针刺对卵巢储备功能减退大鼠血清激素及PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达的影响

目的:观察针刺对卵巢储备功能减退(DOR)大鼠血清激素、卵巢形态学变化及卵巢组织中p-PI3K、p-Akt及p-mTOR蛋白表达的影响,探索针刺治疗DOR的可能机制。方法:18只SPF级SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组和针刺组,每组6只;模型组、针刺组采用腹腔注射环磷酰胺制备DOR大鼠模型,空白组仅腹腔注射同等量生理盐水。造模后针刺组取肾俞、关元、中极、气海、太溪、双侧三阴交和双侧子宫穴进行针刺,每次留针20 min,1次/d,连续21 d。空白组、模型组:仅抓取不进行干预,1次/d,连续21 d。观察比较各组间大鼠的血清激素改变情况,HE染色法观察大鼠卵巢形态学改变、卵巢中各级卵泡及黄体的数目变化,颗粒细胞层厚度改变;免疫组织化学法、Western blot法检测卵巢组织中p-PI3K、p-Akt及p-mTOR的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组血清FSH、LH水平升高(P<0.05),血清E2、AMH水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05);卵巢组织中各级卵泡数明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);卵巢组织中PI3K、Akt及mTOR蛋白表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,针刺组血清FSH、LH水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);血清E2、AMH水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);卵巢组织中各级卵泡数明显增多,差异具有统计学意义(P<0.05);卵巢组织中p-PI3K、p-Akt及p-mTOR蛋白表达水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:针刺可以有效改善DOR大鼠卵巢储备功能,促进卵泡数量增加。作用机制可能与针刺调节卵巢组织中p-PI3K、p-Akt及p-mTOR蛋白表达有关。

大鼠心肌肥厚中PTEN,p-PI_3K蛋白表达对心肌纤维化的影响

对健康成年SD大鼠采用皮下注射异丙肾上腺素造成心肌肥厚模型;取心肌组织,常规石蜡切片,Masson染色,观察心肌组织的成纤维细胞变化;免疫荧光染色检测PTEN和p-PI3K的表达及分布.结果与对照组相比,实验组细胞间纤维细胞增多;免疫荧光检测PTEN和p-PI3K的阳性表达明显增高.表明PTEN和p-PI3K蛋白表达增高可能在心肌纤维化的发生和发展过程中起重要作用.

槟榔碱上调高果糖诱导胰岛素抵抗大鼠骨骼肌GLUT-4和p-PI3K的表达

目的探索槟榔碱对高果糖诱导Wistar大鼠胰岛素抵抗的改善作用。方法采用高糖喂养Wistar大鼠建立胰岛素抵抗大鼠模型。实验大鼠随机分成4组:普通饲料对照组(Control)、高果糖模型组(HF)、普通饲料对照+5 mg/kg槟榔碱组(Con+Are)、高果糖+5 mg/kg槟榔碱组(HF+Are)。Western blot检测GLUT-4和p-PI3K的表达。结果与对照组相比高果糖模型组大鼠骨骼肌葡萄糖转运载体4(GLUT4)和磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)的表达是明显降低的,而5 mg/kg槟榔碱能明显上调高果糖模型组GLUT-4和p-PI3K的表达,但对对照组无显著影响。结论 5 mg/kg槟榔碱能上调高果糖诱导胰岛素抵抗大鼠骨骼肌细胞GLUT-4和p-PI3K的表达。

