镉致鸡脾淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响

应用吖啶橙/溴化乙锭荧光染色(AO/EB)法、DNA琼脂糖凝胶电泳及半定量RT-PCR法检测了氯化镉在浓度0～30μmol/L范围内对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响.结果表明,浓度为0～30μmol/L的镉能引起鸡脾脏淋巴细胞凋亡及干扰p53mRNA的表达,低浓度镉引起的细胞凋亡与p53mRNA的表达密切相关,而高浓度的镉能够导致鸡脾脏淋巴细胞坏死.

肝癌中医证型与野生型p53mRNA、N-ras蛋白表达相关性研究

目的:观察肝癌中医证型与野生型p53mRNA、N-ras表达相关性。方法:选择肝癌脾虚证36例和湿热证患者24例,应用原位杂交和免疫组化方法分别检测其肝癌组织野生型p53mRNA和N-ras蛋白表达,比较2组之间的差异。结果:脾虚证组野生型p53mRNA表达水平显著低于湿热证组(P<0．05);脾虚证组N-ras蛋白表达水平略低于湿热证组(P>0．05)。结论:野生型p53mRNA表达与旰癌中医证型有关,野生型p53 mRNA低表达是区别脾虚证和湿热证的特征之一。

加味香砂六君子汤对大鼠胃癌前病变胃黏膜Bax、Bcl-2、P53mRNA表达的影响

目的:加味香砂六君子汤在胃癌前病变(PLGC)模型大鼠胃黏膜的Bax、Bcl-2、P53mRNA表达方面的影响及作用机理研究。方法:120只健康Wistar大鼠按照随机数字表法分为空白对照组和模型组、维霉素组、加味香砂六君子汤高、中及低剂量组,造模后给予药物干预治疗,通过免疫组化法,检测Bcl-2、Bax及P53mRNA表达水平。结果:加味香砂六君子汤各剂量组Bcl-2蛋白阳性表达率较模型组及维霉素组显著降低(P<0.05),各剂量组Bax蛋白阳性表达率较模型组及维霉素组明显增高(P<0.05)。各干预组p53mRNA蛋白表达不同程度降低,且明显低于模型组(P<0.05);其中加味香砂六君子汤中剂量组的作用效果最显著,与其他各组相比,差异显著(P<0.05)。结论:加味香砂六君子汤可调控胃癌前期病变大鼠胃黏膜Bcl-2、Bax表达水平,降低p53mRNA的表达,具有治疗PLGC的作用。

中波紫外线照射对HaCaT细胞p53mRNA和p53蛋白表达的影响

目的:研究中波紫外线(UVB)照射对永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞的p53mRNA和p53蛋白表达的影响。方法:以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,分别用RT-PCR法和Western blot方法检测照射后不同时间点的p53mRNA和p53蛋白的表达水平;同时检测不同剂量UVB照射后同一特定时间点p53mRNA和p53蛋白的表达水平。结果:30mJ/cm2的UVB照射后HaCaT细胞的p53mRNA和p53蛋白表达逐渐增加,4h达到峰值,后逐渐恢复至照光后24h接近正常值;不同剂量UVB照射4h后,p53mRNA和p53蛋白表达随剂量增加而增加。结论:HaCaT细胞p53mRNA和p53蛋白表达与UVB照射存在一定的时间和剂量关系。

高强度次声作用小鼠后海马内P53mRNA表达的变化

目的:研究高强度次声作用小鼠后海马内P53mRNA表达的变化。方法:BALB/C小鼠暴露于16Hz声压130dB次声。每天作用2h,分别作用1、7、14、21和28d后,采用原位杂交的方法观察小鼠海马内P53mRNA表达的改变。结果:130dB次声作用后,海马区域内P53mRNA表达明显增多;在相同声压级强度的次声作用下,随着作用次数的增加,海马内P53mRNA的杂交阳性反应产物增多。结论:一定参数次声作用后,脑内P53mRNA表达的增高,提示脑组织的结构和功能发生变化,导致DNA损伤,神经元受到损害。这一效应与次声的声强和暴露时间有关。P53mRNA在次声导致脑组织损害过程中亦起着非常重要的作用。

