TβR1和p-Smad2/3蛋白在哈萨克族食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨TGF-β信号通路关键分子转化生长因子β-1型受体(transforming growth factor-βreceptor 1,TβR1)和磷酸化Smad2/3(phosphorylated Smad2/3,p-Smad2/3)蛋白在哈萨克族(哈族)食管鳞状细胞癌(鳞癌)中的表达及其临床意义。方法采用GEO和TCGA数据库分析食管鳞癌标本与癌旁正常组织中TβR1和p-Smad2/3的表达;运用免疫组织化学技术检测127例哈族食管鳞癌组织和82例癌旁正常组织中TβR1和p-Smad2/3的蛋白表达状况,分析及探讨TβR1、p-Smad2/3蛋白表达水平与哈族食管鳞癌患者临床病理参数及预后的关系。结果TβR1和p-Smad2/3蛋白在哈族食管鳞癌中表达上调(P=4.79×10^(-7);P=2.21×10^(-9)),且两者的表达呈正相关(r=0.322,P=0.002);TβR1、p-Smad2/3蛋白表达水平与食管鳞癌的浸润深度密切相关(P=0.003;P=0.005),且有淋巴结转移的样本中TβR1、p-Smad2/3蛋白表达水平明显高于无淋巴结转移的样本(P=0.028;P<0.001),而TβR1、p-Smad2/3蛋白表达与食管鳞癌患者年龄、性别和肿瘤分化程度无明显相关(均P>0.05);Kaplan-Meier生存分析显示TβR1和p-Smad2/3蛋白高表达食管鳞癌患者生存时间明显短于低表达患者(P=0.0013;P=0.0017)。结论TβR1和p-Smad2/3蛋白表达与哈族食管鳞癌患者的肿瘤浸润深度、淋巴结转移及预后密切相关。

发酵虫草菌粉Cs-4对UUO大鼠肾间质p-Smad2/3表达的影响

目的通过发酵虫草菌粉Cs-4干预UUO大鼠模型,动态观察TGF-β1、p-Smad2/3在梗阻侧肾组织中的表达。方法54只雄性SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组和Cs-4治疗组。于术后第7、14、21 d每组分别处死6只大鼠。HE、PAS、Masson染色观察肾间质纤维化指数,免疫组织化学染色法检测肾间质中COL-IV、TGF-β1和p-Smad2/3蛋白的表达,RT-PCR法检测肾组织TGF-β1mRNA的表达。结果Cs-4治疗组肾小管间质纤维化指数、肾间质COL-IV、TGF-β1和p-Smad2/3的蛋白表达以及肾组织TGF-β1的mRNA表达均较模型组明显降低。结论Cs-4能通过抑制小管间质中的细胞内TGF-β依赖性Smad信号通路延缓肾间质纤维化的进展。

化瘀泻浊方对肾间质纤维化实验大鼠TGF-β1、p-Smad2/3的影响

目的:观察化瘀泄浊方对肾间质纤维化实验大鼠TGF-β1、p-Smad 2/3的影响。方法:选用健康、雌性SD大鼠50只,用单侧输尿管结扎方法复制大鼠肾间质纤维化模型,将其随机分为缬沙坦组[给予缬沙坦5.3mg/(kg.d)经口灌服]、化瘀泄浊方组[化瘀泄浊方5.7g/(kg.d)经口灌服]、阿魏酸哌嗪分散片组[给予阿魏酸哌嗪分散片6.7mg/(kg.d)]与模型组[给予同等量生理盐水经口灌服],并设假手术组,每组10只大鼠。行HE、Masson染色观察实验大鼠梗阻侧肾脏组织形态学改变并用免疫组化方法检测观察实验大鼠梗阻侧肾脏转化生长因子-β1(TGFβ1)及p-Smad 2/3在蛋白水平的表达。结果:模型组及各治疗组与假手术组相比均呈现程度不同的病理损害,梗阻肾间质TGFβ1、p-Smad 2/3蛋白的表达也增加(P<0.05)。各治疗组与模型组比较,TGFβ1、p-Smad 2/3表达明显减少(P<0.05)。治疗各组间比较,化瘀泄浊方组优于阿魏酸哌嗪分散片组(P<0.05),其他各组间均无明显差异(P>0.05)。结论:输尿管梗阻后肾组织呈现程度不同的病理损害,肾纤维化面积明显增加,这可能与TGFβ1、p-Smad 2/3表达增加有关,化瘀泄浊方对其有一定的抑制作用。

