筋脉通对糖尿病大鼠坐骨神经NADPH氧化酶p22-phox亚基表达的影响

目的观察中药筋脉通对糖尿病大鼠坐骨神经NADPH氧化酶p22-phox亚基表达的影响。方法将STZ诱导的糖尿病大鼠随机分为模型组,维生素C组,筋脉通小、中、大剂量组,并设立正常对照组,连续灌胃16周。检测各组治疗前及治疗后4、8、12、16周的体重、血糖;测定第16周时大鼠机械痛阈值;采用免疫组化法测定大鼠坐骨神经NADPH氧化酶p22-phox亚基的表达,并进行半定量分析。结果与正常组相比,各组糖尿病大鼠体重均显著下降(P<0.01),血糖均明显升高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠体重及血糖在各时间点均无显著差异(P>0.05)。与正常组相比,模型组、VC组、筋脉通小、大剂量组机械痛阈值显著降低(P<0.01);各治疗组机械痛阈值较模型组均明显升高(P<0.01);与VC组比较,筋脉通中剂量组机械痛阈值显著升高(P<0.01)。与正常组相比,模型组及各治疗组p22亚基的IOD值明显升高(P<0.05,P<0.01);各治疗组p22亚基的IOD值较模型组均显著降低(P<0.01);与VC组比较,筋脉通中、大剂量组p22亚基IOD值显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论筋脉通能显著降低大鼠坐骨神经NADPH氧化酶p22-phox亚基的表达。

PPAR-γ2基因-C34G、NADPH氧化酶p22phox亚基基因-C242T多态性与幽门螺杆菌感染的交互作用和食管鳞状细胞癌的关系

目的探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体-γ2（PPAR-γ2）基因-C34G、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶p22phox亚基基因-C242T多态性与幽门螺杆菌（H.Pylori）感染的交互作用和食管鳞状细胞癌（ESCC）的关系。方法选择我院2010年5月~2015年3月收治的ESCCBroderⅠ级、BroderⅡ级和BroderⅢ级患者各200例,以200例健康体检者作为对照组,以上述各组患者的外周血白细胞为样本,利用PCR-RFLP检测PPAR-γ2基因-C34G和NADPH氧化酶p22phox亚基基因-C242T多态性。采用14C-UBT检测受检者H.Pylori与14C结合的每分钟衰变数（DPM）以判断H.Pylori感染情况。采用非条件Logistic回归对-C34G、-C242T多态性与H.Pylori感染的交互作用进行分析。结果 -C34G（CG）和-C34G（GG）基因型者患ESCC的风险均显著增加,-C242T（CT）和-C242T（TT）基因型者患ESCC的风险也显著增加。基因突变的协同分析发现-C34G（GG）和-C242T（TT）基因型在ESCC发生、发展存在正向的交互作用,另外在-C34G（CG）和-C242T（TT）之间、-C34G（CG）和-C242T（CT）之间及-C34G（GG）和-C242T（CT）之间均存在正向交互作用（γ均大于1）。H.Pylori感染者患ESCC的风险性均明显增高。H.Pylori感染与-C34G（CG）、-C34G（GG）、-C242T（CT）和-C242T（TT）基因型与均有正向交互作用（γ均大于1）。结论携带-C34G（CG）、-C34G（GG）、-C242T（CT）和-C242T（TT）基因型的个体属ESCC高危险人群,这些基因型和H.Pylori感染的交互作用促进了ESCC的发生、发展,应当采取根除H.Pylori或调控基因表达的措施以达到有效预防LSCC的目的。

