藏药青鹏骨伤灵复方乙醇提取物通过抑制TLR4/p65-NFκB通路活化治疗大鼠关节炎

目的探究藏药青鹏骨伤灵复方乙醇提取物(QPEE)对大鼠关节炎的治疗作用及潜在机制。方法首先通过酊剂浸渍法获得QPEE,qRT-PCR检测其对IL-1β、TNF-α、IL-6和iNOS的mRNA表达的作用。免疫印迹法(WB)检测TLR4/p65-NFκB炎症通路相关蛋白的表达水平。通过构建胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型,评估QPEE对CIA大鼠的治疗作用。采用Micro-CT检测CIA大鼠股骨骨密度。结果在细胞水平上,QPEE对炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6和iNOS的mRNA表达具有显著抑制作用。在动物水平上,QPEE对CIA大鼠股骨骨密度具有显著改善的作用,并且对CIA大鼠脚踝肿胀具有显著的抑制作用。结论QPEE可能是通过抑制TLR4/p65-NFκB炎症通路活化,达到治疗CIA大鼠的作用。本研究为藏药青鹏骨伤灵复方在临床上治疗关节炎的应用提供了理论支持。

激活PPARα表达对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大及NFATc4与p65-NFκB相互作用的影响

目的:研究PPARα激动剂非诺贝特(fenofibrate)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的影响及机制。方法:在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大模型中加入非诺贝特(10μmol/L)预处理1 h后,采用real-time PCR检测肥大标志物ANF、BNP和β-MHC mRNA水平变化,Western blotting检测NFATc4和p65-NFκB核转位的变化,免疫共沉淀检测心肌细胞核内p65-NFκB与NFATc4之间的相互作用,EMSA检测NFATc4在BNP启动子上DNA结合活性的变化。结果:非诺贝特可显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。非诺贝特可抑制AngⅡ诱导的NFATc4和p65-NFκB的入核,以及两者在核内的相互作用。非诺贝特可抑制AngⅡ诱导的NFATc4在BNP启动子上DNA结合活性的增加。结论:非诺贝特可增强心肌细胞核内PPARα与NFATc4之间的相互作用,并减弱p65-NFκB与NFATc4之间的相互结合,进而降低NFATc4在BNP启动子上的DNA结合活性,这可能是其抑制AngⅡ诱导的心肌肥大的重要机制。

NF-κB p65通过miR-150/TRPC6信号通路改善肾缺血再灌注损伤

目的 探究NF-κB(nuclear transcription factor-κB, NF-κB)p65通过miR-150/瞬时受体电位阳离子通道6(transient receptor potential cation channel 6, TRPC6)信号通路促进肾缺血再灌注损伤的作用。方法 选取2022年8月—2023年8月由齐齐哈尔医学院医药科学研究院购买的60只雄性大鼠作为研究对象,将体质量相似的大鼠按照随机数字表法随机分为3组:假手术实验组(Sham组,n=10)、缺血/再灌注(ischemic/reperfusion, I/R)I/R实验组(n=10)、慢病毒实验组(n=40),其中慢病毒实验组分为miR-150-mimic组(n=10)、I/R+miR-150-mimic组(n=10)、NF-κB p65-si组(n=10)、I/R+NF-κB p65-si组(n=10)。评估各组大鼠肾组织中血清肌酐(creatinine, Cr)和血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、炎性因子、miR-150、NF-κB p65、TRPC6的水平。结果 I/R实验组与Sham组比较,NF-κB p65、miR-150蛋白水平降低(0.26±0.02 vs 0.79±0.03、0.34±0.08vs 1.46±0.12),TRPC6蛋白水平下降(0.35±0.04 vs. 1.08±0.15),差异有统计学意义(t=46.484、24.558、8.603,P均<0.05)。与I/R实验组相比,I/R+miR-150-mimic组TRPC6水平升高,而炎症因子水平更低,I/R+NF-κB p65-si组miR-150水平更高,炎症因子水平升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 NF-κB p65通过调节miR-150/TRPC6信号通路影响肾功能及炎症,改善肾缺血再灌注损伤。

