异性毒力基因（cagA，babA2，vacA）。随后将Hp标准株NCTC11639和NCTC11637分别与食管鳞癌细胞株EC109共培养不同的时间，蛋白印迹（Westem blot）检测炎性信号通路中P—IκB—α蛋白表达的变化。结果食管癌组织中螺杆菌16S rRNA基因的检出率为31．6％（12／37），正常人食管组织均元阳性表达。对阳性标本16S rRNA基因测序及同源性比较，食管癌组织中螺杆菌序列与Hp的16S rDNA序列同源性达99％～100％。12例阳性标本中分别有cagA阳性4例，babA2阳性8例，vacA阳性3例，阳性率分别为33％，67％，25％。EC109与Hp标准株共培养不同时间后，P—IκB-α显著升高。结论食管癌组织中存在螺杆菌感染，该螺杆菌可能为Hp或者其他亚种。螺杆菌感染导致食管粘膜慢性炎症在食管癌的发生发展中可能发挥重要的作用，其中P—IκB-α炎性信号通路的持续作用可能为分子机制之一。