circ-RBM33靶向miR-383-3p/CKS1B轴抑制鼻咽癌细胞的增殖和转移

目的:探究circ-RBM33能否靶向miR-383-3p/CKS1B轴抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭。方法:qRT-PCR检测CNE1和HNEpC细胞中circ-RBM33、miR-383-3p表达。将CNE1细胞随机分为si-NC组、si-RBM33组、miR-NC组、miR-383-3p组和si-RBM33+anti-miR-383-3p组。分别检测细胞增殖(CCK-8法)、侵袭(Transwell法)和迁移(划痕实验)及细胞中CKS1B蛋白表达(蛋白质印迹法);荧光素酶活性实验检测circ-RBM33和miR-383-3p/CKS1B的靶向关系。结果:人鼻咽癌细胞CNE1中circ-RBM33相对表达量高于人鼻黏膜上皮细胞HNEpC,miR-383-3p相对表达量低于人鼻黏膜上皮细胞HNEpC(P<0.05)。si-RBM33组CNE1细胞中circ-RBM3相对表达量、细胞存活率、细胞侵袭数目、细划痕愈合率及细胞中CKS1B蛋白表达均低于si-NC组(P<0.05);si-RBM33+anti-miR-383-3p组CNE1细胞存活率、细胞侵袭数目、细胞划痕愈合率及细胞中CKS1B蛋白表达均高于si-RBM33组(P<0.05)。miR-383-3p组CNE1细胞中miR-383-3p相对表达量明显增加,细胞存活率、细胞侵袭数目、细划痕愈合率及细胞中CKS1B蛋白表达均低于miR-NC组(P<0.05)。转染WT-circ-RBM33/CKS1B时miR-383-3p组荧光素酶活性明显低于miR-NC组(P<0.0001)。结论:敲减circ-RBM33可能通过上调miR-383-3p表达,进而抑制CKS1B表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

胰腺癌中p33^(ING1b)基因变化及其表达研究

目的 检测胰腺癌中p33ING1b蛋白表达及基因变化情况,以了解p33ING1b在肿瘤发生过程中的作用。方法 采用免疫组化、聚合酶链反应单链构象多态性技术(PCR SSCP)和杂合型缺失(LOH)技术,检测胰腺癌中p33ING1b表达及p33ING1b基因变化情况。结果 ING1b蛋白的阳性表达率为85% (34/40),SSCP显示在40例病例中仅1例突变,LOH率为60.9% (14/23)。结论 突变与缺失表达并不是p33ING1b的主要失活形式,染色体改变可能导致p33ING1b功能下降,从而引发肿瘤发生。

p33^(ING1b)增强骨肉瘤细胞U2OS对足叶乙甙的敏感性

背景与目的:作为一个新的抑癌基因,ING1与p53有许多相似的生物学功能,如细胞生长抑制、DNA修复、凋亡和化疗敏感性等。本实验目的在于研究p33ING1b对骨肉瘤细胞药物敏感性的影响并探讨其作用机制。方法:瞬时转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,用足叶乙甙(etoposide,VP-16)处理24h,然后采用台盼蓝拒染法计数活细胞数并计算细胞生长抑制率,流式细胞仪、DAPI染色等方法检测细胞凋亡率,Westernblot技术检测p53、p21WAF1、MDM2和Bax蛋白的表达。结果:台盼蓝染色结果表明,瞬时转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,再用VP-16处理24h,细胞生长抑制率明显增加(63.1±5.1)%。流式细胞计数和DAPI染色检测结果表明,细胞凋亡率明显增加(62.7%)。Westernblot检测结果显示,外源性p33ING1b高表达明显提高了p53及其下游基因p21WAF1和Bax蛋白的表达水平,转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,再用VP-16处理24h,p53、p21和Bax蛋白表达增加。在各实验组中,MDM2的蛋白表达没有明显变化。结论:p33ING1b能够上调p53蛋白,并上调p53下游因子——p21WAF1和Bax的表达水平,通过p53依赖性凋亡信号通路,提高骨肉瘤细胞U2OS对VP-16的敏感性。