喉鳞癌中NFκ B p65和PTEN的表达及临床意义

目的:探讨核因子κBp65(Nuclear factor-κBp65,NFκB p65)和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosometen,PTEN)在喉鳞癌组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化法检测52例喉鳞癌组织及30例癌旁正常组织中NFκB p65和PTEN的表达。结果:喉鳞癌中NFκBp65表达明显高于癌旁正常组织(P<0.01),NFκBp65的表达水平与喉鳞癌的T分期、淋巴结转移及临床分期密切相关(P<0.05)。喉鳞癌中PTEN表达明显低于癌旁正常组织(P<0.01),PTEN的表达水平与喉鳞癌的T分期、淋巴结转移及临床分期密切相关(P<0.05)。NFκB p65和PTEN蛋白在不同年龄、不同性别、不同临床分型及不同病理分级的喉鳞癌组织中表达差异无统计学意义(P>0.05)。NFκB p65和PTEN在喉鳞癌中的表达呈负相关(rs=-0.580,P<0.01)。结论:NFκB p65的高表达及PTEN的缺失表达与喉鳞癌的发生、发展有关,二者有可能成为判断喉鳞癌侵袭能力及预后评估的参考指标。

rBTI联合紫杉醇通过激活NFκB/p65促进MCF-7细胞凋亡

rBTI、紫杉醇均有抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡等作用,但两者联合用药对肿瘤细胞的影响尚不明确.本文通过MTT比色法检测rBTI与紫杉醇联合作用对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术分析,对MCF-7细胞凋亡以及ROS水平进行检测;利用qRT-PCR和Western印迹方法,检测rBTI与紫杉醇联合作用后凋亡因子表达情况.结果表明,rBTI（2.5μmol/L）与紫杉醇（0.05~0.5μmol/L）联合作用于MCF-7细胞后,能显著抑制其增殖.将rBTI与紫杉醇进行联合协同用药,诱导了MCF-7细胞凋亡及ROS的产生;同时与rBTI单独作用时相比,联合作用明显上调了p53、Bax的表达,促进了IκBα蛋白的磷酸化以及NFκB/p65的核转位;与rBTI组和紫杉醇单独作用组相比,两者联合用药明显下调了Bcl-2和CyclinD1的表达.本研究证实,rBTI联合紫杉醇通过诱导ROS的产生,激活NFκB/p65信号转导途径,协同促进MCF-7细胞的凋亡.

HER-2蛋白和NFκB/p65蛋白在人卵巢上皮性肿瘤中的表达分析

目的研究HER-2蛋白和NFκB/p65蛋白在人卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法(SABC法)检测63例卵巢组织中HER-2蛋白和NFκB/p65蛋白的表达情况,其中正常卵巢组织7例、卵巢良性肿瘤10例、卵巢交界性肿瘤10例、卵巢上皮性恶性肿瘤36例。结果HER-2蛋白在卵巢上皮性良性肿瘤、交界性肿瘤和恶性肿瘤中的表达阳性率分别为10.0%、30.0%、36.1%(P>0.05)。NFκB/p65蛋白在卵巢上皮性良性肿瘤、交界性肿瘤和恶性肿瘤中的表达阳性率分别为20.0%、50.0%、75.0%(P<0.05)。正常卵巢组织中两者均无表达。HER-2蛋白的表达与病理组织分级有关,组织细胞分化越差其表达阳性率越高,差异有显著性(P<0.05)。HER-2蛋白的表达与卵巢上皮性恶性肿瘤的组织分型、临床分期、腹水、年龄无关(P>0.05)。NFκB/p65蛋白的表达与卵巢上皮性恶性肿瘤组织分型、病理组织分级、临床分期、腹水、年龄均无关。HER-2蛋白和NFκB/p65蛋白在卵巢上皮性恶性肿瘤中的表达无相关性。结论HER-2可作为判断卵巢上皮性恶性肿瘤预后的指标之一。NFκB/p65在卵巢上皮性肿瘤的发生、发展中起一定作用。HER-2在NFκB/p65基因活化与表达过程中可能不起作用,或只是众多影响因素之一,而非独立影响因素。

