Polymorphism of p16INK4a gene and rare mutation of p15INK4b gene exon2 in primary hepatocarcinoma

INTRODUCTION Hepatocellular carcinoma(HCC)is the mostcommon cause of death from cancer in China.Themechanisms of hepatocarcinogenesis are not yetknown clearly,p16INK4a gene,the multiple tumorsuppressor gene 1(MTS1),encodes P16 protein,which acts as an inhibitor by binding directly toCDK4 and CDK6 and preventing its association

河南食管癌高发区居民食管癌组织p15INK4b和p16INK4a基因变化的研究

基因丢失导致ｐ１６ＩＮＫ４ａ和（或）ｐ１５ＩＮＫ４ｂ对ＣＤＫ激酶的抑制作用丧失，从而导致细胞增生调节失控［１－３］，目前在多种肿瘤中已发现存在ｐ１５ＩＮＫ４ｂ和ｐ１６ＩＮＫ４ａ的失活现象［４－６］．作者近年对河南食管癌高发区林州市居民的研究证实，肿瘤...

骨髓增生异常综合征与白血病细胞p15INK4B基因甲基化及机制研究

目的探讨p15INK4B基因甲基化异常和血液系统肿瘤发病的关系及甲基化异常的机制。方法采用RT-PCR、甲基化特异PCR、Westernblot法检测20例骨髓增生异常综合征(MDS)、20例急性白血病患者(AL)、14例慢性粒细胞性白血病(CML)患者骨髓单个核细胞p15INK4B基因mRNA和p15INK4B蛋白的表达、p15INK4B基因甲基化及甲基转移酶(DNMTs)的表达。结果高危组MDS患者p15INK4B蛋白表达阳性率低于低危组MDS患者(10%vs80%,P<001),p15INK4B基因甲基化阳性率较高(60%vs10%,P<001)。20例AL有9例(45%)存在p15INK4B基因甲基化。10例CML慢性期(CML-CP)患者仅1例存在p15INK4B基因甲基化。4例CML急变期(CML-BP)患者均检测到p15INK4B基因部分甲基化。DNMT3A、DNMT3B表达在AL、高危组MDS和CML-BP患者均明显高于低危组MDS(P<005)。结论p15INK4B基因甲基化在AL、高危组MDS和CML-BP患者发生率高于低危组MDS,伴有甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B表达较高。p15INK4B基因甲基化可能参与MDS和AL的发病机制并与MDS及CML的预后有关。

半巢式甲基化特异性聚合酶链反应对肿瘤细胞株p15基因甲基化或缺失状态的检测

本研究分析多种恶性肿瘤细胞株的p15基因甲基化或缺失状态,阐明p15基因甲基化或缺失在肿瘤发生发展中的作用。运用半巢式甲基化特异性聚合酶链反应(hemi-nested methylation specific polymerase chain reaction,hn-MSP)分析20种恶性肿瘤细胞株和正常人单个核细胞或细胞株的p15基因甲基化及缺失状态,并评价该方法的敏感性和特异性。结果表明:在所有的细胞中,Molt-4、Raji、KG1、CA46、SW480、NCE、SMMC-7221、NCI-H446细胞为部分甲基化,hn-MSP检测p15基因甲基化敏感性可达到1×10-5。正常人单个核细胞、HL-60、HeLa、HepG2、293、SGC7901、U266、CEM细胞则为p15非甲基化,而K562、NB4、GMC、Jurkat似乎显现p15基因缺失或突变。结论:p15基因甲基化或缺失在多种肿瘤,特别在恶性血液病中有较高的发生率,且对疾病的进展及预后有密切的关系,hn-MSP具有较高的敏感性和特异性,值得在临床推广应用。

5′-杂氮-2′-脱氧胞苷对高危组骨髓增生异常综合征细胞作用的体外研究

本研究探讨 5′ 杂氮 2′ 脱氧胞苷 (5 aza 2′ deoxycytidine ,5 Aza CdR ,Decitabine)对高危组骨髓增生异常综合征 (MDS)细胞体外作用的机制。以人MDS RAEB细胞株MUTZ 1细胞为研究对象 ,采用细胞培养技术、MTT增殖抑制实验测定细胞存活率及抑制率 ;用细胞形态学、流式细胞术检测磷脂酰丝氨酸 (PS)转位及细胞凋亡 ;用RT PCR检测 p15INK4B基因、甲基转移酶 (DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)基因mRNA表达 ;用甲基化特异PCR(MSP)方法检测 p15INK4B基因甲基化程度。结果表明 :5 Aza CdR对MUTZ 1细胞有生长抑制作用 ;作用后的细胞显示凋亡细胞的特征性改变。p15INK4B基因甲基化程度随 5 Aza CdR剂量增加而减弱 ,伴随 p15INK4B基因mRNA表达增加。经 3.2mmol/L 5 Aza CdR作用 4 8小时后 ,MUTZ 1细胞DNMT3A mRNA表达水平较未加药组明显下降 (灰度比为 0 .385∶0 .6 5 4 ,P <0 .0 5 ) ,DNMT1、DNMT3B mRNA表达水平与未加药组相比无明显改变。结论 :在 0 .4 - 6 .4mmol/L浓度范围 5 Aza CdR通过诱导MUTZ 1细胞凋亡而抑制该细胞生长 ,这可能是其抗肿瘤的主要机制之一。 5 Aza CdR可能通过下调DNMT3A mRNA表达使p15INK4B基因甲基化程度下降 ,从而恢复其表达。

