乙型肝炎病毒X蛋白和p14^ARF依赖性、非依赖性途径对肝癌细胞生长的影响

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是否通过p14ARF途径影响肝癌细胞生长及其作用机制。方法将HBx及p14ARF单转染及共转染含野生型p53但不表达p14ARF的肝癌细胞株HepG2。实验分为pcDNA3、pcDNA3HBx、pcDNA3p14ARF、pcDNA3HBx+pcDNA3p14ARF4组。通过流式细胞仪比较各转染组HepG2细胞凋亡、细胞周期的变化情况。用含p53结合位点p21WAF1启动子荧光素酶活性检测和Western blotting观察各转染组细胞p14ARF、MDM2、p53、p21WAF1蛋白表达水平的变化。结果HBx及p14ARF单转染及共转染含野生型p53但无p14ARF表达的HepG2细胞,单转染HBx及p14ARF组其细胞凋亡率(14.11%、13.72%)、G0/G1期阻滞细胞数(63.62%、61.75%)、p21WAF1启动子荧光素酶活性(1.25±0.05、1.09±0.06)及p53、p21WAF1蛋白的表达较对照组(10.66%、57.42%、0.77±0.03)明显升高,而共转染组与单转染p14ARF组相比其p14ARF蛋白表达及上述各项指标(18.61%、66.74%、3.53±0.43)又进一步升高。结论HBx通过依赖及非依赖p14ARF途径诱导p53表达从而导致激活p21WAF1,进而引起细胞周期G0/G1期的阻滞及细胞凋亡的增加。

HYPERMETHYLATION OF p14^(ARF) PROMOTER REGION AND EXPRESION OF p14^(ARF) GENE PRODUCT IN NON-SMALL CELL LUNG CANCER

Objective： This study was designed to investigate promoter methylation status and protein expression of p14^ARF gene in non-small cell lung cancer, and value the role of p14^ARF promoter methylation in carcinogenesis of non-small cell lung cancer. Methods： Promoter methylation status and protein expression of p14^ARF gene in 40 cases of non-small cell lung cancer were analyzed by methylation specific polymerase china reaction （MSP）, restriction enzyme-related polymerase chain reaction （RE-PCR） and immunohistochemistry （IHC）. Results： The positive rates of p14^ARF promoter methylation in tumor tissues and normal tissues adjacent to cancer were 17.5% （7/40） and 2.5% （1/40） respectively. There were statistically significant differences between them, P〈0.05. The results of RE-PCR were consistent with that of MSP. The expression rate of p14^ARF protein in tumor tissues was significantly lower than that in normal tissues adjacent to cancer, p〈0.01. Promoter methylation status and protein expression of p14^ARF gene in non-small cell lung cancer showed significantly an inverse correlation （r=-0.56, P〈0.01）, and both of them did not relate statistically with the clinicopathologic characteristics of patients such as histological classification, clinical stage, differentiation grade and lymph node involvement. Conclusion： Promoter methylation is a crucial mechanism of inactivation of p14^ARF gene. Promoter methylation of p14^ARF gene might he involved in carcinogenesis of non-small cell lung cancer, and is an early event in development process of non-small cell lung cancer. It might be used as a new target in gene treatments in the future.

成釉细胞瘤中p53，MDM2，p14^ARF蛋白的表达和P53的作用[英]／Kumamoto H…∥J Oral Pathol Med．

为了阐明p53-MDM2-p14^ARF细胞周期调节系统在牙源性肿瘤的形成和细胞分化中的作用，分析了成釉细胞瘤和牙胚中的p53、MDM2和p14^ARF三种蛋白的表达。