贝伐珠单抗通过调控PI3K/AKT信号通路下调肺腺癌H1299细胞PD-L1表达

目的:探讨贝伐珠单抗(Beva)对人肺腺癌H1299细胞程序性细胞死亡配体1(PD-L1)表达的影响及其可能机制。方法:使用不同浓度Beva(0、5、10、20、40、80μg/ml)作用于H1299细胞36 h、48 h、72 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞PD-L1表达;实验分为:对照组(等量培养液)、Beva组、740-YP(PI3K激活剂)组、LY294002(PI3K抑制剂)组、Beva+740-YP组,流式细胞术检测细胞PD-L1表达,Western blot法检测细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达。结果:(1)Beva能抑制H1299细胞增殖,其作用与剂量有关(P<0.05);(2)随着Beva浓度升高、作用时间延长,H1299细胞PD-L1表达量逐渐减少(P<0.05);(3)PI3K通路抑制剂LY294002处理H1299细胞后PD-L1的表达量显著减少(P<0.01),PI3K通路激活剂740-YP处理H1299细胞后PD-L1的表达量显著增加(P<0.01);(4)Beva处理H1299细胞后PD-L1、p-PI3K、p-AKT的表达显著减少(P<0.05),加入740-YP后可减弱Beva对PD-L1、p-PI3K、p-AKT的抑制作用(P<0.01)。结论:Beva在一定范围内以剂量依赖方式抑制H1299细胞增殖,以时间-剂量依赖方式下调H1299细胞中PD-L1的表达,其机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

紫草素通过PI3K/Akt通路促进人乳腺癌MCF-7细胞自噬

目的研究紫草素(Shikonin)对人乳腺癌MCF-7细胞自噬的影响及其作用机制。方法 CCK-8法检测紫草素处理人乳腺癌MCF-7细胞24、48 h细胞的存活率,Western blot方法检测紫草素处理24 h和48 h时LC3、p62、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白水平。结果 1μmol.L-1紫草素处理细胞48 h以及2.5、5μmol.L-1紫草素处理MCF-7细胞24 h和48 h时,MCF-7细胞的活力受到明显抑制,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值增加,p62表达减少,总PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt均减少。结论紫草素促进乳腺癌MCF-7细胞自噬,其作用机制可能与PI3K/Akt通路受到抑制有关。

PI3K/Akt信号通路及HIF-1α在胃癌中的表达

目的:探讨PI3K、p-Akt及低氧诱导因子-1α(hypoxiainduciblefactor-1a,HIF-1α)在胃癌、癌旁和远癌组织中的表达。方法:收集胃癌切除术患者胃癌、癌旁及远癌组织标本,应用免疫组化法检测PI3K、p-Akt、HIF-1α蛋白的表达。结果:PI3K、p-Akt、HIF-1α蛋白在胃癌组织中表达最强(其灰度值分别为176.3±11.3,158.6±20.1,157.5±12.3),在远癌组表达最弱(196.9±7.4,192.3±8.3,194.2±5.3),在癌旁组表达介于上述两组之间(187.9±5.1,173.9±14.3,176.0±7.4),三组间差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α的表达与PI3K、p-Akt呈正相关(r=0.662,0.674)(P<0.05)。结论:PI3K、p-Akt、HIF-1α在胃癌组织中高表达,且HIF-1α表达与PI3K、p-Akt表达呈正相关。

红景天苷对大鼠脑缺血-再灌注损伤后PI3-K、p-Akt及Caspase-3表达的影响

目的:观察红景天苷对大鼠脑缺血-再灌注损伤后PI3-K、p-Akt及Caspase-3表达的影响。方法:将60只SD雄性大鼠随机分为假手术组12只、脑缺血-再灌注组(模型组)及红景天苷组(10 mg/kg)各24只。采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉缺血-再灌注模型,观察缺血2 h再灌注6 h、12 h、24 h、48 h 4个不同时间点,采用Western Blotting法检测PI3-K、p-Akt及Caspase-3的蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组及红景天苷组4个不同时间点PI3-K、p-Akt、Caspase-3蛋白表达量均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,红景天苷组4个不同时间点PI3-K、p-Akt蛋白表达量均升高,Caspase-3蛋白表达量均减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组及红景天苷组PI3-K、p-AKT蛋白表达趋势均从再灌注6 h开始逐渐升高,24 h达高峰,48 h较24 h下降,但高于12 h;Caspase-3蛋白表达趋势均从再灌注6 h开始逐渐升高,48 h达高峰。结论:红景天苷可能通过激活PI3-K/Akt信号转导通路,上调PI3-K、p-Akt的蛋白表达,抑制Caspase-3的蛋白表达,从而发挥对大鼠脑缺血-再灌注损伤抗凋亡的神经保护作用。