压力对大鼠纯化视网膜神经节细胞中bcl-2、bax及p53mRNA表达的影响

目的 :通过检测不同压力下纯化培养的大鼠视网膜神经节细胞 (Retinalganglioncells,RGCs)中bcl - 2 ,bax ,p5 3mRNA表达情况 ,了解压力对视网膜神经节细胞凋亡的影响。方法 :用SD系大鼠脑源性星型胶质细胞同化培养液双界面法[1] 培养羊抗鼠Thy1.1单克隆抗体纯化的SD系大鼠RGCs;在纯化培养的RGCs上分别施加 0 ,2 0mmHg ,4 0mmHg ,6 0mmHg和 80mmHg气压 ,培养 2 4h及 4 8h后TUNEL法检测各组细胞的凋亡 ,原位杂交检测细胞中bcl- 2 ,bax及p5 3mRNA的表达。结果 :纯化的RGCs培养 12h及 2 4h用羊抗鼠FITC -Thy - 1.1单克隆抗体进行鉴定阳性 ,纯度为 97%。传三代后星型胶质细胞用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)单克隆抗体标记和鉴定阳性。培养 2 4h组TUNEL法检测对照组极少数细胞凋亡 ,2 0mmHg组见较多细胞凋亡 ,随着压力的增高细胞凋亡数增多 ,凋亡指数增高 ;与对照组相比差异均有显著性。培养 4 8h组压力≥ 2 0mmHg各组较相同压力培养 2 4h组凋亡指数增高 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。压力≥ 4 0mmHg时bcl-2mRNA表达逐渐减少 ,压力≥ 2 0mmHg时bax及 p5 3mRNA表达则逐渐增加 ;与对照组相比均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :高于 2 0mmHg压力时间超过 2 4h可激活体外培养的视网膜神经节细胞的相关凋亡基因导致细?

灯盏花素配合硝苯地平对肾性高血压大鼠肾细胞p53mRNA的影响

目的观察灯盏花素配合钙通道阻滞剂硝苯地平对双肾动脉狭窄性高血压大鼠肾损伤的保护作用,以及对大鼠肾脏细胞p53mRNA表达的影响。方法52只SD雄性大鼠随机分成五组:正常对照组、假手术组、高血压模型组、硝苯地平组、硝苯地平配合灯盏花素组。用双肾双夹法使大鼠两肾动脉狭窄,复制肾血管性高血压肾损坏模型,采用EIA法测定尿白蛋白,血清生化检测肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),荧光定量PCR测定p53mNRA含量。结果用药30天后,与模型组比较,硝苯地平组和灯盏花素+硝苯地平治疗组血压、血肌酐和24 h内蛋白排泄量明显下降(P<0.05),硝苯地平组和灯盏花素+硝苯地平治疗组肾脏细胞p53mRNA含量明显低于模型组(P<0.05),比正常对照组和假手术组高(P<0.05)。结论灯盏花素配合硝苯地平对肾血管性高血压模型有改善肾功能和降低肾脏细胞p53mRNA表达的作用。配合灯盏花素比单用硝苯地平效果好。

针刺抑制p53mRNA过表达并改善SAMP8小鼠的认知能力

[目的]探讨针刺延缓脑衰老的机制。[方法]将快速老化痴呆小鼠(SAMP8)及其正常同源对照小鼠(SAMR1)分为SAMR1对照组、SAMP8对照组、SAMP8针刺组和SAMP8非穴组。针刺组给予"益气调血,扶本培元"针法治疗;非穴组针刺双胁下两个固定非穴位点;其余两组给予等量的捉抓刺激;每天1次,持续15 d。采用Morris水迷宫测定动物的学习记忆能力;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定海马p53mRNA表达。[结果]与SAMR1对照组相比,SAMP8各组的学习能力及记忆保持能力出现明显损伤,表现为思维僵化、学习过程减慢;其海马p53mRNA表达明显升高。针刺明显改善SAMP8的认知能力,并降低海马p53mRNA表达,甚至低于正常组。[结论]SAMP8的认知损害与p53基因表达异常有关,针刺通过调节p53mRNA表达延缓SAMP8脑衰老的进程,是针刺改善衰老后认知能力下降的原因之一。

