p28^(GANK)的表达与食管鳞癌转移的相关性

目的研究p28GANK表达在食管鳞癌转移中的意义。方法免疫组化检测p28GANK在78例食管鳞癌及对应的癌旁组织中的表达水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测p28GANK在两株食管癌高低转移细胞中的表达差异。结果免疫组化结果提示p28GANK在食管癌组织中阳性表达率为67.95%(53/78),显著高于对应癌旁组织阳性表达率11.42%(8/78)(P<0.01);统计分析提示,p28GANK在癌组织表达水平与患者分期、淋巴结转移、淋巴管浸润、远处转移有显著相关性(P<0.01或P<0.05);qRT-PCR及Western blot法结果提示p28GANKmRNA及蛋白在两株高转移食管癌细胞株表达水平均显著高于对应的低转移细胞系(P<0.05)。结论 p28GANK在高转移性食管癌组织及细胞系中表达显著上调。

p28 GANK在结肠癌中的表达及其意义

背景:结肠癌是消化系统常见恶性肿瘤之一。p28GANK促进人类多种肿瘤恶性演变,然而其在结肠癌中的作用尚未明确。目的:探讨p28GANK在结肠癌中的表达及其意义。方法:纳入2006年1月～2007年2月浙江省湖州市中心医院收治的结肠癌患者78例,应用免疫组化法检测患者癌组织及其相应癌旁非癌组织标本p28GANK的表达情况,分析其在结肠癌和癌旁组织中的表达差异,以及p28GANK表达与结肠癌临床病理特征和预后的关系。结果:p28GANK在结肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织[69.2%(54/78)对15.4%(12/78)](P<0.01)。结肠癌组织p28GANK表达与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移、Dukes分期相关(P<0.05)。p28GANK阳性表达与结肠癌患者术后生存期缩短显著相关(P<0.01)。结论:p28GANK表达与结肠癌恶性程度相关,其高表达提示患者预后不良。

慢性EAE模型C57BL/6J小鼠脑和脊髓EBI3和p28 mRNA表达

目的:观察IL-27两个亚单位EBI3 mRNA和p28 mRNA在慢性实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型C57BL/6J小鼠脑和脊髓动态表达的变化,探讨其在EAE发病机制中的作用。方法:72只近交系无特定病原体的6～8周健康雌性C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、佐剂组和慢性EAE模型组,采用RT-PCR技术观察不同时期脑和脊髓EBI3 mRNA和p28 mRNA的表达变化。结果:EAE组小鼠在发病初期即有EBI3 mRNA和p28 mRNA的表达升高,在疾病高峰期迅速增加,并在慢性期仍维持在较高水平;与空白对照组和佐剂组相比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。空白对照组小鼠脑和脊髓EBI3 mRNA和p28 mRNA的表达与佐剂组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IL-27有可能在早期促进EAE发病,并维持最后阶段的炎症反应。

查菲埃立克体P28蛋白抗原免疫印迹调查犬单核细胞埃立克体病

目的 以查菲埃立克体P2 8蛋白抗原免疫印迹法对犬单核细胞埃立克体病作流行病学调查 ,为该病的防治提供依据。方法 收集广东犬埃立克体病发生地的犬血清 ,用基因工程制备的查菲埃立克体P2 8融合蛋白抗原与犬血清作免疫印迹 ,检测犬血清中的抗P2 8抗体。结果 2 12份犬血清行免疫印迹 ,89份 (42 % )阳性 ;这些阳性反应的血清绝大部分来自广州市和深圳市的野外工作犬 ,而南海市观赏犬的血清均为阴性。广西省南宁市的野外工作犬的 36份标本仅 3份为弱阳性。高水平的P2 8抗体出现在 4～ 10月 ,与当地蜱的活动期平行。结论 犬单核细胞埃立克体病在我国为局部流行 。