皮肤纤维瘤中Smad1/2/3、p-Smad2/3和Smad4蛋白质表达的检测

目的:探讨转化生长因子β(TGF-β)信号转导途径中Smad1、Smad2、Smad3(Smad1/2/3),磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)和Smad4蛋白在皮肤纤维瘤中的表达特点及其意义。方法:采用EliVisionTMplus免疫组化技术检测皮肤纤维瘤与正常对照皮肤中Smad1/2/3、p-Smad2/3和Smad4的表达情况。结果:与正常皮肤相比,Smad1/2/3、p-Smad2/3和Smad4蛋白在皮肤纤维瘤的增殖表皮中表达下调,但在真皮内瘤体中大量增殖的梭形细胞中表达却显著上调。结论:皮肤纤维瘤瘤体中梭形细胞Smad1/2/3、p-Smad2/3和Smad4蛋白表达上调可促进TGF-β信号转导,有助于皮肤纤维瘤中纤维增殖状态的形成。

PPM1A和P-Smad2在原发性肝癌中表达及意义研究

目的探讨肝癌及癌旁组织中P-Smad2蛋白与PPM1A的表达及意义。方法采用免疫组织化学技术检测31份肝癌(HCC)、25份癌旁组织及13份非癌性肝组织中P-Smad2蛋白和PPM1A的表达。结果①癌旁和病理分级小于Ⅱ级的癌组织中PPM1A表达以核为主,胞浆表达弱或不表达,病理分级大于Ⅲ级及以上的癌细胞中则以胞浆表达为主,正常、慢性肝炎和肝硬化组织中,PPM1A表达以核为主,胞浆无表达,差别有统计学意义(P<0.05)。②P-Smad2在正常肝细胞、慢性肝炎、肝硬化、癌旁和病理分级Ⅰ-Ⅱ级的癌组织中表达以胞核和胞浆明显,胞浆表达主要聚集在核周,病理分级分级Ⅱ-Ⅲ级及以上的癌组织中,P-Smad2表达则以核为主,差别有显著性(P<0.05)。③PPM1A和P-Smad2在癌组织的表达部位呈现负相关性(r=-0.345,P=0.001)。结论PPM1A与P-Smad2在肝癌组织的胞核和胞浆表达转位及强度与其组织病理改变有密切关系,二者可能通过其相互作用,共同参与肝癌的发生发展机制。

培哚普利对糖尿病大鼠肾组织内p-smad2及Ⅳ型胶原表达的影响

目的探讨血管紧张素转化酶抑制剂培哚普利对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型肾组织Smad2活化形式p-smad2及Ⅳ型胶原蛋白表达的影响。方法链脲佐菌素诱导的16只糖尿病大鼠模型,随机分为模型组和培哚普利治疗组,另以8只正常大鼠作为对照组。于24周末观察血糖、血压、24 h尿蛋白、肾重/体重。免疫组织化学检测肾组织p-smad2、Ⅳ型胶原蛋白表达。Western-blot检测大鼠肾组织p-smad2蛋白表达水平。结果模型组和治疗组血糖明显高于正常组,但治疗组和模型组差异无显著性,模型组尿白蛋白水平均显著高于正常组,治疗组尿蛋白较模型组显著降低。免疫组化半定量结果示p-smad2蛋白在培哚普利治疗组较模型组表达显著减少,Ⅳ型胶原在培哚普利治疗组较模型组表达显著减少。Western-blot示p-smad2在治疗组较模型组显著减少。结论培哚普利可以通过影响糖尿病大鼠肾脏内Smad2活化,从而下调Ⅳ型胶原表达来延缓糖尿病纤维化进程。

Smad3基因敲除小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的变化

目的：观察Smad3基因敲除小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的变化，探讨Smad3基因敲除小鼠肾是否有Smad2和p-Smad2代偿性增加。方法：4只Smad3基因敲除小鼠，10只野生型小鼠，应用免疫组织化学显色技术，检测Smad2和矿Smad2蛋白的定位和表达情况，并用Modc病理图像分析系统对图像进行半定量分析。结果：野生型小鼠肾Smad2蛋白在肾远端小管和肾集合管细胞胞质中有广泛弱表达，p-Smad2蛋白在肾远端小管和肾集合管细胞胞质、胞核中也有弱表达，而Smad3基因敲除小鼠的Smad2和p-Smad2的表达比野生型小鼠有显著升高。结论：Smad3基因敲除能引起小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的代偿性增加。