大肠癌组织p14^(ARF)与p53基因变异研究

目的:观察大肠癌组织p14ARF基因遗传和表观遗传变化及p53基因突变状况,探讨两者改变的关系及p14ARF-p53通路功能破坏在大肠癌发生中的作用。方法:应用PCR、直接测序、甲基化特异PCR和RT-PCR分别检测56例原发性大肠癌及相应癌旁正常组织p14ARF基因纯合性缺失、突变、5′CpG岛甲基化、mRNA表达及p53基因突变状况。结果:①大肠癌组织p14ARF总变异率为27%(15/56),其中1例纯合性缺失,14例5′CpG岛甲基化,未见突变发生。②15例p14ARF基因变异的大肠癌组织其相应mRNA表达阴性(13例)或低水平表达(2例),41例未发生基因变异的大肠癌组织和所有癌旁正常组织p14ARFmRNA均显示明显表达。③大肠癌组织p53突变率为48%(27/56)。④56例大肠癌组织中,12例仅发生p14ARF变异,24例仅显示p53突变,3例同时有p14ARF5′CpG岛甲基化和p53突变,17例p14ARF和p53均无变异,p14ARF-p53通路总变异率为70%(39/56),p14ARF5′CpG岛高甲基化与野生型p53状态有关(P<0·05)。⑤低分化腺癌组p14ARF变异率(44%,7/16)明显高于高中分化腺癌组(20%,8/40)(P<0·05),但两组间p53突变率无显著差异(P>0·05)。结论:①大肠癌p14ARF基因5′CpG岛高甲基化是其表达失活的主要机制;②大肠癌p14ARF基因高甲基化与p53基因突变可能是相互独立的事件,两者的失活可能各自出现于不同的大肠癌亚组中;③p14ARF高甲基化或p53突变引起的p14ARF-p53通路功能破坏在大肠癌的发生中具有重要作用。

HCV核心蛋白,p53,Mdm2,p14^(ARF)在HCV肝炎肝硬化的表达及相关性

目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)肝炎、肝硬化组织核心蛋白、突变p53,Mdm2,p14ARF的表达以及它们间的相关性,探讨HCV核心蛋白对突变p53,Mdm2,p14ARF的表达作用及临床意义.方法:收集HCV表达阳性的肝炎、肝硬化组织23例,采用免疫组织化学EnVision法检测HCV感染的肝炎、肝硬化组织中核心蛋白、突变p53,Mdm2,p14ARF的表达,用统计学方法及临床联系分析它们之间的关系.结果:核心蛋白、突变p53、Mdm2,p14ARF的阳性表达主要定位于细胞核中;核心蛋白阳性表达的组织中突变p53,Mdm2、p14ARF阳性率分别为87%,91.3%,65.2%;4组间的KruskalWallis检验P<0.01,差异显著,核心蛋白与p53,p14ARF间的MannWhitneyU秩和检验P值分别为0.05,0.01;HCVC蛋白与突变p53,Mdm2,p14ARF阳性强度两者间相关性Spearman检验P值分别为0.01,0.067,0.72,相关系数rp分别为0.71,0.493,0.053.结论:HCV核心蛋白可能促进野生p53突变和表达,同时也可能间接促进Mdm2和p14ARF的表达;核心蛋白、突变p53,Mdm2的共同作用可促进肝细胞增殖、非典型性增生及其转化.

非小细胞肺癌中pokemon表达与p14^(ARF)、bcl-2的相关性及对预后的影响

目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中pokemon表达和p14ARF、bcl-2表达的关系及其对NSCLC临床病理特征和预后的判定价值。方法:应用SP免疫组织化学方法检测pokemon和p14ARF、bcl-2三种蛋白在62例NSCLC肿瘤组织及20例癌旁正常组织中的表达,分析它们与NSCLC病理学特征的关系,以及pokemon与p14ARF、bcl-2的相关性,并结合随访资料观察上述蛋白表达对NSCLC长期预后的影响。结果:正常肺组织中未见pokemon蛋白表达,p14ARF和bcl-2蛋白阳性表达率分别为95.0%和15.0%;在NSCLC组织中pokemon、p14ARF和bcl-2阳性表达率分别为72.6%、66.1%和53.2%。Pokemon表达与p14ARF表达呈负相关(r=-0.287,P<0.05),与bcl-2表达呈正相关(r=0.293,P<0.05)。Pokemon和p14ARF的表达与TNM分期相关(P<0.05),bcl-2表达与病理分型相关(P<0.05)。Pokemon与bcl-2表达阳性组的5年生存率分别为10.95%和13.74%,显著低于阴性组(P<0.05);p14ARF表达阳性组的5年生存率为21.68%,显著高于阴性组(P<0.05)。结论:NSCLC组织中存在pokemon和p14ARF、bcl-2的表达,pokemon表达与p14ARF表达呈负相关、与bcl-2表达呈正相关,它们对NSCLC的预后评估有一定的临床意义。