补体C3d-p28增强阿尔茨海默病DNA疫苗Th2型免疫反应的研究

目的 探讨补体C3d-p28作为分子佐剂,在阿尔茨海默病DNA疫苗免疫反应中的作用。方法 分别将重组质粒p（Aβ3-10）10,p（Aβ3-10）10-C3d-p28.3和空载体pc DNA3.1（＋）用肌肉注射的方法免疫8-10周龄的雌性BALB/c鼠。质粒注射前24 h,布比卡因肌肉注射诱导轻微的肌肉变性。应用ELISA方法检测血清抗Aβ抗体的滴度、抗体分型、体外脾细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ的含量。免疫组织化学染色法检测免疫血清与转基因鼠脑内Aβ斑的结合能力。结果 重组质粒疫苗p（Aβ3-10）10仅诱导出低滴度的抗Aβ抗体,产生了Th1/Th2混合型的免疫反应。而重组质粒疫苗p（Aβ3-10）10-C3d-p28.3诱导出较高滴度的抗Aβ抗体,体外脾细胞培养上清液中IFN-γ低和IL-4高,即引起了Th2型细胞免疫反应,同时产生的抗Aβ抗体能够与双转基因鼠APP/PS1脑中沉积的Aβ斑块结合。结论 补体C3d-p28分子佐剂能够增强抗Aβ抗体的产生并且诱发Th2型的免疫反应。

p28GANK在食管胃交界部癌中的表达研究

目的探讨p28GANK在食管胃交界部(EGJ)癌中表达的临床意义。方法选取66例患者手术切除的EGJ癌及对应切缘癌旁组织标本,采用HE染色进行组织病理学观察,免疫组化染色检测p28GANK在EGJ癌及癌旁组织中的表达,对结果进行分析。结果鳞状细胞癌、腺癌分别占19.7%(13/66)、80.3%(53/66);肿瘤组织侵犯淋巴管或血管的占28.2%(19/66);肿瘤淋巴结转移的占45.5%(30/66)。p28GANK在鳞状细胞癌与腺癌中的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05);p28GANK在EGJ癌组织中的阳性表达率明显高于其在对应癌旁组织中的阳性表达率(P<0.05);p28GANK在EGJ癌中阳性表达与肿瘤淋巴结转移及较晚的TNM分期有关(P<0.05)。结论 p28GANK在EGJ癌中高表达,可能是EGJ癌重要的分子标志物。

山羊关节炎-脑炎病毒P28蛋白的表达与间接ELISA方法的建立

为建立检测山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)血清抗体的间接ELISA方法,本研究将原核表达并纯化的CAEV P28蛋白作为检测抗原,采用方阵法确定包被抗原和待检血清的最佳工作浓度,经过对反应条件的优化建立了CAEV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅对CAEV血清检测为阳性,对口蹄疫、山羊痘和蓝舌病病毒的阳性血清检测结果均为阴性;敏感性试验表明标准阳性血清1∶3 200倍稀释时,检测结果仍为阳性。该方法的批内和批间重复试验的变异系数分别小于7%和10%。对人工感染山羊血清进行检测,该ELISA方法最早可以在第2周检出抗体,琼脂凝集免疫扩散试验(AGID)最早可以在第4周检出抗体;与AGID试验方法相比,ELISA检出率提高27.2%。结果表明,本研究所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和可重复性,为该病的诊断和监测提供了有效的技术手段。

p28GANK蛋白在肝细胞性肝癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨p28GANK蛋白在肝细胞性肝癌（HCC）组织中的表达及其临床意义。方法 收集HCC组织及其相应癌旁组织60例（其中32例伴有肝硬化组织）、正常肝组织30例,采用免疫组化法检测HCC、癌旁组织、肝硬化组织、正常肝组织组织中p28GANK蛋白的表达,分析p28GANK蛋白表达水平与HCC患者临床病理特征关系。结果 p28GANK蛋白在HCC、癌旁肝组织、肝硬化组织性、正常肝组织阳性表达率分别为71.7%、10.0%、12.5%、6.7%,HCC中p28GANK蛋白的阳性表达率高于其他组织（P〈0.05）。HCC患者中,低分化（Ⅲ-Ⅳ级）、淋巴结和（或）远处转移及TNM分期Ⅲ＋Ⅳ者p28GANK蛋白表达阳性率分别高于高分化（Ⅰ-Ⅱ级）、无淋巴结和（或）远处转移、TNM分期Ⅰ＋Ⅱ者（P〈0.05）。结论p28GANK蛋白表达可能与HCC的发生发展有关,p28GANK可作为HCC诊断的分子标志物。

