超临界CO_2萃取红景天中红景天苷、苷元酪醇的研究

采用超临界CO2 萃取法和乙醇常温浸提法相比较 ,研究从红景天中提取红景天苷、苷元酪醇的工艺条件 ,结论是 :采用超临界CO2 萃取法能萃取出红景天生药中红景天苷的 1 .2 % ,提取率不高 ,但该方法能萃取出80 %的苷元酪醇 ,萃取液中苷元酪醇的相对含量可达 45 .68% ;乙醇常温浸提法能将红景天苷、苷元酪醇同时有效萃取 ,且得率较高 ,但是萃取液中两物质相对含量较低 ,进一步分离纯化将有难度。本研究结果表明 ,将超临界CO2 萃取法和乙醇常温浸提法有效结合 ,可实现两物质的有效分离 ,推进红景天有效成分的产业化进程。

红景天注射液中红景天苷和酪醇的定性定量分析

目的:建立红景天注射液中的红景天苷和酪醇的定性定量分析方法。方法:采用薄层色谱法对红景天注射液中的红景天苷和酪醇进行鉴别:采用高效液相色谱法对红景天苷和酪醇进行含量测定。结果:薄层鉴别斑点清晰,重现性好。高效液相色谱法测定红景天苷和酪醇的平均回收率分别为97.6和99.1(n=5),RSD分别为1.10和2.69。结论:本实验所建立的分析方法简便,灵敏,可靠,可作为红景天注射液中红景天苷和酪醇的定性定量分析方法。

内生真菌ZPRa-R-1对红景天中关键信号分子及主要次生代谢物的影响

研究内生真菌ZPRa-R^(-1)对大花红景天组培苗中信号分子NO,SA和H_2O_2,及主要次生代谢物酪醇(p-tyrosol)和红景天苷(salidroside)积累的影响。分别采用Greiss试剂法、RP-HPLC荧光法、硫酸钛法检测NO,SA和H_2O_2等信号分子;采用分光光度法检测关键酶PAL和CA4H的活性;采用RP-HPLC检测酪醇和红景天苷。ZPRa-R^(-1)接种于红景天,首先引起宿主信号分子NO含量增高,其次是SA和H_2O_2,它们达到最大值的时间分别是共生后第8,10和12 d,含量分别为0.193μmol·g^(-1),0.062μg·g^(-1),0.092μmol·g^(-1);关键酶PAL和CA4H活性最大值分别为166.400 U·g^(-1)和0.625 U·g^(-1)·h^(-1),分别是对照组的8和1.5倍,最终引起酪醇和红景天苷的积累效应,在第8和10 d达到最大值,含量分别为8.656和0.498 mg·g^(-1),是对照组的7和2.8倍。研究结果表明内生真菌ZPRa-R^(-1)能通过诱导激活宿主信号分子网络系统,引起关键酶活性的变化,进而调控酪醇和红景天苷等次生代谢物的积累。

红景天中红景天苷和酪醇提取工艺研究

目的:优选红景天中红景天苷和酪醇的提取工艺。方法:采用L9(34)正交实验法,以浸膏得率、红景天苷、酪醇含量为评价指标,考察乙醇浓度(%)、溶剂量(倍)、提取时间(h)对提取的影响。结果:以6倍量80%乙醇提取2 h,提取2次为最佳提取工艺。结论:优选工艺条件可为新药研究和工业化生产提供参考。

SPE-HPLC测定注射用红景天(冻干)中红景天苷和酪醇的含量

目的：测定注射用红景天（冻干）中红景天苷和酪醇的含量。方法：选用C18固相萃取小柱对样品进行纯化后用高效液相色谱法测定红景天苷和酪醇含量。Irregular-H C18柱（4．6mm×250mm，10μm），流动相甲醇-乙腈-0．06％磷酸（10：10：80），流速1．0mL·min^-1，检测波长275mm，柱温30℃。结果：红景天苷在2．24～22．4μg、酪醇在0．856～8．56μg呈现良好的线性相关性，r分别为0．9997，0．9996，平均回收率分别为101．3％，99．8％。结论：本方法简便快捷，分离度好，结果准确可靠。

