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不同猪支原体肺炎活疫苗菌株P46和P97基因序列差异性分析 被引量:8
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作者 武昱孜 邢宪平 +3 位作者 韦艳娜 熊祺琰 冯志新 邵国青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2365-2373,共9页
对我国用于生产的3种猪支原体肺炎活疫苗菌株(168株、RM48株、Z株)进行P46和P97R1R2基因序列分析,考察其保守性和差异。提取来源于四家猪支原体肺炎活疫苗生产企业的疫苗株基因组DNA,以其为模板进行PCR扩增、测序;利用DNAStar序列分析... 对我国用于生产的3种猪支原体肺炎活疫苗菌株(168株、RM48株、Z株)进行P46和P97R1R2基因序列分析,考察其保守性和差异。提取来源于四家猪支原体肺炎活疫苗生产企业的疫苗株基因组DNA,以其为模板进行PCR扩增、测序;利用DNAStar序列分析软件对测序结果和国际标准株J株、232株、7448株、7422株一起进行比对,分析3种疫苗菌株和4个标准株之间核苷酸及氨基酸差异。结果发现,疫苗株Z株、RM48株、168株的P46基因序列相似性为100%,与J株、232株相似性为99.1%,与7422株、7448株相似性为98.9%。疫苗株RM48株和Z株的P97R1R2基因序列相似性为100%;而与疫苗株168株相似性为97.5%;三个疫苗株与J株、232株、7448株、7422株的P97R1R2基因相似性仅为90.1%~93.6%,差异主要发生在R1区重复序列的次数上。本研究为临床猪支原体肺炎活疫苗菌株的检测及不同菌株之间的差异鉴定研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪支原体肺炎 猪肺炎支原体 疫苗株 p46基因 p97基因
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猪肺炎支原体P97基因抗原决定簇R1区的克隆与表达 被引量:11
2
作者 刘茂军 邵国青 +1 位作者 张映 聂向庭 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2005年第3期207-211,共5页
通过引物定点突变PCR法,扩增了猪肺炎支原体(Mhp)168株黏附因子P97基因抗原决定簇R1区基因片段,并将该基因片段插入表达载体pET-32 a(+)中构建重组质粒,再将该重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)。DNA序列分析结果表明所构建的重组质粒含有... 通过引物定点突变PCR法,扩增了猪肺炎支原体(Mhp)168株黏附因子P97基因抗原决定簇R1区基因片段,并将该基因片段插入表达载体pET-32 a(+)中构建重组质粒,再将该重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)。DNA序列分析结果表明所构建的重组质粒含有正确的目的基因。经0.1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)37℃诱导4 h,重组质粒表达的目的蛋白量可达到总蛋白的23%。W estern b lotting和ELISA试验结果证明所表达的重组蛋白具有猪肺炎支原体抗原性。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 p97基因 克隆 表达
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猪肺炎霉形体Dnak-P97融合基因的表达及其产物的生物学活性 被引量:7
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作者 王亮 乔祖健 +3 位作者 李媛 张建华 梁立 辛九庆 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期123-127,共5页
应用DNA重组技术,将猪肺炎霉形体黏附因子P97 C末端基因与猪肺炎霉形体伴侣蛋白DnakC末端基因同时克隆到pET-30a表达载体上,构建了重组表达载体。将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21,用终浓度为1.0 mmol/L的IPTG诱导6h。用BugBusterT... 应用DNA重组技术,将猪肺炎霉形体黏附因子P97 C末端基因与猪肺炎霉形体伴侣蛋白DnakC末端基因同时克隆到pET-30a表达载体上,构建了重组表达载体。将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21,用终浓度为1.0 mmol/L的IPTG诱导6h。用BugBusterTMNi-NTA His.Bind纯化试剂盒在自然条件下对目的蛋白进行了纯化;经Western-blotting和动物试验,证实,该蛋白具有良好的生物学活性。 展开更多
