4株滑液囊支原体分离株P80脂蛋白的基因克隆及序列分析

为研究滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)P80家族脂蛋白的功能及其异同,通过PCR方法从4株滑液囊支原体分离株中分别扩增P80-1,P80-2,P80-3蛋白的基因序列并进行测序,通过生物信息学方法对P80家族脂蛋白的蛋白序列进行分析,寻找保守结构域、抗原表位,并预测功能.结果表明,P80家族脂蛋白均为碱性亲水性稳定蛋白,在N端具有较强疏水性,只有P80-2蛋白具有跨膜螺旋区;P80家族脂蛋白信号肽的位置与疏水区结果相一致;3条P80蛋白具有12个相同的保守结构域及2~4个不同的结构域;有31~32个抗原表位;二级结构均以α-螺旋和无规则卷曲为主;三级结构预测显示,P80-1蛋白具有ABC转运蛋白的功能,P80-2蛋白为周质结合蛋白Ⅱ型,P80-3蛋白具有细胞黏附功能.研究结果可为MS P80家族脂蛋白功能的深入研究以及MS致病机制、病原诊断和疫苗研制提供参考.

高镜面塑料模具钢P80在线固溶工艺实践

采用Gleeble 3800热模拟试验机进行了P80在线固溶工艺试验研究,发现开冷温度在870~930℃范围内,温度越低,在线固溶再经过时效后,硬度越高,方差减少,硬度波动降低。在保证获得单相组织,且硬度均匀的前提下,确定了开冷温度与冷却速度等工艺参数:在线固溶工艺为开冷温度860~880℃、冷却速度10℃/s,返红温度≤400℃。利用上述工艺参数进行生产实践,发现在线固溶后的P80钢板经过520℃/3 h时效处理后,组织由贝氏体+马氏体转变为粒状贝氏体+板条贝氏体,硬度为40.1 HRC,满足技术要求,可以实现对离线固溶工艺的替代。

牛病毒性腹泻病毒p80基因的分段表达及其抗原性分析

为建立以重组p80蛋白为抗原的牛病毒性腹泻（BVD）鉴别诊断ELISA方法，采用PCR方法克隆了BVDV p80基因的A、B、C三段基因片段，分别连接到原核表达载体pGEX-6P1上，获得了重组质粒pGEX-6PI-p80A、pGEX-6PI-p80B和pGEX-6P1-p80C，将其分别转化感受态茵Rosetta和BL21，经1．0mmol／L的IPTG诱导，分别得到大小为60、47和51ku的目的蛋白。经Western-blotting分析，3个目的蛋白中，只有p80B（289～477aa）基因片段所表达的融合蛋白能与BVDV阳性血清反应，表明p80蛋白的免疫优势区域集中在此部位。该融合蛋白可以作为诊断抗原用于建立ELISA诊断方法。

绵羊肺炎支原体新疆流行株的分离鉴定及其膜蛋白P80基因序列分析

本研究对新疆沙湾县疑似绵羊肺炎支原体(MO)感染的病料进行病原的分离鉴定,并对分离株进行形态学、生化和分子生物学鉴定。分离鉴定出MO13株,提取MO分离株的基因组,经PCR技术扩增MO分离株膜蛋白P80基因,将扩增序列与Gen Bank中已知的MO法国14811株膜蛋白P80基因序列进行比较。结果表明,该序列核苷酸的同源性为97.11%,推导氨基酸序列的同源性达到98.28%。该基因存在60处碱基突变,其中24处是同义突变,36处为错义突变,表明MO不同地域分离株膜蛋白P80存在一定的遗传变异。