p53mRNA、bcl-2、bax蛋白在肺癌中的表达

目的 :探讨原发性肺癌中 bcl- 2、bax和 p5 3m RNA表达水平及其与临床病理特征的关系。方法 :用免疫组织化学 Dako Envision TM二步法、反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)方法分别检测5 2例肺癌组织中 bcl- 2、bax、p5 3m RNA表达情况。结果 :5 2例肺癌组织中 bcl- 2、bax蛋白表达阳性率分别为 4 2 .3%、5 9.6 1%。肺癌中 bcl- 2蛋白过表达在低分化癌、 期肺癌中高于高分化癌以及 期肺癌差异有显著性意义 (P<0 .0 1)。 p5 3m RNA、bax蛋白的阳性表达与 bcl- 2蛋白呈负相关。结论 :bcl- 2蛋白在晚期肺癌中过表达 ,p5 3m RNA、bax蛋白在早期肺癌中起着重要作用 ,它们共同参与细胞内死亡和存活信息的平衡状态的调节。

基于VEGF-VEGFR信号通路探讨补肺消结汤对肺癌大鼠的机制研究

目的:探讨补肺消结汤基于血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)或VEGF受体-2(Vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2)信号通路对肺癌大鼠的具体作用机制。方法:本研究通过建立A549肺癌大鼠移植瘤模型90例进行实验,随机分为对照组(n=30)、补肺消结汤低剂量组(n=30)及高剂量组(n=30),补肺消结汤低剂量组、高剂量组分别予以10mL/kg及20mL/kg剂量灌胃,对照组给予等量生理盐水灌胃,每组1次/天,连续持续14天。对肺组织进行病理组织学观察。同时,采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测肺癌组织中p53 mRNA表达情况,并用免疫印记方法(Western blot)检测大鼠肺组织中VEGF、VEGFR-2表达。结果:与对照组相比,低、高剂量组p53 mRNA水平表达显著升高(P<0.05)。与对照组相比,低、高剂量组VEGF、VEGFR-2表达显著降低(P<0.05)。结论:补肺消结汤可通过调控VEGF-VEGFR信号通路的基因表达,提高p53 mRNA表达水平,抑制大鼠的肺癌生长。

大鼠脊髓慢性压迫及减压后神经细胞凋亡及其相关基因的表达

目的:观察慢性压迫性脊髓损伤后及减压后神经细胞凋亡和Bcl-2mRNA,P53mRNA,CASPASE-3对神经功能恢复的影响。方法:将55只同龄Wistar大鼠,置入后路渐进式压迫装置,制作成慢性压迫性脊髓损伤模型。随机分为假手术对照组(A组5只),慢性脊髓压迫组(B组25只),减压组(C组25只)。应用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记(TUNEL)技术及原位杂交检测方法,观察各组细胞凋亡率及细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA、P53mRNA、CASPASE-3在慢性压迫性脊髓损伤后及减压后的表达,分别于损伤后及减压后1、3、7、14、28d对慢性脊髓损伤区进行细胞凋亡及原位杂交检测。结果:A、B、C三组均发现神经细胞凋亡及细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA,P53mRNA,CASPASE-3的表达,A、B、C三组细胞凋亡率及阳性细胞灰度值比较,差异有显著性意义(P<0.05)。阳性细胞表达程度与细胞凋亡的减少及神经功能的恢复相一致。结论:慢性压迫性脊髓损伤可导致大量的神经细胞凋亡,同时激活内源性保护机制,使脊髓发生适应性改变。减压可能通过激活此机制而减轻神经细胞凋亡,起到保护作用。

