p16^INK4a蛋白在宫颈疾病中的表达特点及其与HPV感染的关系

目的研究伴有高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,hr-HPV)感染及无hr-HPV感染的宫颈癌(cervical cancer,CC)、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈炎中p16INK4a蛋白表达水平的变化及意义,探讨宫颈癌及癌前病变中p16INK4a蛋白表达与HPV感染的相关性。方法应用免疫组化方法检测126例宫颈疾病(CC40例,CIN67例和宫颈炎19例)组织中p16INK4a蛋白的表达,其中,hr-HPV(+)宫颈疾病89例(CC32例,CIN48例和宫颈炎9例),hr-HPV(-)宫颈疾病37例(CC8例,CIN19例和宫颈炎10例),进行半定量分析及统计学检验。结果40例CC中,p16INK4a全部阳性表达;48例hr-HPV(+)和19例hr-HPV(-)CIN中,p16INK4a阳性表达分别为39例和12例;9例hr-HPV(+)和10例hr-HPV(-)宫颈炎组织中,p16INK4a阳性表达均为4例。hr-HPV(+)或hr-HPV(-)宫颈炎、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中p16INK4a蛋白表达水平均依次升高。CC和CIN中p16INK4a蛋白表达与hr-HPV感染相互间无显著相关性(P>0.05)。结论细胞周期抑制蛋白p16INK4a在CC及癌前病变中过表达,且与hr-HPV感染无关,提示p16INK4a蛋白在宫颈癌的发生、发展中所起的作用和作用机制可能与其在其他恶性肿瘤中不同。检测p16INK4a蛋白表达有助于CC的早期诊断。

P16^INK4A基因对宫颈癌和癌前病变的诊断价值

目的探讨宫颈癌及癌前病变(CIN)组织中P16INK4A基因表达的临床意义及P16INK4A基因检测对宫颈癌及CIN的诊断价值。方法选取2004—2006年经病理检查证实的宫颈浸润癌患者18例、CIN患者150例和慢性宫颈炎患者57例,采用EnVision免疫组化法检测组织标本中P16INK4A阳性表达情况,并进行比较分析。结果CIN组和浸润癌组患者的P16INK4A阳性表达率与慢性宫颈炎组间差异均有统计学意义(P<0·01);随宫颈病变程度加重,P16INK4A的表达强度和阳性表达率不断升高(P<0·01)。结论P16INK4A基因表达与宫颈癌及CIN病变程度及其进展有关;P16INK4A基因可作为宫颈癌和CIN早期诊断、判断病情、预测病情进展和预后的生物学指标。

紫龙金对BGC-823细胞增殖的抑制作用及对p16^INK4a启动子活性的影响

利用记数法和Brdu脉冲标记法研究了紫龙金对细胞增殖的影响,western blot检测结果表明:紫龙金(3,4mg.mL-1)处理可明显抑制人胃癌BGC-823细胞的生长、提高BGC-823细胞中p16的表达水平.进一步利用含有p16INK4a启动子片段(-967^-165区域)及荧光素酶报告系统的载体pGL3-Basic-p16N研究了紫龙金对p16INK4a启动子活性的影响及其作用的分子机制,结果表明,紫龙金可能通过提高p16INK4a启动子活性而促进p16的表达,从而抑制细胞的增殖.

HPV16／18阳性的宫颈尖锐湿疣及癌前病变组织中NF-κBp50和P16^INK4A蛋白表达分析

[目的]探讨NF-κBp50和P16INK4A在HPV16/18型宫颈尖锐湿疣(condylomata acuminate CA)和宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelinal neoplasin CIN)组织中的表达及意义。[方法]应用免疫组织化学LDP法对21例宫颈CA、34例宫颈CIN进行NF-κBp50和P16INK4A表达分析。[结果]NF-κBp50在CA组织中阳性表达于细胞浆,在CIN组织中阳性表达于细胞核,NF-κBp50在CA、CINⅠ、CINⅡ3组间阳性表达强度有统计学意义(P﹤0.05),P16INK4A在CA组织中阳性表达于细胞核,在CIN阳性表达于细胞核与细胞浆,P16INK4A在CA、CINⅠ、CINⅡ3组间阳性表达强度有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]HPV16/18阳性CA向CIN转化可能与P16INK4A和NF-κBp50蛋白过渡表达有关;其联合检测可作为辅助诊断CIN的标志物。

