反义TR和p21双基因共表达对人主动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的作用

目的观察携带反义凝血酶受体(ATR)或/和p21的单、双基因重组腺病毒伴随病毒(rAAV)载体对人主动脉平滑肌细胞(ASMC)增殖与凋亡的影响。方法以携带ATR或/和p21的单、双基因rAAV感染人ASMC。半定量RT-PCR检测各基因的整合与表达;MTT法测定感染不同时间点的细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期与凋亡细胞数目的变化;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色检测凋亡细胞的比率。结果单、双基因在ASMC中均获得整合,且双基因发生了共表达;病毒感染4d时,ATR组、p21组和AP双基因组的细胞存活率与对照组相比分别降低了16.7%、21.6%和29.4%;三组的G0/G1期细胞数分别为(61.8±2.9)%、(82.5±4.0)%和(80.4±6.1)%;凋亡细胞数为(4.8±0.5)%、(5.7±0.1)%和(9.2±0.9)%;AO/EB染色显示的凋亡细胞比率分别为:对照组(1.5±0.8)%、ATR组(7.2±3.3)%、p21组(10.7±5.6)%、AP组(18.3±2.7)%。结论(1)双基因共表达对抑制细胞增殖和诱导凋亡的作用均较单基因具有较强的生物学效应。(2)为再狭窄的基因治疗提示了更优化的途径。

上颌窦恶性肿瘤p21及nm23基因表达与复发转移的关系

目的探讨p21及nm23基因蛋白表达与上颌窦恶性肿瘤复发转移的关系。方法采用免疫组化S-P法对37例上颌窦恶性肿瘤组织的p21及nm23基因蛋白表达进行检测。所有患者均随访5年以上。结果上颌窦恶性肿瘤p21和nm23-H_1阳性表达均明显低于上颌窦良性肿瘤组织的表达,上颌窦恶性肿瘤中复发或转移组的p21及nm23-H_1阳性表达均明显低于无复发或转移者的表达,二者之间的差异有显著性。结论 p21基因与上颌窦恶性肿瘤浸润及复发转移有关,而nm23基因与复发转移有关。

胃癌组织p21基因表达及基因改变的研究

目的研究胃癌组织P21蛋白表达和p21基因改变的意义．方法32例胃癌石蜡标本，其中乳头状腺癌6例，管状腺癌9例，粘液腺癌8例，低分化腺癌7例，未分化癌2例，存在淋巴结转移的标本23例，32例癌旁正常胃粘膜组织作对照．应用ABC免疫组化方法检测P21蛋白表达，单链构象多态性分析（SSCP）检测p21基因改变．参照文献确定p21蛋白表达的阳性标准及SSCCP检测p21基因异常标准，并对结果进行统计学分析．结果胃癌组织P21蛋白表达阳性率56．3％（18／32），其中管状腺癌77．8％（7／9），乳头状腺癌83．3％（5／6），粘液腺癌37．5％（3／8），低分化腺癌42．9％（3／7），未分化癌0％（0／2），存在淋巴结转移组为43．5％（10／23），无淋巴结转移组为88．9％（8／9），癌旁组织为90．6％（29／32）．P21蛋白表达阳性率胃癌组织较癌旁组织明显降低（P＜0．05），与胃癌伴淋巴结转移呈负相关（P＜0．05），不同病理类型间未见差异显著（P＞0．05）．PCR－SSCR分析18．8％（6／32）胃癌组织存在p21基因改变．结论p21基因以异常表达及基因改变的方式参与胃癌发生、发展．

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin/SAHA体外抑制人卵巢浆液性囊腺癌细胞的实验研究

目的:卵巢恶性肿瘤是妇科三大恶性肿瘤之一,其死亡率居妇科恶性肿瘤第一位。目前手术是治疗卵巢恶性肿瘤的主要方法,且术后常辅以紫杉醇和铂类为主的化疗,但化疗常常由于肿瘤细胞发生耐药而导致化疗失败。因此对于卵巢癌的治疗迫切需要寻找新的突破。方法:是对体外培养人卵巢浆液性囊腺癌上皮细胞,取对数生长期细胞接种于96孔细胞培养板上,每组设6个复孔。采用全定量PCR方法检测p21基因mRNA含量的表达。结果:体外实验证实组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)能够诱导肿瘤细胞周期阻滞于G0/G1期和/或G2/M期,从而抑制肿瘤细胞的增殖率,具有很强的临床应用价值。结论:本次实验探讨不同浓度下的组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin、SAHA在人卵巢浆液性囊腺癌细胞系的作用和机制,为巢浆液性癌的治疗提供新的思路。

p21^(WAF1/CIP1) gene DNA sequencing and its expression in human osteosarcoma

Background Mutation and expression change of p21 WAF1/CIP1 may play a role in the growth of osteosarcoma. This study was to investigate the expression of the p21 WAF1/CIP1 gene in human osteosarcoma,p21 WAF1/CIP1 gene DNA sequence change and their relationships with the phenotype and clinical prognosis.Methods p21 WAF1/CIP1 gene in 10 normal people and the tumours of 45 osteosarcoma patients were examined using polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) with silver staining. The PCR product with an abnormal strand was sequenced directly. The p21 WAF1/CIP1 gene mRNA and P21 protein of 45 cases of osteosarcoma were investigated by using in situ hybridization and immunohistochemistry,respectively. Results The occurrence of P21 protein in osteosarcoma was 17.78% (8/45),and p21 WAF1/CIP1 mRNA expression in osteosarcoma was 42.22% (19/45). The p21 WAF1/CIP1 gene DNA sequencing of amplified production showed that in p21 WAF1/CIP1 gene exon 3 of 36 cases of human osteosarcoma,there were 17 cases (47.22%) with C→T at position 609; 10 normal blood samples’ DNA sequence analysis yielded 8 cases (80.00%) with C→T at the same position. Conclusions Along with the increase of malignancy,the expression of p21 WAF1/CIP1 mRNA and P21 protein in osteosarcoma tends to decrease. It is uncommon for the p21 WAF1/CIP1 gene mutation to occur in human osteosarcoma. As a result, the possible existence of tumour subtypes of p21 WAF1/CIP1 gene mutation should be investigated. Our research leads to the location of p21 WAF1/CIP1 gene polymorphism of Chinese osteosarcoma patients,which can provide a basis for further research.