关键词 猪肺炎霉形体 猪霉形体肺炎 p97基因 伴侣蛋白Dnak 热休克蛋白70
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屠宰猪猪肺炎支原体P36、P46、P97 R1、P146氨基酸序列的差异分析 被引量:4
4
作者 李润成 方超 +4 位作者 卿任科 葛猛 赵墩 胡玉立 余兴龙 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期212-220,共9页
为了解猪肺炎支原体流行菌株遗传变异情况,选取2014-2017年不同时间、地点收集的17头猪肺炎支原体阳性屠宰猪肺脏灌洗液DNA为模板,进行猪肺炎支原体P36(编码具有强免疫原性的胞浆蛋白)、P46(编码具有强免疫原性的表面蛋白)、P97 R1区、P... 为了解猪肺炎支原体流行菌株遗传变异情况,选取2014-2017年不同时间、地点收集的17头猪肺炎支原体阳性屠宰猪肺脏灌洗液DNA为模板,进行猪肺炎支原体P36(编码具有强免疫原性的胞浆蛋白)、P46(编码具有强免疫原性的表面蛋白)、P97 R1区、P146高变区(猪肺炎支原体黏附气管纤毛细胞的重要功能区域)基因的PCR扩增、测序。结合GenBank登录的猪肺炎支原体相关序列进行氨基酸序列的比对分析。结果表明,比对的序列之间,P36、P46蛋白氨基酸序列同源性均在98.9%以上,但P97功能区R1区、P146多变区在菌株间存在较大差异。11个屠宰猪样本和5个GenBank登录菌株P97 R1区重复氨基酸序列数量达到14个以上,而GenBank登录的3个疫苗相关菌株(168株、168-L株、J株)及另外4个菌株、4个屠宰猪样本重复序列为9~11个不等;P146高变区氨基酸序列的差异主要集中在2个重复氨基酸序列区(R1、R2),GenBank登录的168株、168-L株、J株以及另外2个菌株,1个屠宰猪样本在R1区出现较多氨基酸缺失。168株、168-L株,6个屠宰猪样本及另外3个GenBank登录菌株在R2区出现了3~9个不等的氨基酸缺失。利用DNAStar进行抗原表位预测发现,菌株间P97 R1、P146 R1、P146 R2区氨基酸序列的差异,导致了抗原表位出现明显的变化。提示开展P97、P146等黏附因子的筛选和研究或许能进一步提升疫苗阻止猪肺炎支原体黏附气管纤毛细胞的作用,从而进一步改善疫苗的免疫效果。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 p36 p46 p97 p146 pCR 差异分析
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猪肺炎支原体P97R1抗原免疫刺激复合物的制备及对活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究 被引量:4
5
作者 韦艳娜 熊祺琰 +2 位作者 董璐 冯志新 邵国青 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1016-1019,共4页
为增强肌肉注射免疫条件下猪肺炎支原体(Mhp)活疫苗的免疫刺激能力,并补充其缺乏的针对重要黏附因子P97R1的应答,本实验采用透析法制备含有P97R1的免疫刺激复合物(ISCOM-P97R1),并将ISCOMP97R1作为活疫苗的佐剂,通过小鼠模型进行免疫学... 为增强肌肉注射免疫条件下猪肺炎支原体(Mhp)活疫苗的免疫刺激能力,并补充其缺乏的针对重要黏附因子P97R1的应答,本实验采用透析法制备含有P97R1的免疫刺激复合物(ISCOM-P97R1),并将ISCOMP97R1作为活疫苗的佐剂,通过小鼠模型进行免疫学评价。结果表明,电镜下观察所制备的ISCOM-P97R1具有ISCOM的典型蜂窝状结构,直径为30 nm^40 nm,P97R1蛋白的包封率可达85.6%。免疫后7 d即可在小鼠血清中检测到高水平的特异性P97R1抗体,并且其针对Mhp全菌蛋白的抗体也显著高于无佐剂的活疫苗对照组。结果表明,ISCOM-P97R1对Mhp活疫苗免疫刺激能力具有显著的增强作用,同时可以有效诱导产生针对P97R1的免疫应答,进一步增强了疫苗的保护能力。 展开更多
关键词 免疫刺激复合物 p97R1 猪支原体肺炎 活疫苗
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猪肺炎支原体P97基因原核表达产物单抗的制备 被引量:5
6
作者 苏锐 邵国青 张映 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第3期202-205,共4页