益肾化瘀方含药血清对NRK52E细胞转分化过程中p-Smad2/3、Smad7表达的影响

目的:观察益肾化瘀方含药血清对TGF-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞(NRK52E)转分化过程中p-Smad2/3、Smad7表达的影响。方法:将体外培养的NRK52E细胞随机分为6组:正常对照组,TGF-β1刺激组,5%、10%、20%益肾化瘀方含药血清组,缬沙坦含药血清组,培养48h后取出。观察各组细胞形态变化,采用免疫细胞化学法检测NRK52E细胞p-Smad2/3、Smad7的表达。结果:NRK52E细胞经TGF-β1刺激后,失去原有的铺路石样形态,拉长增大呈梭形,而与益肾化瘀方含药血清共同作用后,细胞形态有所修复,细胞梭形改变减轻;免疫组化显示与正常对照组比较,TGF-β1刺激组细胞p-Smad2/3核表达明显增强(P<0.01),Smad7表达却减弱(P<0.01)。而各药物干预组与单纯TGF-β1刺激组相比,p-Smad2/3的表达随药物浓度增加呈下降趋势(P<0.01),而Smad7表达的阳性率明显增强(P<0.01)。其中20%益肾化瘀方含药血清组与缬沙坦含药血清组的表达无显著差异。结论:益肾化瘀方含药血清通过抑制Smad2/3的磷酸化,上调Smad7表达,显示出对TGF-β1刺激的NRK52E细胞转分化过程的阻抑作用,并与剂量呈正相关。

TGF-βⅡ受体和磷酸化Smad2蛋白在食管癌中的表达及意义

目的探讨转化生长因子β-Ⅱ型受体(TβRⅡ)和磷酸化Smad2(P-Smad2)蛋白在食管癌发生和发展中的作用。方法应用Western blot技术对38例手术切除的食管癌标本和12例癌旁组织中的TβRⅡ、P-Smad2的表达进行检测。结果食管癌中TβRⅡ、P-Smad2的表达明显低于癌旁组织,具有显著性差异(P<0.05);但TβRⅡ、P-Smad2的表达在不同临床病理特征(年龄、性别构成比、组织分化程度、有无淋巴结转移)中差异均无统计学意义(P>0.05)。结论食管癌组织中存在TβRⅡ和Smad2的蛋白表达异常,可能与食管癌的发病有关。

Smad2/3与Smad7在大鼠化疗性卵巢早衰卵泡中的表达和意义

目的探讨顺铂对大鼠卵巢结构和功能损伤的影响及其可能的分子机制。方法 3月龄SD雌性大鼠随机分为对照组(C组,5只)和化疗组(H组,5只)。H组给予每只大鼠腹腔注射顺铂2 mg/(kg.d),C组给予腹腔注射等体积生理盐水,连续注射7 d后检测大鼠卵巢指数(卵巢湿重/体重);酶联免疫吸附法检测血清雌二醇(E2)和促卵泡刺激素(FSH)水平;苏木素-伊红染色观察卵泡发育并计数各级卵泡;免疫组织化学和Real-time PCR法检测各组Smad2、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad3、磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad4和Smad7的蛋白和mRNA表达。结果与C组相比,H组大鼠卵巢体积减小,生长卵泡数明显减少(P<0.05),大鼠卵巢指数下降(P<0.05),血清中E2水平降低和FSH水平上升(P<0.05)。免疫组织化学和Real-time PCR结果显示,Smad2(p-Smad2)、Smad3(p-Smad3)、Smad4和Smad7蛋白在卵巢各级卵泡均有表达,H组Smad2蛋白和mRNA表达增加(P<0.05),Smad2磷酸化水平(p-Smad2)表达增高(P<0.05);Smad3、Smad4和Smad7蛋白和mRNA表达减少(P<0.05),p-Smad3表达降低(P<0.05)。结论顺铂诱导大鼠卵泡损伤并促进卵巢早衰,引起卵泡细胞内Smad2表达增加,Smad3、Smad7表达降低,Smad细胞内信号通路参与了化疗性卵巢损伤的过程。