PI3K特异性抑制剂对人大肠癌细胞HCT-8生长的影响

目的:研究PI3K特异性抑制剂LY294002对人大肠癌细胞系HCT-8生长的影响。方法:将对数生长期的HCT-8细胞分组培养,对照组加入不含LY294002的培养液,实验1～4组加入LY294002,其终浓度分别为5、10、20和40μmol/L,培养24、48、72、96h后,MTT法测定细胞增殖抑制率。取传代培养并贴壁的HCT-8细胞分组培养,对照组常规培养,实验组培养液中加终浓度为10μmol/L的LY294002,培养24、48和72h后流式细胞仪检测细胞周期。取对数生长期的HCT-8细胞,对照组常规培养,实验组培养液中加终浓度为10μmol/L的LY294002,培养24h,培养前后,免疫细胞化学SP法检测P-Akt和NF-κB。结果:与对照组比较,随着LY294002剂量、作用时间的增加,对HCT-8细胞增殖抑制率增大(P<0.01)。10μmol/L的LY294002作用于HCT-8细胞,随着作用时间的延长,G0/G1期细胞逐渐增加,S和G2/M期细胞逐渐减少(P<0.05)。对照组培养前后HCT-8细胞P-Akt和NF-κB蛋白表达无明显变化,10μmol/L的LY294002作用后HCT-8细胞P-Akt和NF-κB蛋白表达降低(P<0.01)。结论:LY294002可能通过抑制P-Akt的表达,从而抑制人大肠癌HCT-8细胞的生长。

薄型子宫内膜PI3K、AKT、p-AKT的表达研究

目的研究磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶(AKT)、p-AKT在薄型子宫内膜组织中的表达情况,探索PI3K/AKT信号通路在薄型子宫内膜中作用。方法收集2013年8月至2015年1月妇科子宫内膜40份,正常内膜组20份,薄型内膜组20份。采用RT-PCR检测PI3K、AKT mRNA表达,免疫组化S-P法PI3K、AKT、p-AKT蛋白质表达。结果 PI3K及AKT mRNA和蛋白质表达在薄型内膜组明显降低,2组差异有统计学意义(P<0.05)。pAKT蛋白质表达在薄型子宫内膜组明显降低,2组对比差异有统计学意义(P<0.05)。PI3K、AKT及p-AKT蛋白质表达水平呈正相关(r值分别为0.708、0.651、0.650、0.632、0.611、0.623,P<0.05)。结论薄型子宫内膜组织增殖期PI3K、AKT及p-AKT表达下降,其发生及发展可能与PI3K/AKT信号通路有关。

PI3K/Akt信号通路相关蛋白在胃癌细胞中的表达及其意义

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)信号通路中相关蛋白磷酸化PI3K(phosphorylated phosphoinositide 3-kinase,p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)在胃癌组织中的表达与胃癌相关病理参数之间的关系。方法收集2017年1月至2018年12月南昌大学第二附属医院经胃镜病理确诊为胃癌并行手术切除患者的胃癌标本(n=100)和对应癌旁组织(n=100),以及正常胃黏膜组织(n=48),比较3种组织中p-PI3K和p-Akt的表达情况,探讨PI3K/Akt信号通路相关蛋白与胃癌相关病理参数之间的关系。结果p-PI3K在胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜中的阳性表达率分别为55.0%、23.0%及14.6%;p-Akt在胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜中的阳性表达率分别为29.0%、13.0%及8.3%,胃癌组织中p-PI3K、p-Akt的表达率均显著高于癌旁组织及正常胃黏膜,差异均有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中p-PI3K、p-Akt的表达与患者的年龄、性别无明显相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤病理分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、浸润深度穿透浆膜及淋巴结转移的患者胃癌组织中p-PI3K、p-Akt的阳性率更高(P<0.05)。结论p-PI3K和p-Akt在胃癌组织中高表达,且与胃癌的相关病理参数存在显著相关性,PI3K/Akt信号通路可能参与了胃癌的发生与发展。