NFκB p65 siRNA对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的探讨NFκB信号通路对ox-LDL诱导的HUVEC的作用。方法将传代好的HUVEC随机分为ox-LDL培养组、si-control组及si-NFκB组,转染48 h后进行敲除效率鉴定,测定不同组别细胞的存活率、胞内MDA和SOD含量。结果与其他两组比较,si-NFκB组NFκB p65的表达量、MDA含量显著降低(P<0.01),细胞的存活率、SOD含量明显升高(P<0.01);其他两组间各指标均无统计学意义(P>0.05)。结论靶向干扰NFκB p65对ox-LDL诱导的HUVEC起到保护作用。

丹白颗粒对盆腔炎性疾病后遗症大鼠子宫组织TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路的影响

目的探讨丹白颗粒对盆腔炎性疾病后遗症模型大鼠炎症因子、子宫组织Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子8(myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核转录因子κB p65(nuclear factor kappa-B p65,NF-κB p65)信号通路相关蛋白表达水平的影响,及其治疗盆腔炎性疾病后遗症的作用机制。方法将42只SD大鼠按照随机数字表法分为6个组,分别为空白对照组、模型组、丹白颗粒低剂量组、丹白颗粒中剂量组、丹白颗粒高剂量组、康妇炎胶囊组(阳性药对照组),以苯酚胶浆注射联合机械损伤法复制大鼠盆腔炎性疾病后遗症模型,造模成功后,空白组和模型组采用10 ml/(kg·d)生理盐水灌胃;丹白颗粒低、中、高剂量组分别用丹白颗粒药物混悬液1.25、2.5、5.0 g/(kg·d)灌胃;阳性药对照组用康妇炎胶囊混悬液0.25 g/(kg·d)灌胃。干预14 d后进行取材,通过苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)对各组大鼠进行子宫组织学观察,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠外周血白介素-6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-4(interleukin 4,IL-4)、白介素-10(interleukin 10,IL10)等炎症因子水平,蛋白印迹试验(western-blot,WB)法检测TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路相关蛋白表达。结果HE染色结果显示,与空白组比较,模型组子宫内膜腔壁结构改变,子宫内膜充血水肿,有大量或层状性炎性细胞浸润,纤维组织增生,上皮细胞变性坏死,腺体萎缩变形;各治疗组在宫腔粘连、子宫内膜充血水肿、炎细胞浸润等方面均较模型组有不同程度的缓解,其中以丹白颗粒高、中剂量组较为显著(P<0.05)。ELISA结果显示,与空白组比较,模型组大鼠血清IL-6、TNF-α表达显著升高(P<0.05),IL-4、IL-10表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,各治疗组IL-6、TNF-α表达均显著降低(P<0.05),IL-4、IL-10表达均显著升高(P<0.05)。WB结果显示,与空白组比较,大鼠子宫组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.05),与模型组相比,各治疗组大鼠子宫组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论丹白颗粒可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路相关蛋白的表达,下调炎症因子水平,有效治疗盆腔炎性疾病后遗症。

