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旋毛虫肌幼虫p53cDNA的克隆及鉴定 被引量:3
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作者 孙树民 吴秀萍 +7 位作者 王学林 付宝权 卢强 李莲瑞 郭恒 P.Boireau 陈启军 刘明远 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期532-535,共4页
根据GenBank中旋毛虫53000抗原基因的序列设计引物,用PCR技术直接从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p53 cDNA,将其克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析,结果表明,克隆到1176bp的p53 cDNA,共编码391个氨基酸。序... 根据GenBank中旋毛虫53000抗原基因的序列设计引物,用PCR技术直接从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p53 cDNA,将其克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析,结果表明,克隆到1176bp的p53 cDNA,共编码391个氨基酸。序列分析表明,p53 cDNA序列与GenBank中的旋毛虫p53基因序列相比共有12个核苷酸发生改变,二者的同源性为98%,所编码蛋白质氨基酸序列的同源性为98%。将其克隆到原核表达载体pET28a并转化至表达菌BL21star(DE3),经IPTG诱导表达后获得约48000的重组蛋白。Western blotting检测证实,p53重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别,具有很好的抗原性。 展开更多
关键词 旋毛虫 p53 cdna 克隆 表达 抗原性
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野生型p53cDNA真核表达载体的构建 被引量:1
2
作者 李艳利 王若宁 +3 位作者 李崇勇 徐桦 朱自路 陈丙莺 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期169-170,共2页
关键词 野生型p53cdna 真核表达载体 基因突变 构建 肿瘤 基因治疗
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大肠腺癌p53基因cDNA突变与突变型p53基因蛋白表达的相互关系和意义 被引量:1
3
作者 季晨阳 季丹 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 1998年第4期325-327,I045,共4页
目的:探讨大肠腺癌突变型p53基因蛋白表达与p53基因cDNA突变间的相互关系和意义。方法:对100例新鲜大肠腺癌组织采用PAb240单克隆抗体免疫组织化学染色(LSAB法)检测突变型p53基因蛋白表达、RT-PCR... 目的:探讨大肠腺癌突变型p53基因蛋白表达与p53基因cDNA突变间的相互关系和意义。方法:对100例新鲜大肠腺癌组织采用PAb240单克隆抗体免疫组织化学染色(LSAB法)检测突变型p53基因蛋白表达、RT-PCR-SSCP检测p53基因cDNA突变,并比较它们间相互关系。结果:100例大肠腺癌中,76例PAb240单抗阳性(76%),51例p53基因cDNA突变阳性(51%);PAb240单抗反应与p53基因cDNA突变比较,两者皆阳性49%,两者中一者阳性29%,两者皆阴性22%(P<0.0001)。结论:p53基因cDNA突变与其基因蛋白产物结构改变高度吻合。 展开更多
关键词 腺癌 大肠肿瘤 p53基因 基因突变 cdna
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以cDNA为内参标RT-PCR定量检测心肌细胞内p53和Bcl-2基因mRNA表达量的方法研究 被引量:2
4
作者 马中富 黄帆 +2 位作者 高劲松 马虹 叶任高 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 2002年第10期597-601,共5页
目的 :探讨 p5 3和 Bcl 2基因在急性心肌梗死时心肌细胞中 m RNA表达量的检测方法。方法 :用以c DNA为内参标的逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 p5 3和 Bcl 2基因的 m RNA表达量。结果 :p5 3基因 m RNA表达量〔m RNA/总 RNA(ng/ g... 目的 :探讨 p5 3和 Bcl 2基因在急性心肌梗死时心肌细胞中 m RNA表达量的检测方法。方法 :用以c DNA为内参标的逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 p5 3和 Bcl 2基因的 m RNA表达量。结果 :p5 3基因 m RNA表达量〔m RNA/总 RNA(ng/ g)〕依次为 :冠脉结扎后 4小时组 (5 76 4 8.78± 19776 .96 ) ng/ g>结扎后 6小时组 (339.0 6± 10 4 .11) ng/ g>结扎后 3小时组 (16 5 .4 4± 33.36 ) ng/ g>结扎后 2小时组 (88.2 5±16 .6 5 ) ng/ g>未结扎 (0 )组 (3.16± 0 .6 9) ng/ g和结扎后 1小时组 (16 .37± 2 .73) ng/ g、8小时组 (2 3.13±7.0 3) ng/ g、 12小时组 (6 .75± 2 .86 ) ng/ g,P均 <0 .0 5 ;Bcl 2基因 m RNA表达量〔m RNA/ g总 RNA(ng/ g)〕:冠脉结扎后 3小时组 (4.5 3± 1.5 9) ng/ g、 4小时组 (0 .0 2± 0 .0 1) ng/ g和 6小时组 (3.4 6±0 .39) ng/ g<结扎后 2小时组 (5 2 .4 8± 14 .18) ng/ g、8小时组 (5 9.2 4± 2 .91) ng/ g<结扎后 1小时组 (77.2 0±12 .4 8) ng/ g和未结扎 (0小时 )组 (81.77± 9.6 2 ) ng/ g<结扎后 12小时组 (99.6 0± 4 .71) ng/ g,P均 <0 .0 5。该种方法能对不同的样本检出不同量的 m RNA含量 ,其特异性强 ,且能检出 0 .0 2 ng/ g的 m RNA含量 ,敏感性高。 展开更多
