旋毛虫p49抗原基因原核表达产物的纯化

目的建立旋毛虫p49抗原基因原校表达产物的纯化方法。方法菌体经冻融、超声破菌及提取包涵体后，用离子交换和凝胶过滤层析纯化蛋白质。结果纯化后的融合蛋白P49／GST经SDS－PAGE电冰鉴定达电泳纯。双抗体夹心ELISA法检测结果表明纯化的P49／GST融合蛋白能与旋毛虫感染的鼠血清和纯化融合蛋白免疫的兔血清反应，而不与正常民和兔血清反应。结论纯化后的融合蛋白P49／GST具有较高的纯度及较强的免疫活性，可望作为旅毛虫病的免疫诊断抗原。

旋毛虫p49抗原基因克隆体外表达条件的研究

旋毛虫肌幼虫排泄一分泌（ES）抗原是用于旋毛虫病免疫检测的理想抗原，包括45kD、49kD和53kD三种主要的特异性蛋白成分。本文利用含有P49抗原基因克隆的重组表达质粒pGEX—p49，电转化大肠杆菌，获得DH5α／pGEX—p49转化子。SDS—PAGE电泳表明，含重组质粒pGEX—p49的大肠杆菌能表达-分子量为61kD的融合蛋白（p49／GST），Western—blot表明该融合蛋白能被鼠旋毛虫病阳性血清特异识别。为提高融合蛋白的表达量，本文对宿主菌诱导条件、诱导物浓度、诱导时细菌生长状态等条件与表达量的关系进行了研究。