抗氧化剂和低氧诱导醌氧化还原酶1基因的表达及其机制

目的 探讨低氧和抗氧化剂诱导醌氧化还原酶1(NQO1 )基因表达及其与细胞增殖的关系和诱导表达的调节机制。方法 人肝癌细胞SMMC 772 1经抗氧化剂[酪醇(p Ty) ,丁基羟茴香醚(BHA) ,β萘黄酮(βNF) ]、低氧或两者共同处理2 4h ,分别采用微孔板测定法、RT PCR、结晶紫显色法、电泳迁移率变动试验(EMSA)测定MQO1 活力,NQO1 mRNA表达,细胞增殖和细胞核蛋白与抗氧化反应元件(ARE)的结合情况。结果 常氧下BHA ,βNF和p Ty均能诱导NQO1 比活力增加,酪醇诱导NQO1 mRNA表达呈剂量依赖性增加,且与酶比活力存在明显的相关性;酪醇在一定范围内,其抑制细胞增殖的能力呈剂量依赖性,且细胞增殖与酶比活力存在负相关。低氧与抗氧化剂共同处理比常氧下抗氧化剂诱导NQO1 比活力有增加(r=-0 41,P <0 0 1)。EMSA试验表明,ARE能与低氧、抗氧化剂或低氧+抗氧化剂诱导的核蛋白特异结合。结论 抗氧化剂在常氧下可诱导人肝癌细胞NQO1 活力增加,低氧加强其诱导能力。其中酪醇诱导NQO1 活力与NQO1 mRNA表达量增加相关,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活力诱导增加有关。ARE参与介导抗氧化剂和低氧诱导NQO1 基因表达的调节。

大花红景天多元酚类化学成分的研究

从大花红景天Rhodiola crenulata (HK.f.et thoms)H.Ohba的乙酸乙酯提取物中分离出12个多元酚类化合物。其中六个经光谱分析和化学方法鉴定为没食子酸(gallic acid,1),酪醇(p-tyrosol,2),6-氧-没食子酰基红景天甙(6-O-galloylsalidroside,3),1,2,3,4,6-五氧-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖(1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-β-D-gluco pyranoside,4),草质素-7-氧-α-L-吡喃鼠李糖甙(rhodionin,5),草质素-7-氧-(3-氧-β-D-吡喃葡萄糖基)-α-L-吡喃鼠李糖甙(rhodiosin,6),1和4具有抗毒肝素的活性,4还有抗脂质过氧化的活性,2,5,6具有提高机体抗逆境能力的活性。

新疆蔷薇红景天抗冠心病有效成分的提取纯化研究

目的优选出新疆蔷薇红景天抗冠心病有效成分的提取纯化工艺。方法以新疆蔷薇红景天中水溶性提取物的出膏率、红景天苷和酪醇为评价指标,采用正交及均匀设计优选了新疆蔷薇红景天抗冠心病有效成分的提取纯化工艺,并采用药效试验对纯化前后的提取物进行了药效的考察。结果优选出的提取工艺为提取两次,每次2 h,第一次加药材量16倍水,第二次加药材量12倍水。优选出的醇沉除杂工艺为移取相对密度为1.00 g/mL的提取液适量,加95%乙醇调溶液醇质量分数为85%,用40%氢氧化钠溶液调pH为9.0,置冰箱冷藏24 h,减压过滤,浓缩即得。醇沉工艺对药效无影响。结论 验证试验表明优选出的新疆蔷薇红景天抗冠心病有效成分的提取纯化工艺稳定、合理、可行。

女贞子饮片质量评价研究

目的研究建立女贞子饮片质量评价标准。方法以红景天苷和酪醇为对照品进行TLC鉴别,同时进行HPLC含量测定,采用Luna C18柱,流动相:乙腈-0.05%磷酸(3∶97),流速:1.0mL·min-1,检测波长:224nm。结果女贞子酒蒸后TLC图谱有显著差别,红景天苷和酪醇的含量显著增加。结论TLC方法简便、专属性强,HPLC方法测定精密度高、重复性好,为女贞子饮片的质量评价方法提供了试验依据。

氧化剂致CHL细胞DNA损伤及酪醇的保护作用

目的 检测阿霉素、重铬酸钾和过氧化氢所致中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)DNA的损伤效应及酪醇对真核细胞DNA氧化损伤的保护作用。方法 CHL细胞用不同浓度化学物作用一定时间后 (阿霉素 :1 2 5h ;重铬酸钾 :1 75h ;过氧化氢 :2 5min) ,收获细胞用单细胞凝胶电泳技术检测DNA链断裂情况 ;CHL细胞先用不同浓度酪醇作用1 5 8h ,再加入 0 4mmol/L过氧化氢共同培养 2 5min ,然后用单细胞凝胶电泳技术测定DNA链断裂情况 ,分析酪醇的抗氧化损伤作用。结果 0 1μmol/L阿霉素、0 1mmol/L重铬酸钾及 0 1mmol/L过氧化氢作用一定时间后 ,均可引起DNA链断裂 ,随着各组处理物浓度的增加 ,DNA迁移长度和拖尾细胞百分率也相应增加 ,两者剂量 反应关系明显。 10 μg/ml、2 0 μg/ml酪醇的预处理可使过氧化氢染毒细胞的拖尾百分率和DNA迁移长度显著降低。 结论 阿霉素、重铬酸钾和过氧化氢均是强烈的DNA链断裂剂 ;