目的 纤毛黏附因子P97是猪肺炎支原体特异性的外膜蛋白 ,该蛋白C端的R1区是其主要的抗原决定簇。本研究以大肠杆菌表达的P97黏附因子R1融合蛋白作为免疫原免疫BALB/c鼠制备单克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)平行筛选 ,获得两株... 目的 纤毛黏附因子P97是猪肺炎支原体特异性的外膜蛋白 ,该蛋白C端的R1区是其主要的抗原决定簇。本研究以大肠杆菌表达的P97黏附因子R1融合蛋白作为免疫原免疫BALB/c鼠制备单克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)平行筛选 ,获得两株单克隆抗体杂交瘤细胞株A9-H7、H11-E7。两株杂交瘤细胞经体外连续传代 1个月并冻存复苏后均能分泌高效价的抗融合蛋白抗体 ,并能在小鼠体内形成肿瘤 ,有效诱导产生高效价的腹水抗体。两株单抗腹水的ELISA效价分别为 1× 10 6和 1× 10 5。且均与天然Mhp16 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 p97基因 融合蛋白 单克隆抗体 ELISA
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猪肺炎支原体地方毒株P97-R1基因序列分析及原核表达 被引量:4
7
作者 贾丽艳 高玉花 张映 《中国农学通报》 CSCD 2012年第20期77-82,共6页
为克隆和表达猪肺炎支原体(Myeoplasma hyopneumoniae)地方毒株Z株P97-R1基因,探索不同菌株P97-R1基因的差异及其蛋白作为诊断抗原的可能性。本研究根据GenBank登陆的猪肺炎支原体(Mhp)232株P97基因,使用Primer Permier 5.0和DNAman设... 为克隆和表达猪肺炎支原体(Myeoplasma hyopneumoniae)地方毒株Z株P97-R1基因,探索不同菌株P97-R1基因的差异及其蛋白作为诊断抗原的可能性。本研究根据GenBank登陆的猪肺炎支原体(Mhp)232株P97基因,使用Primer Permier 5.0和DNAman设计引物,以猪肺炎支原体地方毒株Z株基因组DNA为模板,用PCR方法扩增出了P97-R1基因片段,并将该基因片段连接到T-easy和pET-32a载体上分别进行测序和原核表达。测序结果表明:与参考株232株序列对比分析发现Z株P97-R1区发生了多处碱基突变;经DNAstar软件分析表明Z株包含11个5aa重复序列,232株P97-R1区包含15个5aa重复序列,推测Rl重复序列的差异与菌株毒力强弱有关。Z株P97-R1基因原核表达产物经SDS-PAGE分析,得到了分子量约为30KD的蛋白,经Western-blot鉴定表明该表达蛋白具有免疫原性。这为Mhp的诊断、预防及进一步深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 p97-R1 序列分析 原核表达
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重组蛋白CTB-P97R1对猪支原体肺炎活疫苗滴鼻免疫效果的评价 被引量:2
8
作者 韦艳娜 张珍珍 +5 位作者 王丽 王佳 陈蓉 冯志新 邵国青 熊祺琰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期74-79,共6页
为提高滴鼻免疫条件下猪支原体肺炎活疫苗的免疫效果,本研究设计引物扩增猪肺炎支原体P97R1基因,融合至霍乱毒素B亚单位(CTB)基因下游,构建了重组质粒p ET-CTB-P97R1。重组菌经IPTG诱导表达、分离纯化得到r CTB-P97R1重组蛋白。利用体... 为提高滴鼻免疫条件下猪支原体肺炎活疫苗的免疫效果,本研究设计引物扩增猪肺炎支原体P97R1基因,融合至霍乱毒素B亚单位(CTB)基因下游,构建了重组质粒p ET-CTB-P97R1。重组菌经IPTG诱导表达、分离纯化得到r CTB-P97R1重组蛋白。利用体外神经节苷脂(GM1)结合试验检测r CTB-P97R1的佐剂活性。随后将r CTB-P97R1与活疫苗混合后滴鼻免疫小鼠,免疫后采血和收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),分别检测其中的特异性Ig G抗体和s Ig A抗体的水平评价免疫效果。结果显示,r CTB-P97R1可以特异性结合GM1,具有生物学活性。小鼠免疫后的血清Ig G抗体显著高于活疫苗对照组(p<0.01),同时产生了高水平的P97R1特异性Ig G抗体(p<0.01);小鼠BALF中的s Ig A抗体也显著高于活疫苗对照组(p<0.05)。结果表明,r CTB-P97R1能够显著增强经滴鼻免疫的猪支原体肺炎活疫苗的免疫效力,同时可提升P97R1的免疫应答,有望作为经黏膜免疫的猪支原体肺炎活疫苗的新型佐剂。 展开更多
关键词 霍乱毒素B亚单位 p97R1 佐剂 滴鼻 猪支原体肺炎活疫苗
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FASN和p97在骨肉瘤组织中的表达及其与骨肉瘤远处转移的关系 被引量:10
9
作者 刘志礼 罗庆丰 +4 位作者 黄山虎 周扬 王高 邹平安 舒勇 《实用癌症杂志》 2010年第6期591-594,共4页