核因子-κBp50和P16^INK4A在尖锐湿疣皮损中的表达及意义

尖锐湿疣（condyloma acuminatum，CA）是由人乳头瘤病毒（HPV）感染引起的性传播疾病之一，最常见于HPV6、11型感染。国内外研究表明CA可发生癌变，因此尖锐湿疣与癌变的关系日益受到人们的关注。笔者通过免疫组化方法对尖锐湿疣组织中核因子（NF）-κBp50和P16^INK4A表达进行了研究，以便进一步了解尖锐湿疣的发病机制。

P16^INK4a蛋白表达调控机制及免疫组化染色结果判读

由CDKN2A基因(p16基因)编码的P16^INK4a(简称P16),又称CAKN2A(cyclin-dependent kinaseinhibitor 2A),MTS-1 (multiple tumor suppressor 1),INK4A(inhibitor of CDK4)等,是细胞周期G1/S期检查点(check point)的负性调节因子和重要的抑癌基因。P16-CDK4/6-cyclin D-pRb 通路调控异常则是引起G1/S转换导致肿瘤细胞过度增殖的重要机制。既往认为,编码P16INK4a 蛋白的CDKN2A基因的纯合性缺失(homozygous deletion)、杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)、点突变(point mutation)和启动子超甲基化(promoter hypermethylation)是肿瘤细胞周期异常的主要机制[1,2]。

p16^INK4a基因及其抑制基因Bmil在不同年龄人角膜内皮细胞中的表达及其意义

背景p16^INK4a基因在细胞老化和早衰过程中发挥着重要作用，是目前已知的细胞衰老的主导基因。角膜内皮细胞（CECs）周期停滞于G。期且体内缺乏增生能力，是否与细胞衰老有关尚未得知。目的探讨不同年龄的正常人CECs中p16^INK4a基因及其抑制基因Bmil的表达。方法收集临床上DX液保存的行角膜移植手术后剩余的供体周边环状角膜组织，记录供体年龄。经锥虫蓝一茜素红双染法观察CECs的活性；行苏木精一伊红染色以证实角膜材料的组织结构正常。将收集到的角膜环材料按照年龄分为〈30岁组、30～50岁组和〉50岁组，每组30个角膜环，其中15个用于总RNA提取，另外15个角膜环等分为3份，分别用于免疫组织化学检测、免疫荧光检测和CECs活性的观察。提取每个角膜环的总RNA，行实时荧光定量PCR检测，观察p16^INK4amRNA、BmilmRNA和Ki67mRNA在CECs中的表达。行冰冻切片免疫组织化学染色，检测p16^INK4a、Bmil和Ki67蛋白在CECs中的表达。免疫荧光法检测p16”“。在CECs的表达。结果苏木精一伊红染色结果显示，供体角膜上皮、基质和内皮结构完整，排列规则。实时荧光定量PCR检测显示随年龄增长，p16^INK4a。mRNA的表达增强，而BmilmRNA和Ki67mRNA的表达减弱，差异均有统计学意义（F=5．703，P=0．014；F=3．950，P=0．042；F=548．500，P=0．000），其中与〈30岁组比较，〉50岁组p16^INK4amRNA在CECs中的表达量明显升高，而BmilmRNA和Ki67mRNA的表达均明显降低，差异均有统计学意义（P=0．006、0．013、0．000）。免疫组织化学结果可见，p16^INK4a。蛋白在各组CECs中均有表达，主要位于细胞核内，而Bmil与Ki67在年老供体的表达强度均弱于年轻供体，与实时荧光定量PCR的结果基本一致。免疫荧光染色显示，年老供体CECs p16^INK4a的表达强度强于年轻供体。结论细胞衰老主导基因p16^INK4a的表达随年龄增加而增高，其抑制基因Bmil的表达随年龄增加而降低。