牛病毒性腹泻病毒p80蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

为了制备牛病毒性腹泻病毒（BVDV）p80蛋白单克隆抗体,试验采用BVDV接种牛肾细胞（MDBK）,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增出BVDV的p80基因,将其定向克隆到原核表达载体pET30a,得到重组表达质粒pET30a-p80。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）表达菌,挑选单菌落并扩大培养,经IPTG诱导和SDS-PAGE以及Western-blot分析表明重组蛋白p80获得了表达,分子质量约为44ku。同时用浓缩的BVDV培养液免疫6-8周龄的Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合。利用纯化的重组蛋白p80作为检测抗原的间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,经过3次亚克隆后对获得的杂交瘤细胞进行间接免疫荧光（IFA）和抗体亚类鉴定及腹水的制备和效价的测定。结果表明：重组p80蛋白具有很好的反应性;获得8株稳定分泌针对BVDVp80蛋白的杂交瘤细胞株,分别为3E3、2A4、8H9、3G3、2B3、3G2、2G2和4A11;8株杂交瘤细胞株接种Balb/c小鼠制备腹水,采用BVDV作为包被原的间接ELISA方法测得其效价为1×10^5-1×10^7;8株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性;8株单克隆抗体的抗体亚类均为IgM/κ。说明制备的重组p80蛋白单克隆抗体可试用于建立检测BVDV抗原的诊断方法。

基于P80C592的DeviceNet通信节点接口的设计

设计了一个基于P80C592的DeviceNet现场总线通信节点接口。主机部分采用8位高性能CAN微控制器P80C592,选择PCA82C251作为报文收发器,采用双口RAMIDT7005,并通过AnyBus接口来执行通信节点接口与现场智能测控单元的高速通信。实践应用证明论文所设计的DeviceNet通信节点接口可以完全实现DeviceNet规范的要求。

基于P80C592的CAN监控网络设计与应用

详细介绍了基于P80C5 92的CAN监控网络设计方法 ,对CAN智能节点基本电路、数字量和模拟量I/O接口电路进行了全面论述 ,给出了微机CAN适配器和CAN通信软件编程的设计思路。应用实例表明笔者提出的方法是有效的 ,应用前景良好。

猪瘟病毒p80基因丝氨酸蛋白酶功能区的原核表达及小鼠免疫试验

根据已发表的猪瘟病毒Alfort株的全基因组序列,设计2对引物以Shimen细胞毒株为材料,一步法提取总RNA,利用RT-PCR和套式PCR,成功扩增出p80全长基因,包括丝氨酸蛋白酶以及NTPase/RNA解旋酶功能区,大小约为2.0kb。将p80基因中的丝氨酸蛋白酶基因克隆到原核表达载体pET-32a中,获得重组质粒pET-p80。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达得到分子量约为43ku的目的蛋白,与理论大小相符。将菌体蛋白经Ni柱纯化,获得纯化重组p80蛋白,Western blot检测表明,表达的目的蛋白能与CSFV阳性血清发生反应。用纯化的p80蛋白免疫Bal b/c小鼠,成功制备了抗p80蛋白的抗血清。

基于STM32 SPI接口的M25P80 FLASH的驱动设计与实现

介绍了STM32 SPI接口控制M25P80 FLASH驱动的设计与实现,分析了STM32SPI接口与M25P80硬件连接,探讨了SPI控制器初始化配置,最后实现M25P80读和写功能。仿真结果显示,该方案能够正确地控制M25P80 FLASH的读写。

瘟病毒的p80(NS3)蛋白

p8 0蛋白为瘟病毒一种多功能的非结构蛋白。综述了p80蛋白的丝氨酸蛋白酶 ,NT Pase酶及RNA解旋酶 3种酶活性 ,并进一步探讨了p80蛋白在瘟病毒生命周期和致性方面的重要性。

牛BVDV C_(24)V株P80蛋白在大肠杆菌中的高效表达

根据GenBank中已发表的牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)P80基因序列,自行设计并合成引物,经过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从BVDV C_(24)V株细胞培养液中扩增出P80基因,大小为560bp。利用酶切方法把目的基因克隆到大肠杆菌IPTG诱导表达载体PET32a(+)中,在大肠杆菌中得到了高效表达,这为建立ELISA方法检测BVDV抗体奠定了基础。

P80C592芯片在基于CAN总线显示通信模块中的应用

PHILIPS公司的P80C592芯片是P8XC592的无片内ROM版本 ,该芯片是现有P8XC522和PhilipsCAN控制器PCA82C200的功能相结合的产物。