嗅三针对SAMP8小鼠海马磷酸化PI3K/Akt蛋白表达和突触可塑性的影响

目的:观察嗅三针对SAMP8小鼠海马磷酸化PI3K、Akt蛋白表达和海马突触可塑性损伤的影响,探讨嗅三针治疗阿尔茨海默病(AD)模型小鼠的作用机制。方法:将40只SAMP8小鼠随机分为模型组(Model)、嗅三针组(XSZ)、嗅神经切断嗅三针组(XSZ+XSJ)和盐酸多奈哌齐组(Donepezil),每组10只,10只SAMR1小鼠作为正常组(Control)。XSZ组和XSZ+XSJ组采用电针刺激印堂穴和双侧迎香穴,Donepezil组采用盐酸多奈哌齐灌胃,Control组和Model组不干预。采用Morris水迷宫实验评价小鼠学习记忆能力,新物体识别实验评价小鼠新物体识别能力,Western Blot和免疫组化检测小鼠海马区p-PI3K和p-Akt蛋白表达,透射电镜观测小鼠海马突触超微结构。结果:与Model组比较,XSZ和Donepezil干预均可以明显降低SAMP8小鼠4d平均逃避潜伏期,增加其靶象限停留时间、穿越平台次数和新物体偏爱指数,明显升高其海马p-PI3K和p-Akt蛋白表达(P<0.05),改善其海马神经元突触结构;XSZ+XSJ对于SAMP8小鼠学习记忆能力、新物体识别能力指标及p-PI3K、p-Akt蛋白表达无显著影响(P>0.05),对其突触结构损伤无明显改善;对于上述指标的影响,XSZ组与Donepezil组比较无显著差异(P>0.05)。结论:嗅三针可能基于嗅觉通路完整性,调节海马PI3K/Akt磷酸化表达,修复海马突触形态结构损伤,改善海马突触可塑性,从而发挥提高SAMP8小鼠学习记忆能力的效应。

基于网络药理学及动物实验研究温肾宣痹汤抗骨质疏松的机制

目的应用网络药理学、分子对接及体内实验技术,预测以及验证温肾宣痹汤(wenshen xuanbi tang,WSXBT)抗骨质疏松(osteoporosis,OP)的作用机制。方法利用网络药理学筛选WSXBT治疗OP的关键成分及核心靶点,Metascape数据库对核心靶点进行基因本体论(gene ontology,GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,AutoDockTools 1.5.7软件进行分子对接模拟关键活性成分与核心靶点的结合活性。切除大鼠双侧卵巢建立OP大鼠模型,研究WSXBT对OP大鼠的药效及验证相关靶点通路。酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中OPG、PINP、RANKL水平,生物力学测试仪测定大鼠股骨生物力学,Micro-CT检测股骨骨密度,进而通过Western blot法检测PI3K和Akt的蛋白表达水平。结果筛选出WSXBT活性成分156个,涉及229个潜在作用靶点,筛选核心靶点23个,共涉及145条信号通路;分子对接结果显示,槲皮素、异补骨脂黄酮、β-谷甾醇等关键成分与PIK3R1、AKT1核心靶点均拥有良好的结合能力。体内实验结果表明,WSXBT可明显升高OP大鼠骨密度,改善OP大鼠骨组织微结构,提高大鼠股骨生物力学,增加大鼠PINP表达及OPG/RANKL比值,Western blot结果显示,WSXBT可明显升高p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值。结论WSXBT可能通过PI3K/Akt信号通路及升高OPG/RANKL比值改善绝经后OP大鼠骨密度。

丹参注射液对AngⅡ诱导NRK-52E细胞损伤的保护作用

目的考察丹参注射液对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞)损伤的保护作用。方法将NRK-52E细胞分为对照组、模型组(AngⅡ)、丹参注射液组(AngⅡ+丹参注射液),MTT法检测其增殖,免疫荧光法与Western blot法分别检测PI3K、p-PI3K蛋白表达。结果与对照组比较,AngⅡ作用24 h后可显著抑制细胞增殖及PI3K、p-PI3K蛋白表达,而丹参注射液均能加以恢复。结论丹参注射液能减轻AngⅡ对NRK-52E细胞的损伤作用,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