脑缺血再灌注后神经细胞bcl-2、bax和p53 mRNA的表达

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞 bcl- 2、bax和 p53m RNA表达的变化规律。方法 利用大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,原位杂交技术分别观察缺血 1 .5 h再灌注后 2 h、 6 h、 1 2 h、 1 d、 2 d、 3 d、 7d和 1 4 d不同时间点神经细胞 bcl- 2、 bax和 p53 m RNA的表达。结果 脑缺血再灌注 2 h在缺血周围区 bcl- 2 m RNA开始表达 ,1 d达高峰 ,之后逐渐减弱 ,再灌注 1 4 d接近假手术组水平 ;bax m RNA与 p53 m RNA均于缺血再灌注 6 h出现 ,bax m RNA于 1 d达高峰 ,3 d降至假手术组水平 ,p53 m RNA于 1～ 2 d达高峰 ,7d降至假手术组水平。结论 脑缺血再灌注后 bcl- 2、 bax和 p53m RNA的表达与缺血性损伤有一定关系 。

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞p53基因及蛋白的表达

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)p53mRNA及蛋白表达水平变化,从而了解p53是否通过异常的凋亡调节参与SLE的发病。方法以SLE疾病活动指数(SLEDAI)评价疾病活动性,流式细胞术检测p53 蛋白,半定量RT PCR检测p53mRNA。结果(1)SLE患者PBMC p53蛋白表达水平显著高于正常人(P<0 05)。(2)活动期与缓解期SLE患者PBMC p53蛋白的表达无显著差异, p53 蛋白水平与SLEDAI评分无关(P>0 05)。(3)SLE患者PBMC p53mRNA表达量与阳性率与正常相比无显著性差异(P>0 05)。结论(1)p53蛋白通过增加表达量而导致异常的淋巴细胞凋亡参与SLE发病,但与疾病活动性无关。(2) SLE患者PBMCp53mRNA表达未见异常。

重组质粒pcEgr-hp53的构建及在A549和SKOV-3细胞中电离辐射诱导p53基因和蛋白的表达

目的构建重组质粒pcEgr-hp53,并探讨其在A549和SKOV-3细胞中的辐射诱导表达及抗癌作用。方法将野生型p53 cDNA全长插入pcDNA3.1质粒多克隆位点,用Egr-1启动子替代pcDNA3.1质粒CMV启动子,构建成pcEgr-hp53重组质粒;通过脂质体介导转染法将重组质粒pcEgr-hp53和pcDNA3.1分别转染入A549和SKOV3细胞株,并经G418筛选稳定克隆并扩增培养。采用RT-PCR和流式细胞术的方法检测了不同剂量X-射线照射转染后的A549和SKOV-3细胞p53基因转录水平和蛋白表达的变化。结果经限制性内切酶酶切鉴定,辐射诱导表达载体pcEgr-hp53构建正确。与0 Gy比较,A549-hp53和SKOV-3-hp53经0.5-5 Gy照射后,p53 mRNA水平增高;A549-hp53在2-5 Gy后,p53蛋白表达显著增高(P<0.01),SKOV-3-hp53其蛋白表达随剂量(0.5-5 Gy)增加而明显增加(P<0.05-P<0.01)。A549-hp53与A549-vect相同照射剂量组比较,其p53蛋白表达在0.5 Gy照射后明显下降(P<0.05),2-5 Gy照射后明显增高(P<0.01);SKOV-3-hp53与SKOV-3-vect相同照射剂量组比较,其蛋白表达在0 Gy时增高,0.5-5 Gy照射后明显增高(P<0.01)。结论X-射线可激活早期反应生长因子Egr-1,无论肿瘤细胞p53基因状态如何,均可诱导其下游基因p53 mRNA及其p53蛋白表达增强。

姜黄素对人宫颈癌细胞株Hela细胞增殖的作用的研究以及p53表达的影响

目的:主要探讨姜黄素对人类宫颈癌Hela细胞中增殖作用的影响,以及细胞p53蛋白表达的影响。方法:本文通过不同浓度姜黄素干预人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测药物对Hela细胞的增殖抑制率;RT-PCR和Western blot检测细胞凋亡相关蛋白p53表达。结果:MTT发现姜黄素对人宫颈癌Hela细胞有一定的抑制作用,并呈时间-剂量依赖性;RT-PCR结果显示p53m RNA的表达增加;western boltting显示p53蛋白的表达增加。结论:姜黄素可一直Hela细胞增殖,其机制可能是通过增加p53基因的表达而实现。