高山红景天乙醇浸提液有效成分的超滤纯化研究

探讨超滤提纯高山红景天浸提液中的主要有效成分。对浸提液微滤后超滤处理,分别用烘干法、紫外分光光度法、吸光度法对溶液中的总固体含量、主要有效成分红景天甙和酪醇(以红景天甙计)的含量和溶液中杂质的截留去除效果进行了测定。在料液浓度0.1 g/mL(生药含量),pH=7.0,温度40℃,料液流速530 mL/m in,操作压力0.1MPa的条件下进行超滤实验,溶液中的总固体含量由0.348 5 g/10 mL下降到0.112 2 g/10 mL,主要有效成分的纯度由4.60%提高到12.93%(wt.),超滤过程的回收率达到90.38%,全过程的总回收率为85.35%。超滤是分离提纯高山红景天浸提液中主要有效成分的简便、有效方法。

高山红景天浸提液超滤过程中温度的影响

研究了温度对高山红景天浸提液超滤过程的影响.对浸提液微滤后,在不同温度下进行超滤,分别用重量法、吸光度法对溶液中可溶性固形物、非水杂质、主要有效成分红景天甙和酪醇(以红景天甙计)的含量进行了分析和测定.结果表明,在40℃下进行超滤,对溶液中可溶性固形物、非水杂质的截留去除效果和主要有效成分的提纯效果较好,可溶性固形物含量由0.036 47 g/mL降低到0.011 58 g/mL,主要有效成分质量分数由4.38%提高到13.48%,过程回收率为97.63%,超滤150 min的平均透液速率为9.22 mL/min.在超滤过程中,选择合适的温度,能够有效地降低高山红景天浸提液中的可溶性固形物和非水杂质含量,使主要有效成分红景天甙和酪醇得到较好的分离和提纯.

不同采收月份和不同炮制方法对女贞子中红景天苷和酪醇含量的影响

目的探讨不同月份不同炮制方法对长沙地区女贞子中活性成分红景天苷及其苷元酪醇含量的影响。方法采收长沙岳麓山上8、10、12月份产女贞子,去杂质洗净。一部分直接晾干生制;另一部分晾干后用黄酒蒸制。用HPLC法测定不同月份红景天苷及酪醇的含量。色谱柱:Hydro-RP80A,C18(4.6×250mm,5μm)、流动相为甲醇-水(26∶74,V/V);流速1mL·min-1;检测波长278nm;柱温20℃;进样量10μL。评价月份及炮制方法对女贞子的影响。结果 8、10、12月份生品与制品中红景天苷的含量分别为3.213±2.235mg·g-1、2.784±0.719mg·g-1、0.941±0.510mg·g-1和4.159±2.042mg·g-1、3.596±1.773mg·g-1、2.164±0.986mg·g-1。酪醇的含量分别为0.457±0.323mg·g-1、0.828±0.549mg·g-1、0.414±0.348mg·g-1和0.505±0.298mg·g-1、1.954±1.218mg·g-1、0.702±0.690mg·g-1。结论月份及炮制方法对女贞子活性成分含量有影响,故在实际应用时应根据不同需要适时采收并加以炮制。

红景天总有效成分测定方法的研究

本文研究了重氮化对氨基苯磺酸作为重氮试剂测定高山红景天中总有效成分的可行性及操作条件，同时对东北人工栽培的高山红景天有效成分进行了测定，得出其三年生根茎的总有效成分为１．２０４％。

红景天甙和红景天甙元标准品的制备方法研究

用化学和高效液相制备色谱方法分离制备了红景天属植物提取物中甙及甙元的标准物，标准品纯度分别由１％～２％和１％提高到９９％和９７％以上。

红景天属植物抗氧化活性研究进展

红景天是一种珍稀药食兼用植物,具有多种生理功能和药理作用,是食品医药等领域的研究热点之一.红景天属植物抗氧化性能突出,归纳介绍了与红景天属植物抗氧化活性相关的黄酮及其苷类、酪醇、红景天苷、原花青素、多糖等各类活性成分的抗氧化性能及其作用机制,有利于为红景天资源的进一步开发利用提供依据.