烟草烟雾通过TGF-β1/Smad2通路诱导RLE-6TN发生上皮间质转化

目的:探讨烟草烟雾提取物(Cigarette smoke extract,CSE)在诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞RLE-6TN发生上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用及机制。方法:以不同浓度(0.25%,0.5%及1%)CSE刺激RLE-6TN细胞株;TGF-β1受体抑制子(SB431542)预处理后,加入1%CSE共培养。实时定量PCR(RT-PCR)检测E-cadherin和Vimentin RNA表达;印迹法(Western blot)检测TGF-β1、Smad2、磷酸化的Smad2(p-Smad2)、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达量。结果:经不同浓度的CSE作用,E-cadherin无论是在RNA还是在蛋白水平表达均下调,而Vimentin表达均上调;同时,TGF-β1、p-Smad2和N-cadherin蛋白表达量增加;TGF-β1受体抑制子(SB431542)干预后,p-Smad2表达量明显降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量较对照组明显增加(P<0.05),N-cadherin和Vimentin蛋白表达量较对照组明显降低(P<0.05)。结论:CSE可能通过激活TGF-β1/Smad2信号通路,参与调节E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达,从而诱导RLE-6TN发生EMT。

TGF-β/Smad信号通路在类风湿性关节炎相关的间质性肺纤维化小鼠中的作用

目的研究TGF-β/Smad信号通路在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)相关的间质性后肺纤维化小鼠中的作用。方法通过小鼠尾根部皮下给药完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,CFA)与鸡Ⅱ型胶原蛋白(chickenⅡcollagen,Col-Ⅱ),构建RA小鼠模型。空白组给等量蒸馏水,对照组给等量冰醋酸(溶媒)。监测小鼠足趾肿胀程度(关节肿胀度与关节炎指数)评价小鼠建模情况;通过HE、Masson染色观察小鼠肺组织病理变化;免疫组化法观察肺间质细胞的胞质中TGF-β表达;采用化学发光法测量肺组织中羟脯氨酸水平;Western blot检测肺组织中Smad2、Smad3及p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结果与空白组、溶媒组相比,模型组小鼠关节肿胀、关节炎指数明显升高;给药21 d后,HE染色显示模型组肺间质有炎性改变,Masson染色显示模型组小鼠肺间质胶原纤维沉积,免疫组化染色显示模型组小鼠肺间质细胞的胞质中TGF-β表达升高,呈棕黄色;同时,与空白组、溶媒组相比,模型组肺组织匀浆显示羟脯氨酸表达明显升高;且进一步Western blot研究发现,与空白组、溶媒组相比,p-Smad2与p-Smad3在模型组中表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论RA可导致肺组织纤维化,p-Smad2与p-Smad3表达上调,在肺纤维化和RA相关的间质性后肺纤维化中起重要作用。

脂溢性角化病、基底细胞癌和鳞状细胞癌中几种Smad蛋白质表达的检测

目的:探讨转化生长因子(TGF)-β信号转导途径中Smad1、Smad2、Smad3(Smad1/2/3),磷酸化Smad2,磷酸化Smad3(p-Smad2/3)和Smad4蛋白在脂溢性角化病、基底细胞癌和鳞状细胞癌中的表达特点及其意义。方法:采用EliVisionTMplus免疫组化技术分别检测脂溢性角化病、基底细胞癌、鳞状细胞癌以及正常对照皮肤中Smad1/2/3、p-Smad2/3、和Smad4的表达情况。结果:Smad1/2/3、p-Smad2/3和Smad4蛋白在脂溢性角化病、基底细胞癌和鳞状细胞癌中的表达较正常表皮显著降低。结论:脂溢性角化病、鳞状细胞癌和基底细胞癌中Smad1/2/3、p-Smad2/3和Smad4蛋白表达降低可能通过阻断TGF-β信号转导,有助于上述表皮肿瘤的形成和发展。

金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路及其转分化的影响

为探索金黄色葡萄球菌(S.aureus)对奶牛乳腺成纤维细胞(BMFB)TGF-β1/Smad信号通路及其转分化的影响,用热灭活金黄色葡萄球菌(0、10~4、10~5、10~6、10~7和10~8 CFU·mL^(-1))刺激BMFB,24h后采用Real-time PCR方法检测TGF-β1、α-SMA和collagen-ⅠmRNA的转录量,Western blot方法检测α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3蛋白的表达量。使用TGF-β1受体特异性抑制剂SB-431542预处理细胞,再用10~5 CFU·mL^(-1)热灭活金黄色葡萄球菌刺激细胞,24h后采用Real-time PCR方法检测α-SMA和collagen-ⅠmRNA的转录量,Western blot方法检测α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3蛋白的表达量,免疫荧光法检测collagen-Ⅰ蛋白的表达量。结果显示,不同浓度热灭活金黄色葡萄球菌处理细胞的TGF-β1mRNA的转录量显著升高(P<0.05或P<0.01),其中以10~5CFU·mL^(-1)刺激组的TGF-β1mRNA的转录量最高。不同浓度灭活的金黄色葡萄球菌处理细胞的α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3的表达量均能显著升高(P<0.05或P<0.01),其中以10~5 CFU·mL^(-1)刺激组的α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3的表达量最高。抑制剂SB-431542能够极显著抑制α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3的表达量(P<0.01)。结果提示,金黄色葡萄球菌能够通过TGF-β1/Smad信号通路诱导奶牛乳腺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞,本研究为揭示金黄色葡萄球菌性乳腺炎发生硬化的机制奠定基础。