p33ING1b和p53在银屑病和基底细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨肿瘤抑制因子p53和生长抑制因子p33ING1b在人类银屑病和基底细胞癌(basal cell carcinoma,BCC)中的表达情况及临床意义。方法 :采用免疫组织化学Envision方法检测p53和p33ING1b在36例寻常型银屑病皮损(银屑病组)、28例BCC皮损(BCC组)和14例正常表皮(正常对照组)中的蛋白表达。结果:p53在正常对照组、银屑病组和BCC组中表达递增,p33ING1b在3组中表达递减,组间比较差异均有显著性(均P<0.05)。银屑病组和BCC组中,p53与p33ING1b之间均存在显著正相关(均P<0.05)。结论:p53和p33ING1b协同作用于增生性皮肤病的局部皮损,是细胞异常增殖的重要机制之一。

非小细胞肺癌中p33^(ING1b)表达的临床及生物学意义

目的:探讨p33ING1b的表达与非小细胞肺癌(Non-smallCellLungCarcinoma,NSCLC)临床病理特征的关系及其在NSCLC发生、发展中的可能作用机制。方法:用免疫组化SP法检测NSCLC和非肿瘤肺组织中p33ING1b的表达及NSCLC组织p21WAF1和Bax中的表达。结果:p33ING1b在NSCLC组织中表达率显著低于非肿瘤肺组织(P<0.01)。p33ING1b低表达与肺癌的分化、分期及淋巴结转移有关。p33ING1b的表达率在低分化组(30.77%)显著低于高分化组(80.95%)、中分化组(71.43%)(P均<0.05)。在Ⅲ期和有淋巴结转移组的表达率显著低于Ⅰ～Ⅱ期和无淋巴结转移组(P均<0.01)。p33ING1b与p21WAF1表达呈正相关(P<0.01)。结论:1)p33ING1b在NSCLC中低表达,它的低表达对判断NSCLC恶性程度、浸润甚至转移有重要价值。2)p33ING1b的低表达使p21WAF1下调在NSCLC发生、发展中可能起重要作用。

正反p33^(ING1b)对人类胰腺癌细胞SW1990生长的影响

目的:探讨p33ING1b和wtp53体外对胰腺癌细胞生物学活性的影响。方法:脂质体法将正义和反义p33ING1b以及wtp53单转染和共转染胰腺癌细胞SW1990;Western印迹法检测p33ING1b和wtp53蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞周期改变情况;特殊染色观察细胞凋亡情况。结果:转染p33ING1b组和共转染p33ING1b和wtp53组,两者蛋白水平明显较反义组和空转组高(P<0.05);共转组SW1990细胞生长周期较其他各组缩短;转染p33ING1b组和共转染p33ING1b和wtp53组,两者凋亡细胞数目较反义组和空转组多。结论:p33ING1b对细胞可能存在正性调控作用,这种作用可能主要通过p53来发挥作用的。

p33^(ING1b)对鼻咽癌细胞HNE1增殖的影响

背景与目的:作为ING1的一种主要表达产物,p33ING1b蛋白结合和稳定p53后诱导肿瘤细胞周期阻断或引起细胞凋亡。本研究通过建立高表达p33ING1b的鼻咽癌细胞HNE1模型,探讨p33ING1b对鼻咽癌细胞增殖影响及分子作用机制。方法:利用脂质体介导转染HNE1细胞,RT-PCR法筛选p33ING1b高表达的阳性克隆,绘制生长曲线检测细胞增殖速度,免疫组化法检测细胞中p53的表达分布,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测p53、p21、Stat3、C-myc和Cyclin D1蛋白水平。结果:转染ING1后p33ING1b表达水平显著升高,HNE1细胞增殖能力受到抑制,出现G0/G1期的阻滞、S期比例下降。细胞中Stat3、C-myc和CyclinD1表达水平显著降低,p53与p21表达水平上升。结论:p33ING1b可能通过促进HNE1细胞中p53和阻断Stat3两种不同信号传导通路抑制鼻咽癌细胞的增殖。