NADPH氧化酶p22phox亚基基因His72Tyr与脂联素基因启动子-11391G/A多态性的交互作用以及与大肠癌及其分化程度的关系

【目的】探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶p22phox亚基基因His72Tyr与脂联素基因启动子-11391G/A多态性的交互作用以及与大肠癌及其分化程度的关系。【方法】选择我院2009年7月至2014年12月收治的大肠癌患者668例,分为高分化组、中分化组、低分化组、未分化组各162例,以162例健康体检者作为对照组,各组在年龄、性别、民族、籍贯和生活习惯方面无显著性差异,以上述各组患者的外周血白细胞为样本,利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析了NADPH氧化酶p22phox亚基基因His72Tyr和脂联素基因启动子-11391G/A多态性。【结果】His72Tyr(TT)基因型和-11391G/A(AA)基因型频率分布分别为50.62%和50.00%(高分化组)、64.20%和64.81%(中分化组)、69.75%和69.75%(低分化组)、76.54%和77.16%(未分化组)及22.84%和22.84%(健康对照组),上述基因型频率在高分化组、中分化组、低分化组、未分化组组与对照组之间有统计学差异(P均<0.01)。His72Tyr(TT)基因型者患大肠癌的风险显著增加(ORa高=3.46;ORa中=6.06;ORa低=7.79;ORa未=11.02)。-11391G/A(AA)基因型者患大肠癌的风险也显著增加(ORa高=3.38;ORa中=6.22;ORa低=7.791;ORa未=11.41)。基因突变的协同分析发现His72Tyr(TT)/-11391G/A(AA)基因型者在高分化组、中分化组、低分化组、未分化组与对照组中的分布频率分别为39.51%、54.32%、59.88、67.90%和11.73%,经χ2检验有显著性差异(P<0.01)。His72Tyr(TT)/-11391G/A(AA)基因型者患大肠癌的风险显著增加(ORa高=5.72;ORa中=12.09;ORa低=16.55;ORa未=26.93)。His72Tyr(TT)和-11391G/A(AA)基因型之间存在超相乘模型的交互作用(高分化至未分化组OR1*2均大于OR1×OR2)。【结论】NADPH氧化酶p22phox亚基基因His72Tyr(TT)和脂联素基因启动子-11391G/A(AA)基因型均是大肠癌的易患因素,基因多态性的交互作用增加了大肠癌的发病风险。

广东汉族人细胞色素C242T p22phox基因多态性观察

目的调查广东汉族人是否存在细胞色素C242T p22phox基因多态性。方法应用聚合酶链反应-限制性长度多态性法(PCR-RFLP)检测122名广东籍汉族人C242T p22phox基因多态性。结果CC基因型频率为0.877,CT+TT基因型频率为0.123,C等位基因频率为0.934,T等位基因频率为0.066。结论广东汉族人存在C242T p22phox基因多态性,该基因多态性存在种族差异。

单核细胞趋化因子-1受体CCR2基因190A/G、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶p22phox亚基基因C242T多态性与吸烟的交互作用增加非酒精性脂肪性肝病的发病风险

目的探讨单核细胞趋化因子-1（MCP-1）受体CCR2基因190A/G、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶p22phox亚基基因C242T多态性与吸烟的交互作用与非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的关系。方法采用病例-对照研究的方法,以600例NAFLD患者及600例健康对照者的外周血白细胞为样本,利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术分析了MCP-1受体CCR2基因190A/G和NADPH氧化酶p22phox亚基基因C242T多态性。结果 190A/G（GG）基因型和C242T（TT）基因型频率分布在病例组分别为50.17%、50.00%,在对照组分别为23.83%、24.17%,二者经χ^2检验差异有统计学意义（χ^2=88.8462,P=0.0031;χ^2=85.8100,P=0.0039）。190A/G（GG）基因型者患NAFLD的风险显著增加（OR=3.2171,95%CI 1.9351-5.2184）。C242T（TT）基因型者患NAFLD的风险也显著增加（OR=3.1379,95%CI 1.7973-5.2362）。基因突变的协同分析发现190A/G（GG）/C242T（TT）基因型者在NAFLD组和对照组中的分布频率分别为39.67%和13.00%,二者经χ2检验差异有统计学意义（χ^2=118.3021,P=0.0017）。190A/G（GG）/C242T（TT）基因型者患NAFLD的风险显著增加（OR=5.0211,95%CI 3.1853-7.7926）。病例组的吸烟率显著高于对照组（χ^2=92.2234,P=0.0025）,吸烟者患NAFLD的风险显著增加（OR=3.3032,95%CI 1.9147-5.7413）,吸烟与190A/G（GG）/C242T（TT）基因型均有交互作用（r=3.9983;r=3.8553）。结论 190A/G（GG）、C242T（TT）基因型和吸烟是NAFLD的易患因素,基因多态性与吸烟的交互作用增加了NAFLD的发病风险。