目的探讨FASN和p97蛋白在骨肉瘤组织中表达的相关性及其与骨肉瘤远处转移的关系。方法应用免疫组织化学SP方法,检测60例骨肉瘤组织中FASN和p97蛋白表达情况,以21例骨软骨瘤组织作为对照。结果 FASN在骨肉瘤和骨软骨瘤组织中阳性表达率... 目的探讨FASN和p97蛋白在骨肉瘤组织中表达的相关性及其与骨肉瘤远处转移的关系。方法应用免疫组织化学SP方法,检测60例骨肉瘤组织中FASN和p97蛋白表达情况,以21例骨软骨瘤组织作为对照。结果 FASN在骨肉瘤和骨软骨瘤组织中阳性表达率分别为60.0%(36/60)和28.6%(6/21),有统计学差异。p97蛋白在骨肉瘤与骨软骨瘤组织中阳性表达率分别为68.3%(41/60)和8.1%(4/21),有统计学差异。发生远处转移的骨肉瘤组织中FASN和p97蛋白阳性表达率分别为85.7%、92.9%,明显高于无远处转移骨肉瘤组织中FASN(52.2%,24/46)和p97(60.9%,28/46)阳性表达率,两者差异有显著意义(P<0.05),FASN和p97蛋白表达在骨肉瘤组织中呈显著正相关(γ=0.7)。FASN和p97蛋白阳性表达与骨肉瘤病理组织学分型无关,而与骨肉瘤的远处转移呈正相关。结论 FASN和p97蛋白在骨肉瘤组织中呈高表达,并且两者间显著相关,与骨肉瘤的发生及远处转移密切相关。 展开更多
关键词 脂肪酸合成酶 骨肉瘤 转移 免疫组织化学 缬酪肽包含蛋白
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猪肺炎支原体P97基因特异性随机肽库的构建与初步筛选 被引量:1
10
作者 贾球锋 李丽芳 +1 位作者 张映 聂向庭 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第6期5-8,共4页
构建猪肺炎支原体(Mhp)P97基因特异性随机肽库,探索从中筛选Mhp抗原表位的可行性。PCR扩增获得Mhp P97基因的部分C-端序列,产物用DNaseⅠ消化后将回收的P97随机片段(50 bp^100bp)克隆到pC89pⅧ型噬菌粒载体中,转化XL1-blue感受态细胞,... 构建猪肺炎支原体(Mhp)P97基因特异性随机肽库,探索从中筛选Mhp抗原表位的可行性。PCR扩增获得Mhp P97基因的部分C-端序列,产物用DNaseⅠ消化后将回收的P97随机片段(50 bp^100bp)克隆到pC89pⅧ型噬菌粒载体中,转化XL1-blue感受态细胞,辅助噬菌体VCSM13超感染,获得MhpP97基因特异性噬菌体随机肽库。经过三轮亲和筛选,有效地富集了噬菌体阳性克隆。结果显示,所建肽库的容量约为1.8×104,滴度约为1.3×1012pfu/mL。随机挑取10个阳性克隆进行ELISA检测,结果显示除1号孔外均为阳性。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 p97基因 随机肽库 亲和筛选
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猪肺炎支原体黏附因子P97R1区单抗制备 被引量:1
11
作者 冯志新 刘茂军 +3 位作者 王海燕 甘源 吴叙苏 邵国青 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第6期1438-1441,共4页
猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae,Mhp)与呼吸道黏膜纤毛的特异性吸附是引起猪支原体肺炎(Mycoplasmapneumoniaeofswilqe,MPS)的先决条件.Minmn等研究表明,97蛋白R1区直接参与支原体与呼吸道纤毛的黏附,同时P97的主要抗原... 猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae,Mhp)与呼吸道黏膜纤毛的特异性吸附是引起猪支原体肺炎(Mycoplasmapneumoniaeofswilqe,MPS)的先决条件.Minmn等研究表明,97蛋白R1区直接参与支原体与呼吸道纤毛的黏附,同时P97的主要抗原决定簇也位于该区域。P97R1区在猪8市炎支原体的检测诊断与致病机理研究方面具有重要意义。本研究以纯化的猪肺炎支原体全菌蛋白作为免疫原,以大肠杆菌表达的P97R1融合蛋白作为筛选抗原制备锗肺炎支原体P97R1区的特异性单抗,为Mhp的诊断检测及致病机制研究提供基础。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 p97R1区 单克隆抗体
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Secretory Expression of Mycoplasma hyopneu-moniae P97R1 Gene in Pichia pastoris and Primary Application of the Expression Product 被引量:1
12