肝细胞癌组织STAT3和p14^(ARF)蛋白的表达和相关性研究

目的探讨STAT3和p14ARF蛋白在人肝细胞癌组织中的表达及相关性,分析其与肝细胞癌转移复发的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测60例肝细胞癌组织和癌旁组织中STAT3和p14ARF蛋白的表达情况。结果 STAT3及p14ARF蛋白在60例肝细胞癌及癌旁组织中的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。STAT3的表达与脉管癌栓、术后复发、肿瘤直径、肿瘤细胞分化密切相关(P<0.05);p14ARF蛋白的表达与肿瘤分化程度密切相关(P<0.05)。STAT3和p14ARF蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.325,P=0.011)。结论 STAT3和p14ARF蛋白在肝细胞癌的发生及发展中起着重要作用。

非小细胞肺癌p14^(ARF) p16^(INK4a)蛋白共表达及其临床意义

目的:探讨p14ARF、p16INK4a蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达、意义及相关关系。方法:采用免疫组织化学SP方法对103例NSCLC组织中p14ARF和p16INK4a蛋白的表达进行检测。结果:103例NSCLC组织中p14ARF、p16INK4a蛋白表达阴性率分别为70.87%和43.69%,差异有显著性(P<0.01)。其中35例p14ARF、p16INK4a蛋白表达共阴性,共阴性率达33.98%(35/103),鳞癌中共阴性率明显高于其它组织类型(P<0.01)。p14ARF、p16INK4a蛋白表达阴性相互间无显著相关性(P>0.05)。临床Ⅲ+Ⅳ期病例两种蛋白表达阴性率明显高于临床Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)。结论:NSCLC组织p14ARF、p16INK4a蛋白表达共阴性具有明显的组织学类型特异性,两种蛋白阴性表达是各自独立的事件。

p14^(ARF)在宫颈癌中的表达及其与p53表达相关性的研究

目的探讨宫颈癌组织p14ARF蛋白的表达及其与p53表达的相关性。方法应用免疫组化方法检测p14ARF、p53基因在41例宫颈癌及20例正常宫颈组织中的表达。结果p14ARF在正常宫颈组织中不表达,41例宫颈癌中35例表达阳性,占85.4%。病理分级为G1、G2级的宫颈癌的p14ARF阳性表达率为68.4%,G3级为100%,两者比较,有显著性差异(P<0.05)。宫颈癌组织中p53蛋白表达阳、阴性者中p14ARF蛋白表达阳性率分别为75.0%(12/16)和92.0%(23/25),两者比较,无显著性差异,p14ARF与p53表达不相关。结论p14ARF在宫颈癌中高表达有一定的诊断和估测预后价值,可能是宫颈癌新的肿瘤标志物。

p14^(ARF)对人黑色素瘤细胞增殖的影响及其作用机理的初探

ARF (alternativereadingframe)作为INK4a/ARF的 β转录产物 ,能够稳定p5 3,诱导细胞周期阻断或凋亡 .利用高表达p1 4 ARF的人黑色素瘤细胞模型 ,探讨了ARF抑制细胞增殖的分子作用机理 .研究发现p1 4 ARF高表达能将细胞周期阻断在G1和G2期 ,p5 3,p2 1 cip1 和p2 7kip1 蛋白水平明显增强 ,而p ERK1 / 2 ,CyclinD1和CyclinE蛋白水平下降 ,明显抑制细胞生长 .提示p1 4 ARF能通过ERK (extracellularsignal regulatedkinase)