补体C3d-p28对阿尔茨海默病DNA疫苗的免疫增强作用

目的探讨补体C3d-p28作为分子佐剂,在阿尔茨海默病DNA疫苗基因免疫中的作用。方法在第1、8、22、43、64、85、106、127天,将重组质粒p(Aβ3-10)10、p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3和pcDNA3.1(+)肌肉注射于APP/PS1双转基因鼠后腿股四头肌内。疫苗接种前、自第2次注射开始每次接种后7天取鼠眶静脉血共8次,以ELISA法检测抗Aβ抗体的滴度和分型;第8次(最后1次)眶静脉取血后进行6d的Morris水迷宫实验,通过定位航行和空间探索实验评估小鼠空间学习记忆能力。水迷宫实验结束后处死小鼠,以ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清液中白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)水平,免疫组化染色法检测小鼠脑内Aβ斑的表达。结果 p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3组抗Aβ抗体水平高于p(Aβ3-10)10组[(55.03±8.93)μg/mLvs.(27.32±7.69)μg/mL,t=-4.455,P<0.05],p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3组抗体类型主要是IgG1型[(50.64±6.96)μg/mL],明显高于p(Aβ3-10)10组[(14.15±3.16)μg/mL,P<0.05]。与p(Aβ3-10)10组比较,p(Aβ3-10)10-C3dp28.3组Morris水迷宫实验平均逃避潜伏期变短、穿越平台次数和穿越平台所在象限停留的时间比例明显增多(均P<0.05);脾细胞培养上清液中IL-4水平增高[(110.22±18.12)pg/mL vs.(170.12±22.16)pg/mL,P<0.05]、IFN-γ水平减低[(800.12±80.11)pg/mL vs.(640.12±70.53)pg/mL,F=6.152,P<0.05];脑内沉积的Aβ斑块明显减少(P<0.05)。结论补体C3d-p28分子佐剂使p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3抗Aβ抗体的产生增加、Th2型免疫反应增强,转基因鼠空间学习记忆能力提高。

猪IL27p28蛋白分子的三维结构模建的研究

利用生物信息学手段分析了猪白细胞介素IL27p28(IL27p28)蛋白的二级结构及特征,并运用线索化／折叠识别方法模建了猪IL27p28蛋白分子的三维空间结构,它是一种与4-螺旋细胞因子超家族中的牛粒细胞集落刺激因子(G-CSF)类似,并且含有多个功能结构位点的全α型蛋白质．在此基础上,结合氨基酸特性,分析其可能的功能位点,发现其中5个功能结构位点分布在蛋白质纵轴的两端．包括1个蛋白激酶C磷酸化位点,3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和一个N-豆寇酰化位点,推测蛋白质纵轴的两端是其重要的功能结构区域．

癌基因p28^(GANK)突变体的构建及其对p53的调控

目的构建癌基因p28GANK缺失不同ankyrin序列的突变体,进一步研究p28GANK的功能及在肝癌发生发展中的作用。方法利用QuikChangSite-DirectedMutagenesisKit构建p28GANK5个ankyrin缺失突变体并检测各个突变体对p53的影响。结果构建出分别缺失第1个ankyrin(39～71aa)、第2个ankyrin(72～104aa)、第3个ankyrin(105～137aa)、第4个ankyrin(138～170aa)和第5个ankyrin(171～203aa)的突变体,琼脂糖凝胶电泳及蛋白免疫印迹法验证正确。野生型p28GANK可促进p53降解,其他突变体对p53的表达无明显影响。结论成功构建了p28GANK的5个突变体,证实p28GANK对p53的调控需要全部的ankyrin序列,为ankyrin的研究和p28GANK对肝癌的调控作用研究奠定了基础。