作者 刘茂军 祝永琴 +2 位作者 冯志新 吴叙苏 邵国青 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2013年第5期710-715,共6页
[Objective] This study aimed to investigate the secretory expression of P97R1 gene of Mycoplasma hyopneumoniae(Mhp) in Pichia pastoris expression system and the primary application; of the expression product. [Metho... [Objective] This study aimed to investigate the secretory expression of P97R1 gene of Mycoplasma hyopneumoniae(Mhp) in Pichia pastoris expression system and the primary application; of the expression product. [Method] A pair of specific primers was designed to conduct PCR according to the Mhp P97R1 gene sequence in Genbank, and the amplified P97R1 gene was cloned into the pPICZa-A yeast expression vector to construct the secretory recombinant expression vector pPICZa-A-P97R1. The plasmid pPICZa-A-p97R1 linearized by Sac I was transformed into P. pastoris GSl15 by electroporation. Positive transformant identified by PCR was incubated to express P97R1 protein after methanol induction. And the expression product was identified using SDS-PAGE and Western-blotting anal.wsis. [Result] P97R1 protein was successfully expressed in the P. pastoris system, with a secre- tory amount of 499μg/ml, and revealed good reactogenicity. Meanwhile, an indirect ELISA method was established with P97R1 protein after the optimization of each reaction factor, which showed good specificity and repeatability according to repeated tests. [Conclusion] This study provides bases for developing the ELISA Kit for anti- body detection and genetically engineered vaccine to Mhp. 展开更多
关键词 Mycoplasma hyopneumoniae p97R1 pichia pastoris Indirect ELISA method
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猪肺炎支原体P97基因随机肽库的构建 被引量:1
13
作者 贾球锋 李丽芳 +1 位作者 张映 聂向庭 《激光生物学报》 CAS CSCD 2008年第5期608-612,共5页
目的:构建能用于抗原表位筛选的猪肺炎支原体(Mhp)P97基因C-端序列噬菌体随机肽库。方法:以MhpZ株(强毒)基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得MhpP97基因的C-端部分序列,扩增产物用DNaseⅠ消化并回收50bp^100bp的随机片段,将回收的随机片段... 目的:构建能用于抗原表位筛选的猪肺炎支原体(Mhp)P97基因C-端序列噬菌体随机肽库。方法:以MhpZ株(强毒)基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得MhpP97基因的C-端部分序列,扩增产物用DNaseⅠ消化并回收50bp^100bp的随机片段,将回收的随机片段插入pC89pⅧ型噬菌粒载体中,转化大肠杆菌XL1-Blue,辅助噬菌体VCSM13超感染,使P97基因随机片段以融合蛋白的形式展示于噬菌体表面,从而成功构建了P97基因特异性噬菌体随机肽库。用PCR及DNA测序法鉴定所建文库的随机性和多样性,测定肽库的滴度并计算库容量。结果:所建肽库的容量约为1.8×104,滴度约为1.3×1012TU/mL,PCR检测及DNA测序结果显示插入片段具有随机性和多样性。结论:所建随机肽库具有较好的随机性和多样性,能够满足后续的抗原表位筛选,为进一步的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 p97基因 随机肽库 随机片段
