鞘内注射乙酰化酶p300抑制剂Garcinol对大鼠神经病理性痛的影响

目的观察鞘内注射乙酰化酶抑制剂Garcinol对L5脊神经结扎（spinal nerve ligation,SNL）大鼠痛觉高敏行为的影响,探讨其相关机制。方法雄性SD大鼠90只,日龄40~50d,体重180~220g。随机分为六组,每组15只。N组不做任何处理,S组仅暴露L5脊神经。C、H、M、L组大鼠行SNL手术。H、M、L组分别将Garcinol按500、100、20μg/kg溶于10μl的100%二甲基亚砜溶剂中,SNL术后第3天经鞘内导管给药,每天1次,连续给药4d。C组在相同时间鞘内注入10μl二甲基亚砜溶剂。于SNL术前1d（T0）、术后1d（T_1）、3d（T_2）、5d（T_3）、7d（T_4）、9d（T_5）、11d（T_6）、14d（T_7）测定各组大鼠热缩足潜伏期（thermal withdrawal latency,TWL）。T_4时取腰段脊髓,Western blot检测p300和乙酰化p65蛋白的表达水平,采用免疫荧光法测定脊髓背角核因子κB（NF-κB）的表达。结果 T_1~T_7时C、L、M、H组大鼠TWL明显短于N组,p300和乙酰化p65蛋白含量明显高于N组,脊髓背角NF-κB表达明显多于N组（P〈0.05）。T_3~T_7时M、H组大鼠TWL明显长于C组,p300和乙酰化p65蛋白含量明显低于C组,H组脊髓背角NF-κB表达明显少于C组（P〈0.05）。结论 p65乙酰化水平的增高参与了神经病理性痛的形成,鞘内注射乙酰化酶p300抑制剂Garcinol可以发挥镇痛作用,其机制可能与抑制p300介导的p65乙酰化,降低NF-κB表达水平有关。

可逆性胆碱酯酶抑制剂治疗脑小血管病所致认知功能障碍的电生理研究

目的观察可逆性胆碱酯酶抑制剂多奈哌齐对脑小血管病(CSVD)所导致的认知功能障碍(CI)患者在神经电生理方面的影响。方法将60例CSVD合并CI患者按随机数字表法分为治疗组和对照组,每组30例,两组均给予常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用多奈哌齐治疗,每晚睡前服用,连服4周。分别于治疗前、后进行定量脑电图(qEEG)和事件相关电位(ERP)P300检查,比较两组患者全脑δ+θ波与α+β波比值和P300值变化。结果两组患者用药后(δ+θ)/(α+β)值均较治疗前下降,且治疗组治疗后较对照组低(P<0.05);与治疗前比较,治疗组P300潜伏期缩短、波幅增高(P<0.05),而对照组患者治疗前后P300值变化无统计学差异(P>0.05)。结论 CSVD所致CI患者经多奈哌齐治疗后神经电生理指标发生变化,推测多奈哌齐对CSVD所致CI患者认知功能有所改善。

CBP/P300溴结构域联芳基类抑制剂三维定量构效关系研究

CREB结合蛋白(CBP)和与其高度同源的P300蛋白是组蛋白乙酰化酶的两个亚型,两者通过它们的溴结构域(bromodomain,BRD)与染色质结合,目前,CBP/P300已经成为人类在肿瘤靶点领域中的研究热点。本研究基于CBP/P300溴结构域联芳基类抑制剂建立三维定量构效关系,采用比较分子力场分析法(Co MFA)和比较分子相似性指数分析法(Co MSIA)分别建立35个已知活性抑制剂的3D-QSAR模型,以确定CBP/P300溴结构域联芳基类抑制剂分子结构与生物活性之间的定量关系。Co MFA和Co MSIA模型活性数据p IC50的预测值与实验值基本一致,说明这两个模型具有较高的预测能力和统计学意义。根据Co MFA和Co MSIA模型所提供的立体场、静电场、疏水场、氢键给体场、氢键供体场等信息提出了改善此类抑制剂活性的药物设计思路,为指导设计具有更高活性的新分子和预测更加有效的CBP/P300溴结构域抑制剂提供理论依据。

组蛋白乙酰转移酶p300/CBP抑制剂的研究进展

由高度同源的腺病毒E1A相关的300 kDa蛋白(p300)和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)的结合蛋白(CBP)组成的p300/CBP家族是组蛋白乙酰转移酶(HAT)家族主要成员之一。p300/CBP参与细胞周期进展和细胞的生长、分化和发展,是一类非常重要的辅激活因子,可以调节多种关键转录调节因子的功能。p300/CBP与多种肿瘤疾病密切相关,是一个极具应用前景的肿瘤治疗靶标。综述p300/CBP抑制剂的研究进展,旨在为开发新型选择性p300/CBP抑制剂提供参考。

cAMP/PKA/CITED1信号通路介导的甲状旁腺激素在骨代谢中的作用机制

目的在动物整体水平上分析甲状旁腺激素(PTH)对成骨的调节作用,探讨Glu/Asp丰富羧基端域Cbp/p300相互作用反式激活因子1(CITED1)在骨代谢中的调节作用。方法以间断小剂量PTH皮下注射的野生型C57BL小鼠为实验组,同体积生理盐水皮下注射的野生型C57BL小鼠为对照组。处死后取股骨检测小鼠的骨代谢表型,如皮质骨、松质骨的厚度和骨量;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测量小鼠血清中Ⅰ型原胶原肽(PⅠNP)、骨钙素(OC)、骨碱性磷酸酶(BALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的浓度。取1日龄野生型C57BL小鼠头盖骨制备颅骨成骨细胞,分别经含PTH(PTH处理组)、含PTH和蛋白激酶A(PKA)信号通路特异性抑制剂H 89 2HCl(共处理组)及不含此两制剂(未处理组)的培养基培养,Real-time PCR和Western blot检测PTH处理组、共处理组、对照组颅骨成骨细胞中骨代谢相关分子的表达。结果显微CT定量测量结果,实验组小鼠反映皮质骨及松质骨的骨量和骨厚度指标均较对照组明显增高(P <0. 05,P <0. 01)。ELISA检测结果示,实验组小鼠外周血清中PⅠNP、OC、BALP水平较对照组显著增加,TRAP浓度较对照组显著降低(P <0. 01,P <0. 05)。Real-time PCR结果显示,共处理组颅骨成骨细胞OC、碱性磷酸酶(ALP)的mRNA表达较PTH处理组显著下降,TRAP的mRNA表达较PTH处理组增加(P均<0. 01)。Western blot细胞定位结果发现,不用PTH刺激的未处理组,CITED1蛋白均定位于细胞浆中;PTH处理组,CITED1明显转向细胞核;加H 89 2HCl的共处理组CITED1向胞核转移被抑制。结论PTH可能通过cAMP/蛋白激酶A(PKA)信号通路促进共转录因子CITED1出入细胞核,特异性地调节OC及ALP基因的表达,参与骨代谢的调节。