散发性结直肠癌组织p33ING1b启动子甲基化情况及其意义

目的检测散发性结直肠癌组织p33ING1b启动子甲基化情况,探讨p33ING1b在散发性结直肠癌中转录抑制的可能机制。方法选择2008年10月—2012年3月在广西医科大学第一附属医院结直肠肛门外科住院的散发性结直肠癌患者63例,收集其癌组织及相应癌旁组织切除标本;同时选择在我院行吻合器痔上黏膜环切术(PPH)患者13例,收集其术后痔上黏膜组织。采用巢式-甲基化特异性PCR(nMSP法)检测p33ING1b启动子甲基化情况,RT-PCR检测癌组织p33ING1b mRNA表达水平;采用5-氮-2-脱氧胞苷(5-aza-dC)对人结直肠癌细胞株DLD-1、Caco-2进行去甲基化干预实验。结果癌组织p33ING1b启动子甲基化阳性率为82.5%(52/63),癌旁组织为34.2%(27/63),痔上黏膜组织未检测出p33ING1b启动子甲基化,癌组织p33ING1b启动子甲基化阳性率高于癌旁组织和痔上黏膜组织(χ2=21.21,P<0.001;χ2=33.98,P<0.001)。不同性别、年龄、肿瘤位置、分化程度及有无淋巴结转移、远处转移患者癌组织p33ING1b启动子甲基化阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);不同Dukes分期患者癌组织p33ING1b启动子甲基化阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。p33ING1b启动子甲基化癌组织p33ING1b mRNA相对表达量为(0.62±0.15),低于p33ING1b启动子非甲基化癌组织的(0.75±0.17)(t=2.553,P<0.05)。5-aza-dC干预后,人结直肠癌细胞株DLD-1、Caco-2的p33ING1b启动子甲基化均被逆转,且p33ING1b mRNA相对表达量较干预前升高(P<0.05)。结论 p33ING1b启动子甲基化与散发性结直肠癌存在关联,并可能通过抑制p33ING1b mRNA的表达参与结直肠癌的发生和发展。

P33^(ING1b)、P53与HPV_(16/18)在宫颈癌中表达的相关性

目的:研究P 33ING1b、P 53蛋白及HPV16/18在宫颈癌中表达的相关性。方法:应用免疫组织化学SP方法检测了80例宫颈癌组织中P 33ING1b和P 53蛋白的表达,分析HPV16/18型在宫颈癌中的感染率与P 33ING1b及P 53的关系。结果:P 33ING1b、P 53蛋白的阳性率分别为41.25%和57.50%,共阳性表达25例(31.25%),两者间有相关性(P<0.01)。HPV 16阳性为54例(67.50%);HPV 18阳性为17例(21.25%)。HPV 16阳性例数中有39例P 53阳性(72.2%),有31例P 33ING1b阳性(57.41%),HPV 18阳性例数中有11例P 53阳性(64.71%),有9例P 33ING1b阳性(52.94%);宫颈癌组织中HPV16/18的感染与P 33ING1b、P 53蛋白表达之间均有相关性(P<0.01)。结论:P 33ING1b、P 53蛋白在宫颈癌中的表达呈正相关关系,HPV16/18在宫颈癌中的感染与P 33ING1b、P 53蛋白表达均有相关性。

p33^(ING1b)基因对人结肠癌细胞SW480生物学行为的影响

目的:构建pcDNA3.1(+)/p33ING1b真核表达载体及观察其对人结肠癌细胞SW480生长的影响。方法:构建人p33ING1b真核表达载体,采用脂质体转染方法,将pcDNA3.1(+)/p33ING1b转染人结肠癌细胞系SW480,G418筛选,挑选阳性克隆,阳性克隆经RTPCR及Westernblot鉴定后,通过生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测高表达p33ING1b基因的SW480细胞体外增殖情况,并用流式细胞仪分析细胞凋亡率的改变。结果:成功构建重组pcDNA3.1(+)/p33ING1b基因的真核表达载体,建立高表达p33ING1b基因的SW480细胞系,p33ING1b基因在SW480细胞中高表达后,其生长速度减慢,细胞凋亡率(15.4±1.7)%较空载体组(2.0±0.6)%及未转染组(1.6±0.8)%明显升高。结论:p33ING1b基因高表达对SW480细胞系具有生长抑制和促进凋亡的作用。