白细胞介素-1受体相关激酶M抑制p22phox调控脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发

目的 研究白细胞介素-1受体相关激酶M(interleukin-1 receptor-associated kinase M, IRAK-M)是否调控p22phox介导脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导的巨噬细胞呼吸爆发. 方法 分离、培养小鼠腹腔巨噬细胞,细胞贴壁后分为内毒素耐受(endotoxin tolerance, ET)组和对照组(NC组). ET组预先10 μg/L LPS刺激2 h后,予100 μg/L LPS再刺激,NC组不作预先处理,直接100 μg/L LPS刺激,3 h后收集上清液,ELISA法检测TNF-α和IL-6水平,试剂盒检测过氧化氢(H2O2)、超氧阴离子(O2-)水平;细胞裂解后提取蛋白,Western blot法检测IRAK-M和p22phox蛋白表达.采用IRAK-M 小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)干扰IRAK-M,分组为:LPS刺激组(NC-control组)、干扰IRAK-M+LPS刺激组(NC-si-IRAK-M组)、内毒素耐受组(ET-control组)和干扰IRAK-M+内毒素耐受组(ET-si-IRAK-M组),PCR检测干扰效率并再次检测IRAK-M和p22phox的蛋白表达.IRAK-M干扰成功后,分组为:二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)+内毒素耐受组(control-placebo组)、夹竹桃麻素(apocynin)+内毒素耐受组(control-apocynin组)、DMSO+干扰IRAK-M+内毒素耐受组(si-IRAK-M-placebo组)和干扰IRAK-M+apocynin+内毒素耐受组(si-IRAK-M-apocynin组),采用apocynin抑制p22phox,再次取上清液检测TNF-α、IL-6以及H2O2、O2-水平. 结果 与NC组比较,ET组TNF-α、IL-6水平和H2O2、O2-水平均降低,p22phox表达水平降低,而IRAK-M表达水平升高(P<0.05);干扰IRAK-M后,与ET-control组比较,ET-si-IRAK-M组蛋白水平明显降低,p22phox的蛋白水平明显升高(P<0.05);干扰IRAK-M并抑制p22phox后,与si-IRAK-M-placebo组比较,si-IRAK-M-apocynin组TNF-α、IL-6和H2O2、O2-的水平明显降低(P<0.05). 结论 IRAK-M通过抑制p22phox对内毒素诱导的小鼠巨噬细胞呼吸爆发产生负向调控作用.

赤芍对颈动脉球囊损伤术后兔血管内膜增生的干预作用研究

目的探讨高脂喂养兔颈动脉球囊损伤术后增殖的血管内膜丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)、还原型辅酶(NADPH)氧化酶亚单位p22phox表达、血管内皮功能及赤芍提取物的干预影响。方法喂养高脂饲料,并给予高、中、低剂量赤芍提取物(75、50、25 ml,分别含生药75、50、25 g)10周。采用Clowes方法建立兔颈总动脉球囊损伤模型。免疫组化染色测定兔颈动脉新生内膜成分,增殖细胞核抗原(PCNA)及巨噬细胞表达,血管特殊染色观察型胶原增生,图像分析系统测定新生内膜面积;张力换能器及血管环张力曲线Chart软件测定血管内皮功能;放射免疫法测定血浆血管紧张素(Ang)及醛固酮(ALD)含量;原位杂交染色及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测增生的血管内膜中MKP-1及p22phox的mRNA表达。结果赤芍提取物可抑制型胶原增生,减少PCNA阳性细胞数,减轻新生内膜形成;降低血浆Ang水平及减弱血管对Ang的收缩反应;显著降低p22phox mRNA表达;上调高脂喂养兔颈动脉球囊损伤后MKP-1 mRNA表达,其中以高剂量组作用最明显(P<0.05或P<0.01)。结论赤芍抑制血管内膜增生作用与保护血管内皮功能有关,其机制可能涉及抗氧化应激、抗血管内皮炎症反应及阻断丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路有关。

赤芍药提取物对兔颈动脉介入术后增殖内膜相关基因表达的影响

目的:探讨赤芍药提取物对高脂喂养兔颈动脉球囊损伤后血管内膜增殖与还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚单位p22phox及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。方法:采用Clowes方法建立兔颈总动脉球囊损伤模型,并给予赤芍药提取物。免疫组化染色测定兔颈动脉新生内膜成分、增殖细胞核抗原(proliferat ingcellnuclearantigen,PCNA)及巨噬细胞表达,血管特殊染色观察1型胶原增生,图像分析系统测定新生内膜面积;原位杂交染色及逆转录聚合酶链反应检测增殖血管内膜的NADPH Oxidase p22phox及MCP-1 mRNA水平。结果:赤芍药提取物可减少PCNA阳性细胞数,抑制型胶原增生,减轻新生内膜形成;显著降低NADPH Oxidase p22phox及MCP-1mRNA表达。结论:赤芍药抑制血管内膜增殖程度,其机制可能与抗氧化应激及抗血管内皮炎症反应有关。