siRNA沉默p28GANK对结肠癌细胞增殖的影响

研究发现p28GANK表达与结肠癌恶性程度相关,其高表达提示预后不良。然而,p28GANK在结肠癌中的作用尚未完全明确。目的:探讨沉默p28GANK对结肠癌细胞增殖能力的影响。方法:以针对p28GANK基因的慢病毒携带siRNA转染人结肠癌HT29细胞,以蛋白质印迹法检测干扰效果,以MTT法检测细胞增殖,以平板克隆实验检测细胞克隆能力,以流式细胞术检测细胞周期变化。结果:与HT29、Con-HT29细胞相比,Si-HT29细胞中p28GANK蛋白表达水平显著降低;细胞增殖速度显著减缓;细胞克隆数量显著减少;G0/G1期细胞比例显著增多,S期细胞比例显著减少,PI值显著降低(P<0.05)。结论:沉默p28GANK在结肠癌细胞中的表达可抑制细胞增殖能力,使细胞周期阻滞。p28GANK可作为治疗结肠癌的新靶点。

TRa1基因转录后小片段P28、P43在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的分析TRa1基因转录后小片段P28、P43在甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中的表达水平及其与临床病理的关系。方法采用实时荧光定量PCR法(RT-PCR)和凝胶电泳法分别扩增目的片段和分离不同片段的条带,再利用紫外透射分析仪扫描各条带的光密度来检测31例PTC组织及癌旁组织中Mt-P28、Mt-P43的表达情况。结果甲状腺癌组Mt-P28平均灰度值(0.77±0.34)明显高于癌旁组(0.31±0.18);Mt-P43平均灰度值(0.85±0.21)明显高于癌旁组(0.34±0.15),差异均具有统计学意义(P<0.05);Mt-P28表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移及临床分期无关(P>0.05);Mt-P43表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移无关(P>0.05)而与临床分期有关(P<0.05)。Mt-P28与Mt-P43两者表达水平不具有相关性(r=0.266,P=0.071)。结论 Mt-P28、Mt-P43表达水平的升高倾向于病变恶性程度更高,对预测PTC不良预后有一定的临床应用价值,两种因子对于PTC的预防和治疗有指导意义。

肝细胞性肝癌中p28GANK基因的表达与凋亡基因bax、bcl-2表达的关系

目的探讨p28GANK基因在肝细胞性肝癌组织中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法收集肝细胞性肝癌组织68例、正常肝组织30例,采用免疫组化法检测标本中p28GANK基因、凋亡基因Bcl-2和Bax的表达情况。结果 p28GANK在肝细胞性肝癌和正常肝组织中的阳性表达率分别为73.5%和6.7%,肝细胞性肝癌中p28GANK基因的表达高于正常肝组织(P<0.01)。肝细胞性肝癌组织Bax的表达明显低于正常肝组织(P<0.05),而Bcl-2的表达明显高于正常肝组织(P<0.05)。肝细胞性肝癌组织p28GANK的表达与Bcl-2的表达呈正相关(P<0.05),但与Bax的表达无明显相关性(P>0.05)。结论 p28GANK蛋白表达与肝细胞性肝癌的发生发展可能相关,p28GANK和凋亡抑制基因Bcl2的共同表达可能在肝细胞性肝癌中起协同作用。

含有Etp28基因昆虫杆状病毒表达载体的构建

以含有柔嫩艾美耳球虫（广东株）子孢子折光体抗原Etp28基因的重组质粒pGEM－T－Etp28为材料，分别构建了可表达GST／6×His－Etp28融合蛋白和Etp28非融合蛋白的昆虫杆状病毒转移载体质粒pAcGHLT－A－Etp28和pSXIVVI＋X3-Etp28，并探讨了两种重组转移载体质粒的特点和应用前景．