良性前列腺增生组织中P16^ink4a与HST2 mRNA表达情况的初步探讨

目的:探讨衰老基因P16ink4a与长寿基因HST2在BPH组织中的表达。方法:对23例BPH及18例正常前列腺标本,提取总RNA后行RT-PCR,并对BPH、正常前列腺组织标本中HST2和P16ink4a基因表达进行定性及半定量分析。结果:正常前列腺组织与增生前列腺组织中均无HST2 mRNA表达,仅检测出P16ink4a mRNA的表达。半定量分析显示P16ink4a mRNA的表达在正常前列腺组织(0.4868±0.0545)明显高于BPH组织(0.2783±0.0268),差异有显著性(P<0.05)。结论:P16ink4a基因在BPH发病中可能有重要意义,可能是导致细胞衰老逃逸的因素之一。

非小细胞肺癌p14^(ARF) p16^(INK4a)蛋白共表达及其临床意义

目的:探讨p14ARF、p16INK4a蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达、意义及相关关系。方法:采用免疫组织化学SP方法对103例NSCLC组织中p14ARF和p16INK4a蛋白的表达进行检测。结果:103例NSCLC组织中p14ARF、p16INK4a蛋白表达阴性率分别为70.87%和43.69%,差异有显著性(P<0.01)。其中35例p14ARF、p16INK4a蛋白表达共阴性,共阴性率达33.98%(35/103),鳞癌中共阴性率明显高于其它组织类型(P<0.01)。p14ARF、p16INK4a蛋白表达阴性相互间无显著相关性(P>0.05)。临床Ⅲ+Ⅳ期病例两种蛋白表达阴性率明显高于临床Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)。结论:NSCLC组织p14ARF、p16INK4a蛋白表达共阴性具有明显的组织学类型特异性,两种蛋白阴性表达是各自独立的事件。

非小细胞肺癌中p14^(ARF)与p16^(INK4a)和p53蛋白表达及其相互关系的研究

目的:检测p14ARF、p16INK4a和p53蛋白在非小细胞肺癌中表达情况,对它们在非小细胞肺癌发生过程中的作用及其相互关系进行初步探讨。方法:应用免疫组化方法检测了40例非小细胞肺癌组织标本的p14ARF、p16INK4a和p53基因的表达水平。结果:非小细胞肺癌组织中p14ARF、p16INK4a和p53蛋白总阳性率分别是72.5%,50.0%和52.5%,与癌旁正常组织(分别是95.0%,92.5%,2.5%)有显著性差异(P<0.01);非小细胞肺癌中p14ARF和p53蛋白表达异常与肿瘤分期、组织类型、分化程度、淋巴结转移情况无显著相关性;p16INK4a蛋白表达水平与组织分化程度相关(P<0.05),但与肿瘤分期、组织类型、淋巴结转移情况无关;p14ARF和p53蛋白在组织中表达呈负相关,r2=-0.475(P<0.01),而p14ARF和p16INK4a蛋白表达无关;p14ARF蛋白在Ⅰ期病例中强阳性(+++)占阳性比例为41.7%,在Ⅲ期中强阳性(+++)比例为10.0%。结论:p14ARF、p16INK4a和p53三个基因在NSCLC发生过程中起重要作用,特别在肿瘤早期可能起到更为重要的作用;p14ARF和p53基因在同一调节通路上;p14ARF、p16INK4a和p53蛋白可以作为非小细胞肺癌早期生物学检测指标。

慢性乙型肝炎病毒感染与p16^INK4A基因启动子甲基化关系的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染对p16^INK4A基因启动子甲基化的影响及其在HBV相关肝细胞癌（HCC）形成中的作用。方法 选取23例HBV相关HCC癌及癌旁组织、25例慢性乙型肝炎肝穿刺组织，采用甲基化特异性PCR（MSP）检测p16^INK4A基因启动子的甲基化状态；免疫组化EnVision二步法测定肝组织内HBsAg、HBcAg、HBeAg和HBx蛋白的表达；荧光实时定量PCR检测肝组织HBVDNA含量；PCR扩增和直接测序检测HBVx基因变异。结果 癌组织p16^INK4A基因启动子甲基化阳性率（47．83％）明显高于癌旁组织（17．39％），慢性乙型肝炎患者p16^INK4A基因启动子甲基化阳性率（36．00％）与癌组织、癌旁组织差异无统计学意义。在癌旁组织和慢性乙型肝炎，p16^INK4A基因启动子甲基化者HBx蛋白表达中位数分别为3．000和0．250，明显高于非甲基化者（0．500和0．000），但在癌组织中，HBx蛋白的表达与p16^INK4A基因启动子甲基化状态无关。HBsAg、HBcAg、组织HBVDNA含量和x基因突变均与p16^INK4A基因启动子甲基化状态无关。结论 在癌前病变中，p16^INK4A基因启动子甲基化与HBx蛋白高表达有关，HBx蛋白可能通过诱导p16^INK4A基因启动子甲基化而使该抑癌基因失活，在HBV相关HCC形成中起重要作用。