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猪肺炎支原体粘附因子P97研究进展 被引量:2
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作者 贾广乐 张映 邵国青 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第2期110-111,共2页
关键词 猪肺炎支原体 粘附因子p97 粘附机理
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猪肺炎支原体黏附因子P97蛋白研究进展 被引量:2
15
作者 涂尾龙 吴华莉 +7 位作者 黄济 张莺莺 王洪洋 曹建国 卫金良 甘叶青 唐赛勇 谈永松 《浙江农业科学》 2022年第7期1545-1547,1552,共4页
猪肺炎支原体(Mhp)是引起养猪企业损失的重大猪呼吸道疾病,而黏附因子P97蛋白是Mhp发病的主要致病因素。为了解P97蛋白对猪支原体肺炎致病机理,本综述分析了国内外关于猪肺炎支原体P97蛋白的研究论文,从黏附因子P97的分子结构、免疫原性... 猪肺炎支原体(Mhp)是引起养猪企业损失的重大猪呼吸道疾病,而黏附因子P97蛋白是Mhp发病的主要致病因素。为了解P97蛋白对猪支原体肺炎致病机理,本综述分析了国内外关于猪肺炎支原体P97蛋白的研究论文,从黏附因子P97的分子结构、免疫原性,以及P97蛋白基因工程疫苗研发等多方面进行归纳,阐述了P97的研究现状。P97蛋白能够刺激机体产生特异性抗体,具有非常好的免疫原型,是构建重组蛋白疫苗的重要候选蛋白,能够为建立猪肺炎支原体实验室诊断和生物工程疫苗研制提供参考。 展开更多
关键词 猪气喘病 猪肺炎支原体 黏附因子 p97蛋白 基因工程疫苗
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家蚕二分浓核病毒DNA聚合酶基因启动子P97的研究
16
作者 马瑛 吕鹏 +4 位作者 张苗苗 胡朝阳 李国辉 陈克平 姚勤 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期716-722,共7页
家蚕浓核病毒2型(BmDNV-2)已被正式命名为家蚕二分浓核病毒(BmBDV),该病毒致使家蚕罹患浓核病。BmBDV是目前已知唯一能够编码DNA聚合酶的ssDNA病毒,DNA聚合酶的表达对该病毒复制至关重要。使用双荧光素酶报告系统检测BmBDV DNA聚合酶基... 家蚕浓核病毒2型(BmDNV-2)已被正式命名为家蚕二分浓核病毒(BmBDV),该病毒致使家蚕罹患浓核病。BmBDV是目前已知唯一能够编码DNA聚合酶的ssDNA病毒,DNA聚合酶的表达对该病毒复制至关重要。使用双荧光素酶报告系统检测BmBDV DNA聚合酶基因启动子P97的活性以及病毒潜在的调控蛋白或宿主的互作蛋白对P97的调控作用。BmBDVDNA聚合酶翻译起始位点上游286 nt序列具有启动子活性,但其活性比病毒非结构蛋白NS1基因启动子P5的活性弱。共转染瞬时表达病毒的NS1蛋白使P97启动子活性降低,而病毒的结构蛋白VP则可提高P97启动子活性;宿主家蚕的转录因子Twist蛋白的表达能够提高P97启动子的活性,但其调控作用较小。 展开更多
关键词 家蚕二分浓核病毒 DNA聚合酶 启动子p97 活性 调控因子
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纪念“实用药动学计算程序3P87/3P97”诞生30年
17
作者 刘昌孝 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2018年第2期121-125,共5页
1前言 随着科学技术的进步,回过头来看看某一事件的发生和发展过程,会觉得处于现在是轻而易举的事情,因为计算机已经普及,好多数据只要输入原始数据就能在几分钟内看到结果,认为重要的是结果,如何得到的结果并不想知道,也不重要。我曾... 1前言 随着科学技术的进步,回过头来看看某一事件的发生和发展过程,会觉得处于现在是轻而易举的事情,因为计算机已经普及,好多数据只要输入原始数据就能在几分钟内看到结果,认为重要的是结果,如何得到的结果并不想知道,也不重要。我曾不只一次说过,如果没有计算机,没有计算工具和软件,能够用笔将药代参数正确算出,算你有本事,算你数学功底好! 展开更多
关键词 3p87/3p97 计算程序 药动学 原始数据 科学技术 计算机
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猪肺炎支原体黏附因子P97基因抗原区的克隆与表达