3'-Me-DAB诱导大鼠肝癌发生过程中p53及相关基因mRNA的定量分析

背景与目的:有关肝癌中p53基因突变及p53蛋白表达异常已有报道,但其在mRNA水平上的变化尚不清楚。为了解在肝癌发生、发展和预后过程中p53、谷胱甘肽转硫酶P(glutathioneS-transferaseP,GST-P)、甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)和白蛋白mRNA水平的变化,本研究定量分析癌前病变和癌灶中GST-P、AFP和白蛋白mRNA的量。方法:在3'-甲基-4-二甲胺偶氮苯(3'-methyl-4-dimethylaminoazobenzene,3'-Me-DAB)诱发F344大鼠肝癌过程中,用激光捕获显微取样仪(LCM)准确获得大鼠肝脏中微小癌灶或癌前病变组织后,采用LightCyclerTMV3System实时(real-time)RT-PCR定量分析这些病灶组织中mRNA水平。结果:在实验的第6、12和24周,癌前病变组织中p53mRNA量均显著高于正常组织(P≤0.001)。从第6周到第24周,癌前病变组织中p53mRNA逐渐降低(P<0.01)。癌组织中p53mRNA含量高于正常组织,低于同期癌前病变组织(P=0.028和0.0136)。第24周的癌前病变组织或癌组织中细胞核呈p53强染色。各实验期,癌前病变中GST-PmRNA量明显高于正常组织和癌组织(P<0.001)。癌组织中AFPmRNA的表达量显著高于癌前病变组织和正常组织(P<0.001),白蛋白mRNA的表达量显著低于这两种组织(P<0.01)。GST-P和AFP分别在癌前病变组织和癌组织中呈灶状强表达。结论:GST-

术前大黄素联合顺铂化疗对人食管鳞癌WIG-1mRNA的影响及其机制的研究

目的探讨术前大黄素联合顺铂化疗对人食管鳞癌野生型p53诱导基因1(WIG-1)mRNA的影响及机制。方法选择2017年3月～2018年10月我院收治的40例食管鳞癌患者作为研究对象,所有患者均经术前病理组织检查确诊。患者确诊后均给予大黄素联合顺铂进行术前化疗,连续治疗3个疗程后对患者行手术治疗,根据术中所取组织部位的不同,分为观察组和对照组,每组各20例。观察组术中取病灶组织,对照组术中取癌旁组织(距离肿瘤部位≥3 cm)。运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定两组患者组织中的WIG-1m RNA表达水平和观察组手术前后WIG-1mRNA的表达水平。结果观察组患者组织中的WIG-1mRNA表达水平为0.68±0.11,高于对照组的0.04±0.01,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者手术后食管鳞癌组织中的WIG-1mRNA表达水平为0.25±0.05,低于手术前的0.68±0.11,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 WIG-1mRNA在正常组织中表达水平较低,且术前大黄素联合顺铂化疗用于食管鳞癌患者中有助于降低WIG-1mRNA的表达水平,有助于改善患者的预后,能为食管鳞癌的治疗提供分子学依据。

职业砷接触工人外周血淋巴细胞p53及下游相关基因mRNA表达变化

目的探讨职业砷接触工人外周血淋巴细胞p53及下游相关基因mRNA的表达变化和影响因素，分析其在砷遗传毒性中的作用机制。方法整群随机抽取砷冶炼厂79名工人作为接触组，非职业性砷接触人群24人为对照组。采用实时荧光定量PCR检测两组工人外周血淋巴细胞p53及其下游相关基因mRNA相对表达量，采用氢化物发生原子吸收分光光度法检测尿中无机砷（iAs）、甲基胂酸（MMA）和二甲基胂酸（DMA）含量。结果接触组尿中iAs、MMA、DMA含量均高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）；接触组外周血淋巴细胞p53及4个下游相关基因mRNA相对表达（2-△△Ct）明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；p53与下游相关基因mRNA相对表达量呈正相关（P〈0．01），相关系数均大于0．4；尿中iAs、MMA和MA与p53及其部分下游相关基因mRNA相对表达量呈正相关（P〈0．05）。结论职业砷接触工人p53及下游相关基因mRNA表达变化与无机砷代谢转化密切相关，其在砷接触人群遗传毒性和致癌效应中具有重要作用。