骨髓增生异常综合征患者P15^(INK4B) FHIT基因甲基化的研究

目的探讨P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化异常与骨髓增生异常综合征(MDS)发病机制的关系。方法采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)技术和变性高效液相色谱(DHPLC)检测分析50例MDS患者,其中包括低危组3例、中危-1组10例、中危-2组27例和高危组10例骨髓细胞P15^(INK4B)基因与FHIT基因的甲基化情况。结果随着疾病的进展,即由低危组MDS向高危组MDS进展,P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化阳性率逐渐增高,且P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化在3组间的差异有统计学意义(P=0.022,P=0.026),其中低危组/中危-1组P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化阳性率低于高危组,且2组间的差异有统计学意义(P<0.05),而低危组/中危-1组与中危-2组、中危-2组与高危组间差异无统计学意义;2个基因的甲基化没有关联性。结论 P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化可能参与MDS的发病机制,并与疾病的恶化程度有关。

儿童急性白血病端粒酶活性与p15基因表达关系的研究(英文)

目的 探讨端粒酶活性与pINK4b(p15)基因表达在儿童急性白血病(AL)发病中的关系。方法 采用改良端粒重复序列PCR扩增和逆转录聚合酶链反应检测27例儿童AL骨髓单个核细胞端粒酶活性和p15基因表达情况,并与9例正常骨髓单个核细胞端粒酶活性及p15基因表达进行比较。结果 初诊时,AL患儿骨髓细胞端粒酶活性(34. 5±37. 0)TPG较对照组(2. 4±2. 2 )TPG明显增高(P<0. 001 ); AL患儿p15基因表达水平(9. 8±16. 2)%, 明显低于对照组(45. 8±16. 9)% (P<0. 001 )。AL患儿骨髓细胞端粒酶活性与p15基因表达水平之间无相关关系(r= 0.01304, P> 0. 05)。结论 端粒酶活化和p15基因表达水平降低与急性髓性白血病发展有关,但两者可能通过不同的机制作用于白血病。

骨髓增生异常综合征患者p15^(INK4B)基因甲基化状态的研究

目的:检测骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)患者抑癌基因p15INK4B启动子区异常甲基化情况及其mRNA表达水平,探讨p15INK4B基因异常甲基化在MDS发生、发展中的作用。方法:应用甲基化特异性PCR检测32例MDS患者骨髓p15INK4B基因启动子区甲基化状态,逆转录PCR(RT-PCR)检测p15mRNA表达情况。结果:32例MDS患者骨髓有14例检测到p15INK4B基因启动子甲基化(甲基化阳性率为43.8%),且多为高危型患者。MDS患者骨髓p15mRNA表达水平明显降低。MDS患者p15INK4B基因启动子甲基化与p15mRNA表达缺失具有明显的相关性。结论:MDS中p15INK4B基因启动子高甲基化与基因表达失活密切相关,并在MDS的发生、发展中有重要作用。

低剂量亚砷酸及维甲酸方案对儿童骨髓增生异常综合征p15INK4B基因的影响

目的 探讨低剂量亚砷酸及维甲酸双诱导方案对骨髓增生异常综合征（MDS）患儿p15INK44B基因表达的影响及患儿p15INK4B基因甲基化水平的变化.方法 11例MDS患儿接受低剂量亚砷酸及维甲酸双诱导方案治疗,应用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法检测治疗前后p15INK4B基因的表达,应用亚硫酸氢钠修饰及实时荧光定量PCR方法检测p15INK4B基因的甲基化水平.结果 11例MDS患儿经过双诱导方案治疗后,9例获益.治疗后10例患儿p15INK4B基因表达水平显著升高,治疗前后p15INK4B基因甲基化水平分别为（1.68±0.58）％、（1.44±0.65）％,二者差异无统计学意义（t=-0.885,P＞0.05）.结论 低剂量亚砷酸及维甲酸双诱导方案治疗儿童MDS疗效较好,该方案的作用机制可能与p15INK4B基因表达升高有关,但p15INK4B基因表达升高与去甲基化无相关性.