腺病毒介导的p33^(ING1b)过表达显著促进衰老细胞的DNA损伤修复

p33ING1b是一个较晚发现的肿瘤抑制基因ING1的主要表达形式,但是它在细胞衰老过程中的作用特别是对衰老细胞DNA损伤修复的影响还没有被阐明.本研究首先用2BS细胞构建了细胞衰老模型,通过RTPCR和Western印迹技术证实p33ING1b在衰老细胞中的表达水平下调;然后,通过构建和包装包含p33ING1b基因的腺病毒,将p33ING1b导入年轻和衰老细胞中并使其过表达,用HCR(hostcellreactivation,宿主细胞复活)方法检测年轻细胞和衰老细胞DNA损伤修复能力.实验表明,相对于年轻细胞,p33ING1b过表达使衰老细胞的DNA的损伤修复能力显著增加,说明p33ING1b在衰老细胞中的表达下调与衰老细胞DNA损伤修复能力的下降有关,也进一步证实了p33ING1b在细胞衰老过程中起着十分重要的作用.

p33^(ING1b)真核表达质粒构建及其对胃癌细胞株生长抑制凋亡的作用

目的:构建pCDNA3/p33ING1b真核表达质粒,探讨其对胃癌细胞株的生长抑制、凋亡的作用,探索新型的肿瘤治疗措施与方法。方法:构建pCDNA3/p33ING1b真核表达质粒,将p33ING1b转染至人胃癌细胞SGC-7901,研究其对胃癌细胞产生的作用。结果:重组pCDNA3/p33ING1b真核表达质粒构建成功,经p33ING1b转染的人胃癌细胞株SGC-7901生长速度减慢,融合时间变长,周期S期变短,G0/G1期延长,凋亡增加。结论:重组pCDNA3/P33ING1b质粒能在胃癌细胞SGC-7901细胞内表达,且能抑制胃癌细胞SGC-7901的生长并促进其凋亡。

P33^(ING1b)在口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:观察P33ING1b蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达情况,探讨其临床病理意义。方法:采用免疫组织化学ABC法,检测20例正常口腔黏膜和57例口腔鳞状细胞癌石蜡存档标本中P33ING1b的表达情况,并分析P33ING1b蛋白表达情况与患者临床病理特征的关系。结果:P33ING1b在大部分正常黏膜有表达,以细胞核为主,阳性表达率为90.00%,在口腔鳞状细胞癌中的表达以细胞核、细胞质共同着色为主,阳性表达率为24.56%,二者比较差异有显著性(P<0.05)。口腔鳞状细胞癌中淋巴结转移组阳性表达率为46.15%(12/26),淋巴结无转移组阳性表达率为6.45%(2/31),二者比较有显著性差异(P<0.05)。结论:P33ING1b蛋白在口腔鳞状细胞癌的发生发展中可能有重要的作用。其表达由细胞核转移到细胞质可能是主要机制;P33ING1b蛋白的表达与淋巴结转移有关,可以作为判断预后的一个潜在生物学标志。