寻常性银屑病皮损表皮中TGF-β受体活化Smad蛋白表达的检测

目的:探讨转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β受体活化Smad——[Smad1、Smad2、Smad3(Smad1/2/3)]和磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)蛋白在寻常性银屑病皮损中的表达及其意义。方法:采用EliVision法免疫组化技术分别检测寻常性银屑病皮损与正常对照皮肤中Smad1/2/3和p-Smad2/3蛋白的表达情况。结果:与正常对照皮肤相比,Smad1/2/3和p-Smad2/3蛋白在寻常性银屑病皮损表皮中的表达显著降低。结论:寻常性银屑病皮损表皮中Smad1/2/3和p-Smad2/3蛋白表达降低,可通过阻断TGF-β信号转导,有助于寻常性银屑病皮损角质形成细胞过度增殖状态的发生和发展。

慢性胰腺炎模型大鼠转化生长因子β1/Smads通路被秋水仙碱的抑制

背景:胰腺星状细胞内转化生长因子β1/Smads信号通路活化可能是导致胰腺组织纤维化的主要分子学机制。如能阻断这一通路,就可能抑制慢性胰腺炎组织的纤维化进程。目的:探讨秋水仙碱对慢性胰腺炎模型大鼠转化生长因子β1/Smads通路的抑制作用。方法:健康雄性SD大鼠随机分为慢性胰腺炎组及秋水仙碱干预组,慢性胰腺炎造模成功后,秋水仙碱干预组大鼠每日腹腔内注射秋水仙碱150μg/kg,慢性胰腺炎组则每日腹腔内注射等体积的生理盐水。3个月后取胰腺组织,苏木精-伊红染色观察胰腺组织的病理学改变,免疫组化观察胰腺组织转化生长因子β1表达,Western blot法测定胰腺星形细胞内P-Smad2、P-Smad3、α-SMA蛋白表达水平。结果与结论:苏木精-伊红染色结果显示:与秋水仙碱干预组相比,慢性胰腺炎组胰腺组织内腺体组织减少,而纤维结缔组织、炎细胞明显增多并取代胰腺腺体组织。免疫组化结果显示:秋水仙碱干预组胰腺组织内转化生长因子β1阳性表达级别和阳性细胞指数显著低于慢性胰腺炎组(P<0.05)。Western blot结果显示:慢性胰腺炎组胰腺星形细胞内P-Smad2/β-actin、P-Smad3/β-actin、α-SMA/β-actin表达明显低于秋水仙碱干预组(P<0.05)。结果提示秋水仙碱可以抑制慢性胰腺炎大鼠转化生长因子β1/Smads信号通路及胰腺组织纤维化。因此,秋水仙碱可作为治疗慢性胰腺炎纤维化的一种新的候选方案。

miR-486在低氧诱导肺间质纤维化中的调控作用及机制

目的探索低氧对人胚肺成纤维细胞(MRC5细胞)miR-486表达的调控作用,明确miR-486在低氧相关肺间质纤维化的发病中的调控作用及机制。方法将MRC5细胞进行低氧处理,利用qRT-PCR法检测miR-486、纤维连接蛋白(FN)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况,用Western blot检测p-SMAD2及内参GAPDH蛋白的表达。用慢病毒技术将miR-486过表达或沉默后用qRT-PCR检测FN、α-SMA、胶原蛋白I型(CollagenⅠ)及CollagenⅢ的表达情况,用Western blot检测p-SMAD2及GAPDH蛋白的表达。结果低氧可抑制MRC5细胞中miR-486的表达,而促进FN、α-SMA及p-SMAD2的表达;过表达miR-486促进MRC5细胞miR-486的表达,而下调FN、α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ及p-SMAD2的表达;与之相反,沉默miR-486可以抑制MRC5细胞miR-486的表达,促进FN、α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ及p-SMAD2的表达。结论低氧可能通过调控miR-486影响p-SMAD2的表达,参与肺间质纤维化发病过程。