肺鳞癌、腺癌中p14^(ARF)基因启动子区甲基化及蛋白表达的研究

背景与目的p14ARF基因是新近发现的抑癌基因,其异常表达与多种人类肿瘤发生有关,启动子区异常甲基化作为p14ARF基因失活的重要形式可能参与了肿瘤的发生。本研究通过检测肺鳞癌、腺癌中p14ARF启动子区甲基化状态和蛋白表达,探讨p14ARF启动子区甲基化与肺癌的关系。方法通过免疫组织化学(I HC)、甲基化特异性PCR(MSP)和相关限制性内切酶PCR(RE-PCR)方法,检测40例肺鳞癌、腺癌组织中p14ARF启动子区甲基化状态和蛋白表达水平。结果癌组织及癌旁正常组织中p14ARF启动子区甲基化阳性率分别为17.5%(7/40)和2.5%(1/40)(P=0.025)。RE-PCR检测结果相同。癌组织及癌旁正常组织中p14ARF蛋白阳性率分别为70.0%(28/40)和95.0%(38/40)(P=0.003)。p14ARF基因启动子区甲基化和蛋白表达均与肿瘤分期、组织类型、分化程度、淋巴结转移等临床病理特征无明显关系(P>0.05)。p14ARF启动子区甲基化与蛋白表达呈负相关(r=-0.56,P=0.001)。结论启动子区甲基化是p14ARF基因失活的重要机制。p14ARF启动子区异常甲基化可能参与了非小细胞肺癌的发生,是肺癌发生过程的早期事件。

p14^(ARF)、p53抑癌基因与胰腺癌发生、发展的相关研究

目的 :研究抑癌基因p14 ARF、p5 3在胰腺癌组织中的表达和胰腺癌细胞株PC 3转染p14 ARF基因前后的生长状况 ,探讨它们对胰腺癌发生、发展的影响。方法 :采用免疫组织化学法检测 10例正常胰腺组织、4 2例胰腺癌组织中p14 ARF蛋白、p5 3蛋白的表达。将外源性p14 ARFcDNA重组质粒pCI neo p14 ARF和空载体质粒pCI neo分别转染入胰腺癌PC 3细胞中 ,观察转染后胰腺癌PC 3细胞株的生长状况。结果 :正常胰腺组织中p14 ARF的表达率为 90 % ,胰腺癌组织中为 35 .7% ;正常胰腺组织中p5 3的表达率为 0 ,胰腺癌组织中为 4 5 .2 %。胰腺癌PC 3细胞的p14 ARF基因呈缺失变异。外源性野生型p14 ARF基因和空载体质粒pCI neo成功转染入PC 3细胞 ,转染p14 ARF基因的胰腺癌细胞株第 1天生长抑制率为 2 2 % ,第 5天为 2 6 %。结论 :抑癌基因p14 ARF蛋白在胰腺癌中低表达 ,突变型p5 3蛋白在胰腺癌中呈高表达 ;转染p14 ARF基因的胰腺癌细胞株生长受到抑制 ;抑癌基因p14 ARF、p5 3对胰腺癌的发生、发展可能产生影响。

非小细胞肺癌中p14^(ARF)与p16^(INK4a)和p53蛋白表达及其相互关系的研究

目的:检测p14ARF、p16INK4a和p53蛋白在非小细胞肺癌中表达情况,对它们在非小细胞肺癌发生过程中的作用及其相互关系进行初步探讨。方法:应用免疫组化方法检测了40例非小细胞肺癌组织标本的p14ARF、p16INK4a和p53基因的表达水平。结果:非小细胞肺癌组织中p14ARF、p16INK4a和p53蛋白总阳性率分别是72.5%,50.0%和52.5%,与癌旁正常组织(分别是95.0%,92.5%,2.5%)有显著性差异(P<0.01);非小细胞肺癌中p14ARF和p53蛋白表达异常与肿瘤分期、组织类型、分化程度、淋巴结转移情况无显著相关性;p16INK4a蛋白表达水平与组织分化程度相关(P<0.05),但与肿瘤分期、组织类型、淋巴结转移情况无关;p14ARF和p53蛋白在组织中表达呈负相关,r2=-0.475(P<0.01),而p14ARF和p16INK4a蛋白表达无关;p14ARF蛋白在Ⅰ期病例中强阳性(+++)占阳性比例为41.7%,在Ⅲ期中强阳性(+++)比例为10.0%。结论:p14ARF、p16INK4a和p53三个基因在NSCLC发生过程中起重要作用,特别在肿瘤早期可能起到更为重要的作用;p14ARF和p53基因在同一调节通路上;p14ARF、p16INK4a和p53蛋白可以作为非小细胞肺癌早期生物学检测指标。