柔嫩艾美耳球虫(广东株)子孢子折光体抗原p28基因的分析

将克隆的柔嫩艾美耳球虫广东株p28基因与柔嫩艾美耳球虫MerckstrainLS18株的折光体抗原p28基因和USDA－APIno．24株折光体抗原GX3262基因进行了序列比较．发现广东株和MerckstrainLS18株的折光体抗原核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别为99．9％和100％，且基因内富含AGC重复顺序；而GX3262的基因序列为P28基因C-端的组成部分，并无特别的疏水和亲水区．

鼻咽癌中P28^(GANK)基因表达的研究进展

鼻咽癌治疗存在复发率高的难题，近年来以癌基因为靶点的生物学治疗被认为是未来治疗鼻咽癌的有效手段。分子机制研究表明，在细胞增殖和肿瘤发生发展中具有极为重要的作用。

线粒体甲状腺激素受体基因P28及P43与甲状腺疾病的相关研究进展

甲状腺疾病近年来发病率呈上升趋势,线粒体在肿瘤发生中的作用正日益受到重视。有文献报道线粒体结构功能的异常,如线粒体生物氧化功能的改变、激活介导的细胞凋亡途径异常、DNA突变等均与肿瘤发生、发展密切相关。线粒体内存在甲状腺激素受体P28及P43,故本文就线粒体内甲状腺激素受体P28及P43与甲状腺良恶性疾病的关系研究进行综述。

甲状腺线粒体激素受体P28在甲状腺良恶性肿瘤中表达及其临床意义

目的探讨线粒体甲状腺激素受体P28(MT-P28)基因在甲状腺乳头状癌及结节性甲状腺肿组织中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测31例甲状腺乳头状癌、31例结节性甲状腺肿及其各自对应的病变旁正常组织中MT-P28 mRNA的表达水平。结果结节性甲状腺肿组的MT-P28 mRNA相对表达量为1.57±0.14,明显高于其病变旁正常组织的0.56±0.14,差异有统计学意义(P<0.05)。甲状腺癌组的MT-P28 mRNA相对表达量为1.73±0.30,明显高于癌旁正常组织的0.75±0.14,差异有统计学意义(P<0.05)。MT-P28 mRNA表达在结节性甲状腺肿与其病变旁正常组织的倍比关系为2.65±0.64,差异有统计学意义(P<0.05);MT-P28 mRNA表达在甲状腺癌与癌旁正常组织的倍比关系为4.20±0.73,差异有统计学意义(P<0.05)。MT-P28 mRNA表达与甲状腺癌患者性别、年龄及肿瘤大小无关(P>0.05),而与淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05)。结论 MT-P28 mRNA在甲状腺良恶性肿瘤中表达水平不同,其表达水平的高低可能对甲状腺恶性病变的发生有促进作用,表达水平越高,越容易发生恶变,这对于甲状腺癌的诊断及鉴别诊断有一定的提示价值。

浙江地区汉族人群IL-27p28基因多态性与克罗恩病的相关性研究

目的探讨IL-27p28基因启动子区g.-964 T>C、第2外显子区g.2905T>G和第4外显子区g.4730T>C 3个位点的多态性与浙江地区人群克罗恩病(CD)的相关性。方法选取75例浙江地区汉族CD患者(病例组)及80例健康体检者(对照组),采用聚合酶链反应-连接酶检测,分析两组基因型频率及等位基因频率。结果对照组的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。两组g.-964位点的基因型频率及等位基因频率的差异有统计学意义(P<0.05),而g.2905和g.4730位点的基因频率及等位基因频率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-27p28基因多态位点g.-964 T>C可能与浙江地区汉族人群CD易感性有关,g.2905T>G和g.4730T>C多态性与浙江地区汉族人群CD无关。