核因子κB p65及靶基因在CagAHp胃癌及癌前病变中的表达研究

目的 检测核因子κappaBp6 5 (NFκBp6 5 )及靶基因在幽门螺杆菌 (Hp)感染的肠上皮化生 (IM)、不典型增生 (Dys)、胃癌 (GC)组织中的表达 ,探讨表达细胞毒素相关抗原A的幽门螺杆菌(CagA+ Hp)致胃癌的分子生物学机制。方法 采用ELISA方法检测患者血液中的CagA抗体 ;以快速尿素酶试验和Warthinstarry法检测组织中的Hp ;以免疫组织化学方法检测 12 2例肠上皮化生、10 4例不典型增生及 6 3例胃癌组织中的NFκBp6 5及其靶基因c myc、CyclinD1和bcl xl的表达。结果 IMⅠ和IMⅡ、IMⅢ、DysⅠ、DysⅡ和DysⅢ以及GC组织中 ,NFκBp6 5阳性表达率在CagA阳性组较CagA阴性组高 ,差异有显著性。IMⅢ、DysⅡ和DysⅢ组织中 ,c myc、CyclinD1和bcl xl在CagA阳性组表达率较CagA阴性组高 ,差异有显著性。NFκBp6 5在IMⅢ、DysⅡ和DysⅢ组织中 ,阳性表达率与靶基因阳性表达相一致。CagA+ Hp感染的胃癌组织中 ,NFκBp6 5、c myc、CyclinD1和bcl xl阳性表达率在肠型胃癌中高于弥漫型胃癌 ,差异有显著性。结论 弥漫型胃癌与肠型胃癌的发生机制不同。CagA+ Hp感染与肠型胃癌发生有关 ;CagA+ Hp感染后 ,NFκBp6 5上调c myc、CyclinD1和bcl xl在肠上皮化生及不典型增生组织中的表达 ,促进肠型胃癌发生。通过抑制NFκBp6 5的活?

维生素D_3和他莫西芬对乳腺癌细胞凋亡影响

目的研究受1,25二羟维生素D3调控的雌激素受体α表达载体联合他莫西芬对雌激素受体阴性乳腺癌细胞凋亡的影响及其机制。方法将本室构建的含有4个拷贝维生素D反应元件(VDRE)和胸苷激酶启动子(Tk)的VDRE-Tk-ERα表达载体转染到MDA-MB-231细胞中,利用免疫荧光法检测1,25二羟维生素D3对雌激素受体α(ERα)的诱导表达并通过末端原位法检测1,25二羟维生素D3联合他莫西芬诱导转染该表达质粒的MDA-MB-231凋亡诱导效应。用免疫印迹(Western blot)法检测细胞核因子κB(NFκB)P65活性亚单位表达以及核转位情况的变化。结果1,25二羟维生素D3能够有效诱导MDA-M-231VDRE-ERα细胞内ERα的表达,在此基础上与他莫西芬联合作用较对照和单独作用组能够有效诱导该乳腺癌细胞发生凋亡。与此同时,NFκB P65活性亚单位的表达以及核转位均受到不同程度的抑制。结论利用1,25二羟维生素D3可通过靶控外源性雌激素受体α的表达进而调控NFκB P65活性亚单位的表达及活性,从而诱导细胞发生凋亡并最终恢复乳腺癌细胞对他莫西芬的化疗敏感性。

NFκB-Orai1参与NEFA诱导的内质网应激

为探究NFκB-Orai1是否参与游离脂肪酸(NEFA)诱导的内质网应激,首先通过体外添加一定浓度的非酯化脂肪酸(nonestesterifiedfatty acid,NEFAs)(1.2 mmol/L)处理大鼠肝细胞不同时间,运用Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,测定NEFAs对内质网应激(ER stress)标志分子GRP78表达量以及钙通道相关蛋白Orai1表达水平的影响。结果显示NEFAs处理12 h时GRP78、Orai1表达量极显著高于对照组(P<0.01),证明12 h NEFAs刺激诱导产生内质网应激效果最佳。而后又通过分别添加NFκB抑制剂wogonin与Orai1抑制剂2APB,结果显示抑制NFκB和Orai1后NEFAs刺激可明显降低GRP78、NFκB p65、Orai1的表达水平。结果表明NFκB-Orai1参与NEFA诱导的内质网应激。