抑癌基因P16^INK4A过表达在宫颈细胞学检查为非典型鳞状细胞-不能明确意义时的诊断价值

目的探讨P16INK4A过表达在宫颈细胞学检查为非典型鳞状细胞-不能明确意义(ASCUS)时的诊断价值。方法对2007年1月至11月在上海市第十人民医院妇科就诊的75例细胞学检查报告为ASCUS的妇女进行阴道镜评估与镜下活检,并同时进行液基薄层细胞学检查(thinprep cytology test,TCT)样本、活检组织样本的P16INK4A过表达检测和高危人乳头瘤病毒DNA(HPV-DNA)检测。结果75例ASCUS患者中宫颈上皮内瘤变(CIN)的发生率为59%,其中高度病变的发生率为21%。随着宫颈病变程度的加重,高危HPV与P16INK4A阳性率逐渐上升。P16INK4A免疫细胞化学及免疫组织化学染色结果一致。在良性反应性病变中,仅有1例检出P16INK4A过表达,而高危HPV阳性率为39%,两者差异有统计学意义(χ2=9.09,P<0.01)。P16INK4A过表达检测从ASCUS中检出高度病变的特异度(84.75%)和敏感度(93.75%)均高于高危人乳头瘤病毒DNA检测(分别为55.93%,87.50%),并且有更高的阴性预测值及阳性预测值。结论P16INK4A过表达与宫颈癌前病变密切相关。P16INK4A过表达检测是一种有效的ASCUS分流管理手段,较高危HPV-DNA检测能更好地提高CIN的检出率,剔除ASCUS中的良性病变,避免不必要的阴道镜检查及创伤性活检。

p16^(INK4A)、P14^(ARF)蛋白在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的:研究p16INK4A和p14ARF蛋白在各级宫颈病变中的表达特征和临床意义。方法:采用免疫组织化学S-P法对95例宫颈鳞癌(SCC)标本、80例宫颈上皮内瘤变(CIN)标本和45例正常宫颈标本进行p16INK4A和p14ARF蛋白的检测。结果:按正常宫颈-CINⅠ-CINⅡ-CINⅢ-宫颈鳞癌的顺序,p16INK4A及p14ARF的阳性率逐渐升高,具显著性差异(P<0.01),p16INK4A和p14ARF在各级宫颈病变中的表达呈正相关(r=1)。宫颈鳞癌组织中,p16INK4A、p14ARF在临床Ⅱ期中的阳性率(分别为98.3%、96.6%)均高于临床Ⅰ期的阳性率(分别为83.8%、78.4%),差异有显著意义(P1=0.025,P2=0.013);随着病理分级由Ⅰ级→Ⅲ级,p16INK4A、p14ARF的阳性率从低到高,呈正相关(r=1);p16INK4A、p14ARF与淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:p16INK4A和p14ARF蛋白的阳性表达与宫颈疾病的严重程度密切相关,在宫颈鳞癌的形成及进展中起重要作用,p16INK4A和p14ARF蛋白基因有可能成为预测宫颈鳞癌发生及病程进展的生物学检测指标。

银屑病患者皮损p16^INK4a基因CpG甲基化位点和频度

目的研究皮损表皮p16^INK4a甲基化阳性的银屑病患者基因启动子区CpG甲基化的位点和频度。方法采集50例银屑病患者皮损处皮肤,分离表皮,提取DNA。采用甲基化特异性PCR和测序法检测p16^INK4a基因启动子区CpG甲基化的位点和频度。结果p16^INK4a基因启动子甲基化阳性的患者,约50%CpG发生甲基化,均出现于特定位点。结论p16^INK4a甲基化阳性银屑病患者p16INK4a基因启动子并非完全发生甲基化。