p14^(ARF)基因抑制喉癌细胞生长及其对内源性p53表达的影响

目的 探讨p14ARF对喉癌细胞生长的抑制作用及其对内源性p5 3表达的影响 ,为喉癌致癌的分子机理和基因治疗提供理论基础。方法 采用基因转染技术 ,将全长野生型p14ARF 互补DNA(complementaryDNA ,cDNA)转染到人喉鳞状细胞癌Hep 2细胞中 ,利用流式细胞仪、聚合酶链反应(polymerasechainreaction ,PCR)和Western Blotting等方法研究其对细胞周期、内源性野生型p5 3表达的影响。结果 转染p14ARF基因的Hep 2细胞的生长受到明显抑制 ,其克隆形成能力为转染空载体的5 7%。细胞分析表明 ,转染p14ARFcDNA 48h后 ,处在G0 G1和G2 M期的细胞皆增加了 1倍。同时Western Blotting分析结果表明 ,内源性野生型p5 3表达明显上升。结论 p14ARF 基因能上调Hep 2细胞中内源性野生型p5 3的表达并阻滞细胞于G0 G1和G2 M期 ,从而抑制其生长。

p14^(ARF)、p53蛋白表达与H101治疗鼻咽癌疗效的关系

目的:观察肿瘤组织p14ARF、突变型p53蛋白表达状态与E1B缺陷型腺病毒治疗鼻咽癌疗效的关系,探讨E1B缺陷型腺病毒(简称H101)基因治疗的作用机制。方法:应用免疫组织化学方法对36例H101治疗的晚期鼻咽鳞癌病例进行肿瘤组织p14ARF、突变型p53蛋白检测,分析肿瘤组织p14ARF、突变型p53蛋白表达与H101临床疗效的关系;结果:突变型p53和p14ARF蛋白在36例晚期鼻咽鳞癌中总阳性表达率分别为55.6%和44.4%;突变型p53+p14ARF+(即p14ARF蛋白无缺失)患者均无治疗有效病例;突变型p53+p14ARF-(即p14ARF蛋白有缺失)患者中有4例有效;结论:对于p53基因无突变的恶性肿瘤,p14ARF基因缺失可能是H101能在肿瘤细胞内有效复制并杀死肿瘤细胞的一个重要影响因素。

HCVC蛋白、p53、Mdm2、p14和p21在原发性肝癌中的表达及相关性

目的:研究原发性肝癌(HCC)组织中核心蛋白、突变p53、Mdm2、p14和p21的表达及其相关性,探讨HCV核心蛋白对突变p53、Mdm2、p14和p21表达影响及临床意义。方法:收集42例HCC石蜡组织,采用免疫组织化学EnVision法检测HCC组织中核心蛋白、突变p53、Mdm2、p14和p21的表达,用统计学方法及临床联系分析它们之间的关系。结果:核心蛋白、突变p53、Mdm2、p14和p21的阳性表达主要定位于细胞核中;HCC组织中核心蛋白、突变p53、Mdm2、p14和p21阳性率分别为40.5%、47.62%、75.57%、45.24%、19.05%;5组间的Kruskal-Wallis检验P=0.000,差异显著,核心蛋白与突变p53、Mdm2、p14和p21间的Mann-WhitneyU秩和检验P值分别为0.043、0.009、1.0、0.023;HCVC蛋白与突变p53、p14、p21阳性强度两者间相关性Spearman检验P值分别为0.000、0.000、0.43,相关系数rs分别为0.67、0.64、-0.29;p53和Mdm2、p21阳性强度间相关性Spearman检验p值为0.000、0.174,rs分别为0.72、-0.45。结论:在HCV感染的HCC中HCVC蛋白可能促进野生p53突变和表达,p14的表达与C蛋白有关联;突变p53和p14很可能促进Mdm2的表达;HCC中p21表达缺陷是十分常见的,HCV相关的HCC主要与p53通路改变有关,C蛋白可能下调p21的表达。因此,HCV相关的HCC中C蛋白、突变p53、Mdm2很可能促进肝细胞增生或恶性生长。