过表达人p33^(ING1b)促进UV诱导的衰老细胞凋亡

p33ING1b是肿瘤抑制基因ING1的主要表达形式,已有的研究表明,p33ING1b参与了细胞的生长抑制、凋亡、染色质重塑、DNA损伤修复、肿瘤抑制等.但是,它在细胞衰老过程中的作用目前还不清楚.本研究分析了p33ING1b基因在细胞衰老过程中的表达情况.结果发现,无论在mRNA水平还是在蛋白水平,p33ING1b在衰老细胞中的表达均降低.通过构建和包装含p33ING1b基因的重组腺病毒,将p33ING1b导入衰老细胞中使其过表达,结果显示,p33ING1b的过表达明显促进UV诱导的衰老细胞凋亡,提示p33ING1b在衰老细胞中的表达下调与衰老细胞抗凋亡有关.

p33ING1b与p53在胆管癌中的表达及临床意义

目的:研究p33ING1b与p53在胆管癌中的表达情况,探讨它们与胆管癌临床病理参数间的关系,及两者的表达在胆管癌中的相关性。方法:采用免疫组织化学法,检测40例胆管癌组织与20例正常胆管组织中p33ING1b与p53的表达情况。结果:p33ING1b和p53在胆管癌中的阳性表达率分别为55.0%(22/40)和57.5%(23/40),而在正常胆管组织中阳性表达率分别为100%(20/20)和0(0/20),差异具有统计学意义(P<0.01)。p33ING1b与p53在胆管癌中的表达与年龄、性别、胆红素水平、肿瘤直径大小及肿瘤所在部位无相关性(P>0.05),而与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、神经侵犯及肿瘤的TNM分期密切相关(P<0.05)。p33ING1b与p53在胆管癌中的表达呈负相关(r=-0.472,P<0.01)。结论:在胆管癌组织中,p33ING1b呈低表达,而p53呈高表达。提示p33ING1b与p53可能参与了胆管癌的发生、发展、浸润及转移的过程。

P33ING1b和KAI1/CD82在贲门癌组织中的表达及其意义

目的:探讨抑癌基因P33INGlb和KAI1/CD82在贲门癌(GCA)组织中的表达及二者在GCA的发生和恶性进展中的作用。方法:选取20例成人正常贲门黏膜(正常组)和51例GCA组织(GCA组),采用免疫组织化学方法检测2组组织中P33INGlb和KAI1/CD82蛋白表达的阳性率,结合临床病理资料进行统计学分析。结果:GCA和贲门黏膜细胞的胞浆见KAI1/CD82蛋白阳性表达颗粒。正常贲门黏膜组织中KAI1/CD82蛋白表达的阳性率为85.0%,GCA组织中KAI1/CD82蛋白表达的阳性率为65.7%。伴淋巴结转移患者GCA组织中的KAI1/CD82蛋白表达水平明显低于无淋巴结转移者(P<0.05);侵透浆膜患者的GCA组织中KAI1/CD82蛋白表达水平明显低于未侵及浆膜者(P<0.05)。KAI1/CD82蛋白表达的降低或缺失与肿瘤的临床分期有关联(P<0.05)。GCA和贲门黏膜细胞的胞浆和胞核见P33INGlb蛋白阳性表达颗粒。GCA组织较正常贲门黏膜组织的P33INGlb蛋白阳性表达率降低(P<0.05);P33INGlb蛋白表达的降低或缺失与肿瘤的临床分期有关联(P<0.05)。结论:KAI1/CD82蛋白在GCA组织的表达与肿瘤的临床分期、浸润深度和淋巴结转移有关联;GCA组织中P33INGlb蛋白表达率与肿瘤的临床分期有关;抑癌基因P33INGlb和KAI1/CD82在GCA组织中的表达可作为从分子水平判定人GCA恶性生物学行为的指标。