关键词 cdna RT-PCR 定量检测 心肌细胞 BCL-2基因 mRNA p53基因
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中国肝细胞癌p53基因热点突变R249S的载体构建及其在细胞中的表达
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作者 赵晶 郭泽坤 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期131-134,149,共5页
抑癌基因p53突变是人肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中常见的现象,中国江苏启东地区的HCC患者中p53基因的第249位密码子突变AGG→AGT/Arg→Ser(R249S)被认为是热点突变。本研究以人肝cDNA为模板,扩增人全长p53基因,将其克隆到p... 抑癌基因p53突变是人肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中常见的现象,中国江苏启东地区的HCC患者中p53基因的第249位密码子突变AGG→AGT/Arg→Ser(R249S)被认为是热点突变。本研究以人肝cDNA为模板,扩增人全长p53基因,将其克隆到pCMV-Myc载体中。利用定点突变引物以pC-MV-p53为模板,构建R249S定点突变体pCMV-R249S,转染p53缺陷型的H1299细胞系。Western Blot检测表明,克隆在pCMV-Myc载体中的p53基因和249位密码子热点突变的p53基因都可以在H1299细胞系中表达。 展开更多
关键词 p53 HCC 热点突变 cdna 定点突变 WESTERNBLOT
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FREQUENT STRUCTURE ALTERATIONS OF p53 GENE IN NASOPHARYNGEAL CARCINOMA 被引量:1
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作者 龙江斌 区宝祥 +1 位作者 梁启万 李辉梅 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 1998年第3期145-149,共5页
By southern hybridization with 1. 8 kb cDNA probe,a high frequency (40. 5 % ) of structural abnor- mality of p53 gene was observed in primary nasopharyngeal carcinoma (NPC) biopsies. The regions of ex- ons 1 to 4 ... By southern hybridization with 1. 8 kb cDNA probe,a high frequency (40. 5 % ) of structural abnor- mality of p53 gene was observed in primary nasopharyngeal carcinoma (NPC) biopsies. The regions of ex- ons 1 to 4 of the gene were examined by polymerase chain reaction-single strand con formation polymor- phism,no point mutation was found. Because very low rate of point mutation had been reported in exons 5 to 8, we considered that structural abnormality in the region of e-cons 1 to 8 of the gene might be uncom- mon in NPC. The spectrophotometer scanning analysis of autoradiograms and rehybridization investigation of nitrocellulose filter with exon 11 probe indicated that most of structure aberrations we observed might be rearrangement occurring in exon 11. 展开更多
关键词 nasopharyngeal carcinoma p^(53) gene MUTATION
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人鼻咽与鼻咽癌组织p53调节基因差异表达的研究 被引量:5
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作者 李虹 韩为农 +2 位作者 张玲 谢鹭410078长沙 姚开泰 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期448-450,共3页
目的 用cDNAArray比较鼻咽癌组织及正常组织基因表达谱 ,研究鼻咽癌组织内p5 3调节基因表达差异。方法 Atlas人类肿瘤cDNA表达阵列 7742 1滤膜杂交后 ,用AtlasImage 1.0 1a分析膜杂交结果 ,RT PCR反应验证膜杂交结果 ,免疫组化证实... 目的 用cDNAArray比较鼻咽癌组织及正常组织基因表达谱 ,研究鼻咽癌组织内p5 3调节基因表达差异。方法 Atlas人类肿瘤cDNA表达阵列 7742 1滤膜杂交后 ,用AtlasImage 1.0 1a分析膜杂交结果 ,RT PCR反应验证膜杂交结果 ,免疫组化证实基因在蛋白质水平的表达改变。结果 在 5 88个肿瘤相关基因中 ,共有 134个基因表达上调 ,88个基因表达下调。膜上有p5 3调节基因 32种 ,其中 13种显示差异表达 ,有 11个表达上调 ,2个表达下调。结论 在鼻咽癌组织内 ,p5 3的功能失控 ,MDM2、p2 1和Bax可能对鼻咽癌细胞的生长起重要的调控作用。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 p53调节基因 基因表达 鼻咽癌
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