火针调控脊髓损伤后神经细胞凋亡靶点的实验研究

目的:观察火针对神经细胞凋亡及其相关靶点关键蛋白表达的影响,探讨火针改善脊髓损伤(SCI)后神经细胞凋亡的机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和火针组,每组分为1 d、3 d、7 d和14 d共4个时点。采用电动颅脑脊髓损伤撞击仪制备SCI模型,对火针组采用相应的干预方法,相应时点进行神经功能评分(BBB)、TUNEL检测和Western-blot检测。结果:BBB行为学评分显示,与假手术组比较,火针组在1 d、3 d、7 d及14 d神经运动功能情况均明显较低,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,火针组在1 d、3 d、7 d及14 d神经运动功能情况均明显较高,差异具有统计学意义(P<0.05)。神经细胞凋亡结果显示,SCI后,与假手术组相比,模型组凋亡细胞明显增多,凋亡指数明显增加;与模型组相比,火针组大鼠脊髓损伤部位凋亡细胞减少,凋亡指数明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且火针组凋亡指数14 d时最低。DAP12、p-PI3K及TGF-β蛋白表达结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠DAP12蛋白相对表达量在各个时点均有增高的趋势,差异无统计学意义(P>0.05),与模型组比较,火针组在各个时点DAP12蛋白相对表达量有增高的趋势,7 d时增加最明显,差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,模型组p-PI3K蛋白相对表达量在各个时点均有增高的趋势,仅在1 d时差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,火针组在1 d、3 d和14 d时p-PI3K蛋白相对表达量降低,在7 d时p-PI3K蛋白相对表达量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组在1 d、7 d与14 d时TGF-β蛋白表达量均增高,仅在14 d时差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,火针组在3 d、7 d时TGF-β蛋白表达量高于模型组,但仅在3 d时差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:火针能调控SCI后p-PI3K、TGF-β及DAP12蛋白的表达,从而改善神经细胞凋亡,促进SCI后神经运动功能恢复。

地塞米松增强L02细胞P-糖蛋白的表达作用机制的初步研究

目的探讨地塞米松对人正常肝细胞株L02细胞P-糖蛋白(P-gp)表达的影响,以及磷酸肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)途径在调控P-gp表达中的作用。方法采用Western blot检测体外培养L02细胞P-gp与Akt的表达水平,比较经地塞米松、PI3K/Akt酶抑制剂LY294002及两者联合处理24 h前后L02细胞P-gp表达水平的变化及地塞米松处理24 h前后L02细胞Akt表达水平的差异,分析L02细胞P-gp表达与PI3K/Akt表达之间的关系。结果 10μmol/L地塞米松刺激24 h后L02细胞P-gp及Akt表达水平较刺激前分别显著增加60.8%(P=0.026 7)和25.0%(P=0.035 8);L02细胞中P-gp表达水平与Akt表达水平之间呈显著正相关(Pearson系数=0.87,P<0.01);LY294002(20μmol/L)处理组L02细胞P-gp表达水平较对照组(未处理组)显著降低33.8%(P=0.018 4);地塞米松单独处理组和地塞米松与LY294002联合处理组L02细胞P-gp表达水平分别是对照组的(163.5±18.4)%和(130.1±22.0)%,两者间相差显著(P=0.031 3)。结论地塞米松可能通过激活PI3K/Akt途径诱导L02细胞P-gp增强表达。