丹皮酚联合三七总皂苷对AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响

目的探讨丹皮酚联合三七总皂苷应用对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响。方法采用胰酶消化法分离培养的CFs随机分为6组:正常对照组,模型组,三七总皂苷组,丹皮酚组,丹皮酚与三七总皂苷联合用药大、小剂量组。采用MTT比色法测定各组培养液中CFs增殖情况,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平,RTPCR法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,Tgfb1)的mRNA表达水平,Western blot法检测TGF-β1、磷酸化的Smad2/3(p-Smad2/3)的蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠CFs增殖明显增高,Tgfb1的mRNA表达显著增加,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著增加;与模型组比较,丹皮酚组、三七总皂苷组、联合用药的大剂量和小剂量组均可抑制由AngⅡ诱导的CFs的增殖,Tgfb1的mRNA表达显著减少,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著减少;与丹皮酚组、三七总皂苷组比较,联合用药大、小剂量组在抑制CFs增殖的作用上显著增强,抑制Tgfb1的mRNA表达效果显著增强,抑制α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达效果显著增强;与联合用药小剂量组比较,联合用药大剂量组对以上指标的抑制效果更佳,显示一定的剂量依赖性。结论丹皮酚与三七总皂苷联合应用对抑制CFs增殖,呈现明显的协同作用。其作用机制与抑制TGF-β/Smads信号通路的传导有关。

地西他滨抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的实验研究

目的探讨地西他滨对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达的影响。方法 CCK8法检测不同浓度地西他滨对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响。Western blotting检测药物作用前后瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、Smad4、Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)和Ⅲ型胶原α1链(COL3A1)的表达;采用免疫共沉淀法及Smad4 siRNA转染研究p-Smad2/3-Smad4共聚体在瘢痕疙瘩形成中的作用,Real-time PCR检测下游转录因子的表达情况。结果 CCK8法检测结果显示:干预后48 h,随着地西他滨浓度的升高,成纤维细胞生长抑制率总体呈上升趋势,实验选择半数抑制浓度4.38μmol/L作为地西他滨对耳垂瘢痕疙瘩成纤维细胞的干预浓度。药物干预后,瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1、p-Smad2/3、COL1A1和COL3A1表达及p-Smad2/3-Smad4共聚体形成显著减少。Smad4被沉默后,瘢痕疙瘩成纤维细胞COL1A1表达减少,转录因子c-jun、runx2、irf-7 mRNA的表达下调。结论地西他滨抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,使胶原蛋白合成受限,其机制可能与抑制Smad2/3的磷酸化及p-Smad2/3-Smad4蛋白复合体的形成有关。

五味子乙素减轻博莱霉素诱导的肺纤维化

[目的]观察五味子乙素对小鼠肺纤维化的保护作用,并初探其可能的作用机制。[方法]将96只小鼠随机分为4组:空白对照(N)组,模型(M)组,地塞米松(DM)组,五味子乙素(Sch-B)组,每组24只。N组气管内滴入0.9%氯化钠注射液,其余各组小鼠经气管给予博莱霉素溶液建立肺纤维化模型。造模后第2天,N组和M组每日灌胃给予橄榄油,DM组给予地塞米松腹腔注射3 d,Sch-B组灌胃给予五味子乙素治疗。各组分别于治疗后第7、14、28天随机处死8只,进行肺组织苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察小鼠肺组织病理形态变化,用酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测小鼠血清中白介素-6(IL-6)水平,试剂盒检测肺组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和羟脯氨酸(HYP)含量,用免疫组化检测肺组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化Smad2(p-Smad2)以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达量来评价治疗效果。[结果]Sch-B组小鼠肺泡炎及肺纤维化程度较M组均明显减轻(P<0.05),血清中IL-6水平明显下降(P<0.05),抗氧化指标较M组有所升高(P<0.05),肺组织TGF-β1、pSmad2及α-SMA蛋白表达明显减少(P<0.05)。[结论]五味子乙素能减轻小鼠肺纤维化程度,可能是通过减轻炎症反应,增强机体抗氧化能力和通过调节TGF-β1、p-Smad2和α-SMA蛋白发挥作用。