p33^(ING1b)基因对SW480细胞生长增殖的影响

背景与目的:p33ING1b基因作为一个新的候选抑瘤基因,具有多种生物学功能。本实验旨在研究p33ING1b基因对人结肠癌细胞SW480生长的影响。方法:经Western印迹和免疫细胞化学鉴定,通过生长曲线绘制、软琼脂集落形成实验和流式细胞仪分析检测p33ING1b基因转入对SW480细胞生长增殖以及细胞周期改变和凋亡率方面的影响,并用Western印迹法,检测3组细胞p53、p21WAF1、Bax及Bcl-2蛋白的表达情况,探讨p33ING1b基因抑瘤的可能分子机制。结果:与未转染组(SW480)和空载体组(pcDNA3.1(+)/SW480)相比,p33ING1b蛋白转染组(pcDNA3.1(+)/p33ING1b/SW480)细胞生长增殖速度减慢(P<0.05);软琼脂集落形成率降低(P<0.01);凋亡率增高(P<0.05),而对细胞周期的改变不明显(P>0.05)。p33ING1b基因在SW480细胞中高表达,能有效抑制SW480细胞的生长,并促进其凋亡。Western印迹法分析显示SW480细胞中p33ING1b基因高表达,导致Bax蛋白表达水平升高、Bcl-2蛋白质表达水平降低,差异有显著性(P<0.05);p53及p21WAF1蛋白表达水平稍有升高,但差异无显著性(P>0.05)。结论:高表达外源性p33ING1b基因后,SW480细胞生长增殖速度减慢,凋亡增加,其机制可能与Bax蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调有关。

肝癌组织中p33^(ING1b)表达水平及其与p53关系和临床意义

目的探讨肝癌组织中p33ING1b表达水平及其与p53的关系和临床意义。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测55例肝癌及其癌旁组织p33ING1b mRNA水平,同时用免疫组化法检测p53蛋白表达。结果肝癌组织p33ING1b mRNA表达量为(0.410±0.175),明显低于癌旁组织(0.529±0.203)(P<0.05)。p33ING1b表达与肝癌的病理分级、淋巴结转移、包膜浸润相关,而与年龄、性别、肿瘤大小、癌栓形成、合并肝硬化无关。p53蛋白阳性肝癌组p33ING1b表达(0.492±0.196)明显高于p53蛋白阴性组(0.363±0.176)(P<0.05)。结论p33ING1b表达下调在肝癌发生、发展中起重要作用,可以作为肝癌分化、侵袭性及预后的评价指标。p33ING1b表达异常可能是野生型p53在肝癌细胞的失活机制之一。

非小细胞肺癌组织中p33^(ING1b) mRNA表达水平及生物学意义

目的探讨p33ING1b mRNA的表达水平与非小细胞肺癌(Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC)临床病理特征的关系及其在NSCLC发生发展中的可能作用及生物学意义。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测58例NSCLC患者中的癌组织及其癌旁组织p33ING1b mRNA表达水平。结果NSCLC组织中p33ING1b mRNA表达强度(0.408±0.156)低于癌旁组织(0.601±0.326),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组织中p33ING1b mRNA表达水平与病理分级、临床分期、淋巴结转移有密切关系(P<0.05),而与年龄、性别、吸烟与否、组织学类型无关(p>0.05)。结论p33ING1b mRNA低水平表达在NSCLC发生发展过程中起重要作用,P33ING1b低水平表达可作为一个预测NSCLC转移潜能以及不良预后的生物学指标。

p33^(ING1b)和p53在胶质瘤中的表达及相关性研究

目的检测p33ING1b及p53基因蛋白在脑胶质瘤中的表达及相互关系。方法选取行脑胶质瘤手术切除的新鲜胶质瘤标本40例,应用S-P免疫组织化学方法检测p33ING1b和p53基因蛋白在瘤组织及10例正常组织中的表达,选用秩相关对结果进行分析。结果 40例胶质瘤标本中p33ING1b阳性表达率为77.5%(31/40),正常组织中全部表达阳性(100%);随着肿瘤级别的增高,p33ING1b表达水平下降。p53蛋白的阳性表达率为37.5%(15/40),随着肿瘤级别的增高,p53表达水平也越高。p33ING1b与p53在胶质瘤中的蛋白表达水平呈负相关(r=-0.716,P<0.01)。结论 p33ING1b与p53的表达存在相关性,可能是影响脑胶质瘤发生发展的重要因素。