VEGF、COX-2和p-KDR在血管瘤中的表达

目的:探讨血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、环氧化酶-2(COX-2)和p-KDR在血管瘤中的表达及作用。方法:采用免疫组织化学SP法、实时定量PCR及Western免疫印迹法检测血管瘤标本、血管畸形标本及正常皮肤组织中VEGF、COX-2和p-KDR的表达,应用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫组织化学检测发现,VEGF、COX-2和p-KDR在血管瘤标本中高表达,其阳性率分别达100%、93.33%和86.67%,且与血管畸形和正常皮肤组织中的表达有显著差异(P<0.05)。实时定量PCR及Western免疫印迹方法检测发现,VEGF、COX-2和p-KDR mRNA及蛋白在血管瘤中的表达显著高于正常皮肤组织。结论:VEGF、COX-2和p-KDR在血管瘤血管内皮细胞上高表达,其相互作用可促进血管瘤增殖。其表达情况为临床治疗血管瘤提供了新的思路。

鼻咽癌KDR受体信号传导相关蛋白的表达及意义

目的分析鼻咽癌组织中KDR及其下游信号分子PKC-β和p-ERK的表达,并探讨上述蛋白表达与鼻咽癌患者临床特征和生存期的关系。方法免疫组织化学法检测110例鼻咽癌和30例鼻咽良性病变石蜡切片中KDR、PKC-β和p-ERK的表达情况,用Spearman法分析它们之间的相关性,Kaplan-Meier法计算生存情况,行Log-rank检验和Cox比例风险模型分析。结果鼻咽癌组织中KDR、PKC-β和p-ERK阳性表达率分别为88.2%(97/110)、63.6%(70/110)和51.8%(57/110),而在鼻咽良性病变阳性表达率低。鼻咽癌组织中KDR表达与PKC-β及p-ERK表达呈正相关(r=0.297,P=0.002;r=0.336,P<0.001),PKC-β表达与p-ERK表达呈正相关(r=0.301,P=0.001)。KDR和p-ERK表达与原发肿瘤的侵犯范围相关(P<0.05);PKC-β和p-ERK表达与临床分期相关(P<0.05);KDR和PKC-β表达与肿瘤局部复发或远处转移相关(P<0.05)。3种蛋白表达均与总生存不佳相关(P<0.05)。Cox多因素相关分析显示年龄>50岁为不良预后因素(P<0.05)。结论 KDR及其下游信号分子PKC-β和p-ERK在鼻咽癌中表达,与鼻咽癌患者的临床特征和预后关系密切。

靶向特定细胞PI3K基因shRNA表达载体的构建及鉴定

目的构建靶向血管平滑肌细胞和内皮细胞磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)基因的短发卡干扰RNA(shorthair-pinRNA,shRNA)表达载体,研究其对上述细胞PI3K基因的靶向沉默作用,探索抑制移植血管狭窄的基因防治手段。方法根据Genbank中大鼠PI3Kp110β亚单位编码基因Pik3cb序列设计并合成两条shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆导入载体pGenesil-10,经荧光定量PCR方法筛选一条较合适的shRNA转录模板;合成血管平滑肌细胞特异性SMHC增强子/SM22α启动子序列和血管内皮细胞特异性KDR增强子/启动子序列,将该增强子/启动子片段亚克隆至pGenesil-10-Pik3cb-shRNA上,构建并鉴定重组质粒载体SMHCe/SM22αp-pGenesil-10-Pik3cb-shRNA(简称SM22αe/pshRNA)和KDRe/p-pGenesil-10-Pik3cb-shRNA(简称KDRe/pshRNA);将重组质粒载体转染血管平滑肌细胞,分别于转染24h、48h、72h后,采用实时荧光定量PCR检测Pik3cb基因mRNA的相对表达量。结果荧光定量PCR检测转染Pik3cb-shRNA-1组与转染Pik3cb-shRNA-2组比较,前者细胞Pik3cbmRNA相对表达量降低更为明显,且两组均较对照组mRNA表达明显减少(P<0.05);酶切鉴定重组质粒载体SM22αe/pshRNA和KDRe/pshRNA构建成功;质粒转染细胞后,Pik3cb基因mRNA相对表达量SM22αe/p质粒组较阴性对照组均有所降低,且转染24h后,SM22αe/p质粒组与空白对照、CMV质粒组比较Pik3cb基因mRNA相对表达量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论选择Pik3cb-shRNA-1作为转录模板,能够成功构建SM22αe/pshRNA和KDRe/pshRNA质粒载体,且特异性启动子SM22α介导的靶向大鼠Pik3cb基因的shRNA质粒载体可有效沉默靶基因在血管平滑肌细胞中的表达。