HPLC法同时测定3种红景天药材中5种化学成分的含量

目的:建立同时测定大花红景天、狭叶红景天和长鞭红景天药材中没食子酸、红景天苷、酪醇、咖啡酸、对香豆酸含量的方法,并比较3种红景天药材中5种化学成分的含量差异。方法:采用高效液相色谱法测定含量,色谱柱为Wonda Sil C18,流动相为乙腈-0.3%磷酸溶液(梯度洗脱),检测波长为275 nm,柱温为25℃,流速为1.0 m L/min,进样量为10μL;采用Graph Pad Prism 5.0软件对含量测定结果进行单因素方差分析和Tukey’s多重比较。结果:没食子酸、红景天苷、酪醇、咖啡酸、对香豆酸的检测进样量线性范围分别为0.020 48~0.614 4μg(r=0.999 7)、0.118~3.54μg(r=0.999 5)、0.010 84~0.325 2μg(r=0.999 7)、0.008 48~0.254 4μg(r=0.999 5)、0.004 1~0.123μg(r=0.999 5);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2%;加样回收率分别为99.62%~104.92%(RSD=1.68%,n=9)、96.55%~100.69%(RSD=1.67%,n=9)、98.91%~103.39%(RSD=1.48%,n=9)、100.93%~104.98%(RSD=1.37%,n=9)、97.71%~103.89%(RSD=1.99%,n=9)。大花红景天中没食子酸、红景天苷、酪醇和咖啡酸含量均显著高于长鞭红景天,大花红景天中的红景天苷、咖啡酸含量均显著高于狭叶红景天,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01或P<0.001)。结论:该方法简便可行、结果准确,可用于同时测定大花红景天、狭叶红景天和长鞭红景天药材中没食子酸、红景天苷、酪醇、咖啡酸、对香豆酸的含量。3种常见红景天药材中的化学成分含量存在较大差异,大花红景天中红景天苷的含量最高。

西藏红景天主要成分在萃取体系中的分配行为

红景天甙和酪醇是西藏红景天的主要成分,在溶剂萃取体系中的分配行为尚不清楚。采用不同的溶剂萃取体系研究了西藏红景天浸提液中红景天甙和酪醇的分离效果,考察了预处理、pH值、萃取剂等条件对分配行为的影响。结果表明,浸提液经除鞣质预处理后可以降低萃取过程乳化现象;液-液两相萃取中,在pH值<9.0时,磷酸三丁酯(TBP)作为萃取剂时红景天甙和酪醇在有机相中质量分数分别可达60%和98%以上,下相可获得较纯的红景天甙溶液;采用TBP-聚乙二醇(PEG2000)-硫酸铵三相萃取体系,当pH值>10.0时,红景天甙主要分配于中间相和下相中,中间相约占70%,而酪醇主要分配在上相,约占65%以上,下相中质量分数低于5%。

高山红景天浸提液超滤用膜截留分子质量的选择

研究高山红景天浸提液超滤处理用膜合适的截留分子质量。对浸提液微滤后,用5种不同截留分子质量的膜进行超滤处理,分别用重量法、紫外分光光度法、吸光度法对溶液中的总固体含量、主要有效成分红景天甙和酪醇(以红景天甙计)的含量和溶液中杂质的截留去除效果进行了分析测定。结果表明,用截留分子质量(MWCO)为10 000的膜进行超滤处理,对溶液中主要有效成分的提纯效果和总固体含量和杂质的去除效果较好,分别由4.60%提高到12.93%和0.348 5 g/10 mL降低到0.112 2 g/10 mL,过程回收率为90.38%,超滤150 m in的平均透液速率为61.4 mL/10 m in。

对酪醇对P-糖蛋白功能的影响

目的:研究对酪醇对P-糖蛋白(P-gp)功能的影响。方法:采用环孢霉素A作为P-gp功能抑制的阳性对照,用流式细胞术分析对酪醇对P-gp底物-罗丹明123在Caco-2细胞中外排的影响。结果:当对酪醇浓度在40～160μmol/L时,实验组细胞内荧光强度显著高于阴性对照组(P<0.05),并随着对酪醇浓度的增高而减弱。当浓度在280μmol/L时,实验组细胞内荧光强度与阴性对照组间差异无显著性(P>0.05)。当对酪醇浓度为400μmol/L时,实验组细胞内荧光强度更弱显著低于阴性对照组(P<0.05)。结论:对酪醇对P-gp功能的影响与浓度有关,低浓度时,对酪醇对P-gp的功能有抑制作用。随着浓度的增高,对酪醇对P-gp的功能的抑制作用减弱。达到一定浓度,对酪醇对P-gp的功能表现出诱导作用。