细菌脂蛋白耐受中核转录因子核转位机制研究

目的探讨细菌脂蛋白（BLP）耐受所致核转录因子-κB（NF-κB）活化受抑制的分子机制。方法以不同浓度BLP（10、100、1000ng／m1）预处理人急性单核细胞白血病细胞（THP-1）诱导BLP耐受，再以不同浓度BLP（O、10、100、1000ng／m1）刺激经BLP预处理（耐受组）或未经BLP预处理（对照组）的THP-1细胞，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的释放，确定最适的BLP预处理和刺激浓度。然后按此条件处理细胞不同时间（O、0．5、1、2、6h）并提取蛋白，用蛋白质免疫印迹法（Westernblotting）检测NF-κB亚单位p50和p65的表达、核转位及磷酸化情况。结果对照组中10、100、1000ng／mlBLP可剂量依赖性刺激THP1活化并产生TNF-α（pg／ml：184．86±32．51、3215．88±167．09、6042．96±245．37），耐受组中100ng／mlBLP预处理几乎完全抑制不同剂量BLP诱导的TNF-α释放。故最适BLP预处理浓度为100ng／ml，刺激浓度为1000ng／ml。Western blotting检测表明，在BLP耐受的细胞质中p50蛋白表达明显高于对照组（0h：542．9±15．6比272．8±13．2，0．5h：558．0±16．9比236．4±11．8，1h：524．7±17．5比211．6±9．8，2h：584．9±15．6比222．4±12．3，均P〈0．01），而两组间P65蛋白无明显差异。BLP刺激还可诱导对照组细胞中p50和p65发生核转位，即细胞核中p50和p65蛋白增加（1hp50：344．2±13．6比79．0±5．2，p65：78．4±4．5比0，均P〈0．05），而耐受组细胞核中p50和p65均无明显变化。另外，BLP刺激还可诱导对照组细胞中p65的536位丝氨酸发生快速磷酸化（O．5h：0．67±0．08比0．04±0．01，1h：0．71±0．11比0．04±0．01，均P〈0．05），但是在BLP刺激的耐受组细胞中磷酸化p65蛋白水平无明显变化。结论BLP耐受的THP-1细胞中抑制性NF-κB亚单位p50表达上调，而具有转活化能力的亚单位p65的核转位及磷酸化均受到抑制，可能是BLP耐受中TNF-α等NF-κB依赖的基因表达减少的分子机制之一。