甲状腺肿瘤p14^(ARF)、p53及FHIT蛋白的表达

目的探讨p14ARF、p53及FHIT蛋白在甲状腺肿瘤组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化SP法检测20例甲状腺腺瘤和28例甲状腺癌组织中p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达。结果p14ARF、p53及FHIT蛋白在甲状腺腺瘤和甲状腺癌中阳性率分别为90%、35.7%、15%和75%、90%、7.14%,3种蛋白在甲状腺腺瘤及甲状腺癌的表达差异均有显著性(P<0.05)。p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达在甲状腺滤泡癌(FTC)与腺瘤之间,乳头状癌(PTC)与腺瘤之间差异均有显著性(P<0.05),p53及FHIT的表达在髓样癌(MTC)与腺瘤间差异也有显著性(P<0.05)。p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达与甲状腺肿瘤的恶性进程有关,与患者年龄、性别及淋巴结转移无关。另外p14ARF与FHIT蛋白的表达呈正相关,并且它们与p53的表达均呈负相关。结论肿瘤抑制蛋白p14ARF和FHIT的缺失以及p53蛋白的高表达可能是甲状腺肿瘤发生的重要原因之一。联合检测p14ARF、p53及FHIT蛋白有助于区分甲状腺腺瘤和甲状腺滤泡癌。

p14^(ARF)基因变异及其产物表达与甲状腺肿瘤的关系

目的探讨甲状腺肿瘤p14ARF基因变异及其产物的表达与甲状腺肿瘤发生发展的关系。方法应用双重PCR和免疫组化SP法分别检测20例甲状腺腺瘤和28例甲状腺癌组织中p14ARF基因纯合性缺失及其蛋白表达。28例甲状腺癌中,11例甲状腺滤泡癌、12例乳头状癌、4例髓样癌、1例未分化癌。结果1p14ARF基因在甲状腺腺瘤及癌中的纯合性缺失率分别为5.0%、42.9%,二者有显著性差异(P<0.01)。2p14ARF蛋白在甲状腺腺瘤及癌中的阳性率分别为90.0%、35.7%,二者有显著性差异(P<0.05)。结论1甲状腺肿瘤p14ARF基因纯合性缺失是其蛋白表达失活的重要机制之一,与甲状腺肿瘤的发生发展密切相关。2p14ARF可能是甲状腺肿瘤的分子标志物之一,可作为鉴别甲状腺腺瘤与滤泡癌的辅助指标。

银屑病角质形成细胞p14^(ARF)基因甲基化的研究

目的:检测银屑病皮损角质形成细胞p14ARF基因启动子区甲基化,探讨其与银屑病发病的关系。方法:利用甲基化特异性PCR技术检测37例银屑病及35例正常人角质形成细胞p14ARF基因启动子区甲基化状态。结果:37例银屑病皮损角质形成细胞p14ARF基因启动子区甲基化阳性率为43.2%(16/37),显著高于正常对照(χ2=13.5,P<0.05)。结论:p14ARF基因启动子区甲基化与银屑病角质形成细胞过度增殖具有一定的关系。

肝细胞癌中p14^(ARF)基因启动子甲基化及蛋白表达的研究

目的通过检测肝细胞癌中p14ARF基因启动子甲基化状态与蛋白表达的关系,探讨p14ARF基因启动子甲基化与肝细胞癌的关系。方法通过甲基化特异性PCR(MSP)方法及免疫组化(IHC)法分别检测50例肝细胞癌组织和癌旁组织中p14ARF基因启动子甲基化状态和蛋白表达水平。结果癌组织及癌旁组织中p14ARF基因启动子甲基化阳性率分别为28%(14/50)和4%(2/50)(P<0.01)。癌与癌旁组织p14ARF蛋白表达差异极显著(P<0.01)。p14ARF基因启动子甲基化和蛋白表达与临床分期、门脉癌栓、术后复发、肝外转移、肿瘤大小、肿瘤个数及血清AFP值无关,而在肿瘤分化程度上p14ARF蛋白表达有显著差异,p14ARF基因启动子甲基化则无差异。p14ARF基因启动子甲基化与蛋白表达呈负相关。结论启动子区甲基化是p14ARF基因失活的重要机制。p14ARF启动子区异常甲基化可能参与了肝癌的发生、发展,在肝癌的进展中起重要作用。