吡格列酮预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡和线粒体超微结构的影响

目的:观察PPARγ激动剂吡格列酮对在体大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)心肌细胞凋亡和线粒体超微结构的影响以及其可能机制。方法:将42只SD大鼠随机分为假手术组(对照组)、I/R组、吡咯列酮预处理组(预处理组)。I/R组、预处理组于I/R前24 h分别由尾静脉注射相应溶媒(0.9%氯化钠溶液)及吡格列酮(3 mg/kg)。对照组不结扎前降支,4 h后取出心脏;余2组结扎前降支30 min,再灌注4 h后取出心脏。每组取8只,用透射电镜观察心肌线粒体的超微结构改变,采用TUNEL法和免疫组化法检测各组缺血心肌细胞凋亡和Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白的表达,RT-PCR法测p38 MAPK和JNK的mRNA表达;Western blot法测核转录因子-κBp65(NFκB p65)蛋白水平的表达;每组取6只,行心肌梗死面积测定。结果:①与I/R组相比,预处理组线粒体损伤程度明显减轻,梗死面积明显减少;②与I/R组相比,预处理组能明显增加Bcl-2蛋白的阳性细胞指数(P<0.05),降低心肌细胞凋亡率(P<0.05)及Bax、caspase-3蛋白的阳性细胞指数(P<0.05);③与对照组相比,I/R组p38 MAPK和JNK的mRNA表达水平及NFκB p65蛋白表达水平明显增加(P<0.05);与I/R组相比,预处理组能抑制以上水平的过度表达(P<0.05)。结论:吡格列酮预处理可通过保护心肌线粒体结构,减少心肌细胞凋亡起到抗I/R损伤作用,该保护作用机制可能与下调p38 MAPK和JNK的mRNA表达及NFκB p65蛋白表达活性有关。

内毒素致大鼠急性肝损伤的机制研究

目的:观察内毒素致急性肝损伤模型大鼠不同时间点的肝脏功能及血清内毒素含量、肝脏组织中白介素6(IL-6)表达的水平、蛋白Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、NFκB p65亚基及其磷酸化蛋白的相对表达情况,以及TLR4、IL-6 mRNA的相对表达情况,初步探讨内毒素致大鼠急性肝损伤的时效性变化及作用机制。方法:腹腔注射LPS 5mg/kg后,每0.5h测定一次动物肛温,采用断点法分别于造模后2、4、6、8、10h处死6只动物,剖取肝脏、脾脏、胸腺、肾上腺等组织,采用比色法测定采用肝脏功能指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及碱性磷酸酶(ALP)的活性,采用鲎试剂动态比浊法测定各组动物血清内毒素的含量,采用ELISA检测受试动物肝脏组织匀浆中IL-6的含量,运用Western Blot检测肝脏中TLR4、NFκB p65亚基及其磷酸化蛋白的表达,采用QRT-PCR测定肝脏中TLR4、IL-6 mRNA的相对表达情况。结果:LPS刺激后0.5h大鼠体温升高;1~2h时体温降低;4h^10h体温在不断升高,其中在4~4.5h增幅明显;4h组大鼠肝脏系数及脾脏系数显著升高;与0h组相比,各组大鼠血清内毒素含量均显著升高(P<0.01),其中4h、6h、8h组大鼠血清内毒素含量为0h组的40倍以上;LPS刺激后各组大鼠血清ALT、AST、ALP含量均明显升高趋势,且在4h或6h时达到最高;4h组大鼠肝脏中IL-6的含量均明显高于0h组;4h组大鼠肝脏中TLR4及NFκBp65亚基磷酸化的相对表达量比0h组明显升高;8h组大鼠肝脏中TLR4 mRNA的相对表达量有一定的升高趋势,4h组、6h组、8h组、10h组大鼠肝脏中IL-6 mRNA的相对表达量均有升高,其中4h和6h组差异显著。结论:内毒素致急性肝损伤模型大鼠造模4h后IL-6分泌增加,4h组大鼠肝脏组织TLR4功能加强,转核因子NFκB p65亚基的磷酸化程度增加,表明IL-6、TLR4、NFκB p65亚基三者在内毒素致肝脏组织损伤中起重要作用,LPS致急性肝损伤的作用机制与其上调TLR4-NFκB炎症信号通路中TLR4蛋白及NFκBp65亚基的磷酸化水平、增加致炎因子IL-6的表达等环节有关。