时效硬化型塑料模具扁钢P80R表面轧制裂纹原因分析

通过生产试验、金相分析等手段,结合钢的化学成分和生产工艺对时效硬化型塑料模具扁钢成品表面轧制裂纹问题进行了探讨。研究结果表明P80R钢表面轧制裂纹是由于扁坯开坯轧制时产生了过热组织造成的,与钢的化学成分及表面液态Cu富集并无直接关系。通过采取合适的工艺措施,可成功解决P80R钢轧制表面裂纹问题。

基于P80C592的气动机械式自动变速器研究与系统开发

介绍了以车载气源为动力的电控机械式自动变速器原理、结构和系统整体设计,基于P80C592单片机进行选换档自动控制、离合器控制、节气门控制的基本工作原理和系统的软件实现。

牛病毒性腹泻病毒重组p80蛋白的间接ELISA方法的建立

为建立以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)非结构蛋白p80为包被抗原的间接ELISA方法,本研究将重组质粒pET30a-p80转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达菌,将转化菌培养并诱导后,通过SDS-PAGE证实了p80蛋白以包涵体形式获得了表达,将纯化后的重组p80蛋白作为包被抗原,通过方阵滴定优化反应条件,建立了检测BVDV血清抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果显示,该方法与BVDV阳性血清反应呈阳性,而与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、口蹄疫病毒及猪瘟病毒等常见病原的阳性血清无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示本实验建立的间接ELISA方法在阳性血清11280倍稀释时检测结果仍呈阳性,而病毒中和试验结果显示该阳性血清稀释度在1512时检测结果就已为阴性,表明该方法的敏感性较高。重复性试验结果显示批内批间变异系数均小于10%,表明该方法重复性较好。采用本实验建立的方法与病毒中和试验同时检测90份牛血清,结果显示二者的符合率为95%。利用本研究建立的间接ELISA方法对188份采自国内两个不同地区的牛血清样品进行了检测,检出BVDV阳性血清162份,阳性血清检出率为86.2%。本研究建立的检测BVDV血清抗体的间接ELISA方法可用于国内BVDV的血清流行病学调查,为相关疫病的防控提供技术支持。

猪瘟病毒p80基因NTPase/RNA解旋酶功能区在E.coli中的表达

采用PCR技术扩增出猪瘟病毒GXYL株和C株p80基因的NTPase/RNA解旋酶功能区(sGXNS3和sCNS3),将其克隆到表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pET-sGXNS3和pET-sCNS3。PCR、酶切和序列分析鉴定目的基因插入位置、方向和读码框完全正确。1 0mmol/LIPTG诱导得到分子量为26kD的目的蛋白,Westernblot检测表明,表达的目的蛋白能被CSFV阳性血清识别。

μC/OS-II在P80c592单片机上的移植

文章介绍了嵌入式实时操作系统μC/OS-II的特点,讨论了其在P80c592单片机上移植的可能性、移植方法以及在移植过程中涉及的基本问题,成功地将其移植到P80c592上,并编写测试程序验证了移植代码的正确性。

p80蛋白在间变性大细胞淋巴瘤中的表达意义

目的探讨p80蛋白在间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)中的表达及与预后的关系。方法用SP法检测CD30、CD20、CD45RO和p80在28例ALCL中的表达情况。结果CD30全部呈强阳性表达,p80蛋白有13例呈强阳性,p80蛋白阳性病例的免疫学表型为T细胞性11例和Null细胞性2例,无B细胞性和T、B细胞标记均表达的病例(P<0.05)。p80蛋白与ALCL的发病年龄、AnnArbor分期均无关,而与5年生存率密切相关(P<0.01)。结论CD30和p80蛋白的检测可用于ALCL的诊断、鉴别诊断及预后的判断。

猪瘟C-株和野毒株p80基因的序列分析

利用RT PCR及nPCR技术扩增出了C 株兔脾组织毒和广西玉林野毒 (GXYL) p80基因的一段长 94 2bp的序列 ,并将其克隆到PMD 18T载体中 ,测定其核苷酸序列并推导出了相应的氨基酸序列。比较C 株、GXYL株和已发表的Alfort株、Brescia株相应核苷酸序列及氨基酸序列同源性 ,核苷酸同源性最低为 87.4 6% ,最高为 98.0 8% ;氨基酸同源性最低为 94 .2 7% ,最高为 98.0 9%。