银屑病患者皮损表皮p16^INK4a mRNA表达与启动子甲基化的相关性

银屑病斑块形成反映了角质形成细胞增殖和凋亡的异常，p16^INK4a作为一种重要的抗凋亡基因，其蛋白表达在银屑病患者皮损中异常，可能与银屑病斑块的形成有关!。

p14^(ARF)和p16^(INK4a)蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义

目的探讨p14ARF和p16INK4a蛋白在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及其与临床病理参数的关系。方法应用免疫组化SP法检测57例PTC、21例甲状腺乳头状微小癌(PTMC)和40例甲状腺腺瘤中p14ARF和p16INK4a蛋白的表达情况。结果p14ARF和p16INK4a蛋白在PTC组的表达阳性率显著低于腺瘤组及PTMC组,差异有统计学意义(分别为P<0.01和<0.05)。p16INK4a蛋白在PTMC组的阳性率明显低于腺瘤组,差异有统计学意义(P<0.05)。PTC组中,p14ARF蛋白表达与淋巴结转移成负相关;p16INK4a蛋白表达与肿瘤复发成负相关,与临床分期成正相关。结论p14ARF和p16INK4a可能参与了PTC的发生和发展,可作为临床判定其生物学行为的辅助指标。

p16^INK4a在宫颈液基细胞学辅助筛查中的标记意义

目的评价p16^INK4a在宫颈液基细胞学检查中的标记意义。方法收集74例宫颈外口和颈管的脱落细胞标本，分别进行液基细胞学检测和p16^INK4a免疫细胞化学染色，并应用杂交捕获二代法检测高危人乳头瘤病毒（HR—HPV）感染。结果74例标本中，细胞学诊断未见癌细胞或癌前病变细胞（阴性）10例，意义不明的不典型鳞状细胞（ASC—US）15例，鳞状上皮内低度病变（LSIL）28例，不除外上皮内高度病变的不典型鳞状细胞（ASC—H）5例，鳞状上皮内高度病变（HSIL）11例，鳞状细胞癌（SCC）5例。各级别病变中，HR—HPV阳性者分别为1、4、3、9、7和5例，p16^INK4a免疫细胞化学染色阳性者分别为2、5、3、8、9和5例。随着宫颈病变级别的上升，HR—HPV和p16^INK4a免疫细胞化学染色阳性率均增高。结论p16^INK4a免疫细胞化学染色增强了对不典型细胞的区分能力，可以提高宫颈癌筛查的准确性。

非酒精性脂肪肝细胞模型中INK4位点反义非编码RNA和p14^(ARF)及p16^(INK4a)的表达

目的研究INK4位点反义非编码RNA(ANRIL)、p14ARF和p16INK4a的表达与非酒精性脂肪肝细胞增殖的关系。方法油酸以不同浓度(25、50、100μmol/L)和时间(12、24、48 h)作用Hep G2细胞,采用油红O染色观察细胞内脂滴形成,同时运用ELISA检测细胞内三酰甘油含量,构建非酒精性脂肪肝细胞模型;采用MTT法检测细胞增殖情况。接着实时定量RT-PCR和Western blot检测长非编码RNA ANRIL以及其反义转录本p14ARF和p16INK4a的mRNA水平,Western blot检测p14ARF和p16INK4a蛋白表达水平。结果在50μmol/L油酸作用于Hep G2细胞24 h时,细胞增殖活力最为旺盛,且脂质含量增加明显。在这个细胞模型中ANRIL、p14ARF和p16INK4a的表达均低于正常对照组。结论不饱和游离脂肪酸作用下,ANRIL和p14ARF、p16INK4a表达呈同向性改变;在非酒精性脂肪肝细胞模型中,肿瘤抑制基因p14ARF和p16INK4a表达下降,促使Hep G2异常增殖,可能与非酒精性脂肪肝不经肝硬化阶段即癌变一定程度上存在相关性。