盐酸石蒜碱对脂肪酸诱导H9c2细胞炎性损伤的保护作用及其机制

目的:研究盐酸石蒜碱(lycorine hydrochloride)对脂肪酸诱导H9c2细胞炎性损伤的保护作用及机制。方法:脂肪酸(100μmol/L)诱导H9c2细胞炎性损伤,采用CCK-8法筛选盐酸石蒜碱最佳给药浓度;蛋白免疫印迹法检测TLR4、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达;荧光显微镜及流式细胞术检测H9c2细胞内活性氧(ROS)产生水平。结果:CCK-8筛选出盐酸石蒜碱的最佳给药浓度为5、10μmol/L。与正常对照组比较,模型组TLR4蛋白表达及p-PI3K/PI3K、ROS水平显著升高,p-Akt/Akt显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,盐酸石蒜碱组TLR4蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR、ROS水平显著降低,p-Akt/Akt水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:盐酸石蒜碱对脂肪酸诱导H9c2细胞炎性损伤具有保护作用,其机制可能与抑制TLR4、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达,促进Akt蛋白磷酸化,抑制炎性损伤H9c2细胞内ROS的产生有关。

槲皮素影响胃癌细胞增殖并诱导细胞凋亡的研究

目的针对槲皮素的抗癌功效,研究不同浓度槲皮素对胃癌细胞SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响以及对p-PI3K信号蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的作用。方法不同浓度的槲皮素(0、20、40、60、80、100μmol)干预细胞后,采用CCK-8法检测SCG-7901细胞增殖情况,采用hoechst 33342染色,观察细胞核变化,流式细胞凋亡分析槲皮素对细胞凋亡的影响,以及Western Blotting检测槲皮素对p-PI3K和Bcl-2蛋白表达的影响。结果槲皮素对胃癌细胞SGC-7901的活性具有抑制效应,且这种效应呈现浓度依赖性;荧光显微镜下观察到随着槲皮素浓度的增高,细胞核发生皱缩、核裂变,DNA出现片段化、染色质固缩、染色加深、染色质形态改变等现象。流式细胞凋亡实验证实槲皮素对胃癌SGC-7901具有诱导细胞凋亡的作用,Western Blotting实验发现槲皮素能抑制胃癌细胞SGC-7901内p-PI3K和Bcl-2蛋白的表达。结论上述结果表明槲皮素能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,并能调节p-PI3K和Bcl-2蛋白的表达,其可以作为抗胃癌细胞活性的药物进行药物靶点研究。

二氢石蒜碱对棕榈酸诱导H9c2细胞炎性损伤的保护作用及其机制

目的:研究二氢石蒜碱对棕榈酸诱导H9c2细胞炎性损伤的影响并探讨其机制。方法:建立棕榈酸诱导H9c2细胞炎性损伤细胞模型,采用CCK-8法筛选二氢石蒜碱的最佳给药浓度。将培养的H9c2细胞随机分为正常对照组、模型组、LY294002组、雷帕霉素组及二氢石蒜碱低、中、高浓度组。蛋白免疫印迹法检测H9c2细胞中TLR4、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达;免疫荧光染色及流式细胞术检测二氢石蒜碱对棕榈酸诱导H9c2细胞内活性氧(ROS)产生水平的影响。结果:采用棕榈酸100μmol/L建立H9c2细胞炎性损伤模型,CCK-8实验筛选出二氢石蒜碱组在1、10、50μmol/L下细胞存活率都在80%以上,分别确定为低、中、高给药浓度。蛋白免疫印迹实验表明,二氢石蒜碱预处理能显著下调棕榈酸诱导下H9c2细胞的TLR4、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达,上调p-AKT蛋白表达(P<0.05或P<0.01),其作用呈浓度依赖性;PI3K/AKT抑制剂LY294002可抑制p-AKT蛋白表达,mTOR抑制剂雷帕霉素可抑制p-mTOR蛋白表达(P<0.01)。免疫荧光染色及流式细胞术结果表明二氢石蒜碱对炎性损伤H9c2细胞内ROS产生有显著的抑制作用(P<0.01)。结论:二氢石蒜碱对棕榈酸诱导的H9c2细胞炎性损伤具有保护作用,其机制可能与抑制TLR4、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达,促进AKT蛋白磷酸化,抑制炎性损伤H9c2细胞内ROS的产生相关。