18
作者 李颖平 邵国青 张映 《猪业科学》 2006年第3期64-65,共2页
根据Genbank中猪肺炎支原体J株模式株(ATCC25934或NCTC10110),设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体168株特异性蛋白P97基因序列的R1R2区序列,经测序确认后,克隆入原核表达载体pET-32a(+)的EcoRI和XhoI位点之... 根据Genbank中猪肺炎支原体J株模式株(ATCC25934或NCTC10110),设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体168株特异性蛋白P97基因序列的R1R2区序列,经测序确认后,克隆入原核表达载体pET-32a(+)的EcoRI和XhoI位点之间,转化宿主菌BL21,将筛选出的阳性克隆用IPTG诱导,通过SDS_PAGE电泳进行鉴定,结果表明,p97蛋白基因获得了表达,这为猪肺炎支原体免疫检测与诊断以及新型疫苗的研制提供了重要条件。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 p97基因 克隆 表达
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猪肺炎支原体p97 R1区基因和大肠杆菌LTB基因的重组和表达 被引量:7
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作者 卢会英 沈青春 宁宜宝 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第4期3-6,共4页
本研究从猪肺炎支原体的主要抗原蛋白及其免疫特点出发,将猪肺炎支原体纤毛粘附决定区R1区基因和具有黏膜免疫佐剂作用的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(the B subunit of heat-labile enterotoxin LTB)基因重组表达,并且单独表达了R1区... 本研究从猪肺炎支原体的主要抗原蛋白及其免疫特点出发,将猪肺炎支原体纤毛粘附决定区R1区基因和具有黏膜免疫佐剂作用的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(the B subunit of heat-labile enterotoxin LTB)基因重组表达,并且单独表达了R1区基因。将扩增的目的片段插入到表达载体pET-28a(+)中,分别构建了两个原核表达质粒pET28a(+)-rLTBR1和pET28a(+)-rR1,诱导表达了两个融合蛋白rLTBR1和rR1。对表达的目的蛋白进行了SDS-PAGE和Western blot检测,结果表明,表达的蛋白为特异的蛋白。本试验为进一步的研究rLTBR1融合蛋白在黏膜免疫方面的作用打下了基础。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 p97蛋白 R1 LTB
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广西陆川猪猪肺炎支原体P97基因R1区克隆及序列分析 被引量:5
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作者 黎珂钰 赵武 +6 位作者 李斌 秦毅斌 卢冰霞 梁家幸 何颖 周英宁 韦英益 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第9期2270-2277,共8页
本试验通过深入了解广西陆川猪猪肺炎支原体(Mhp)地方流行毒株的黏附因子P97基因R1区的序列特征、基本结构及遗传变异等特点,为广西地方品种陆川猪猪支原体肺炎(MPS)有效的综合防控措施提供理论依据,并为进一步研究广西陆川猪Mhp地... 本试验通过深入了解广西陆川猪猪肺炎支原体(Mhp)地方流行毒株的黏附因子P97基因R1区的序列特征、基本结构及遗传变异等特点,为广西地方品种陆川猪猪支原体肺炎(MPS)有效的综合防控措施提供理论依据,并为进一步研究广西陆川猪Mhp地方流行毒株特性打下坚实的基础。参考Mhp基因组序列设计扩增P97基因R1区的1对引物,以2011年—2014年广西陆川猪MPS阳性病料为研究对象,提取基因组DNA,PCR扩增P97基因R1区,对PCR产物进行测序,将广西陆川猪Mhp不同地方流行毒株的P97基因R1区序列的碱基组成和推导的氨基酸序列进行比对。DNAStar软件分析结果表明,所获得的15株广西陆川猪Mhp毒株(GXLC-1、GXLC-2、GXLC-3、GXLC-4、GXLC-5、GXLC-6、GXLC-7、GXLC-8、GXLC-9、GXLC-10、GXLC-11、GXLC-12、GXLC-13、GXLC-14、GXLC-15)和3株广西其他品种猪Mhp毒株(GX227、GX595、GX674)的P97基因R1区的多处碱基发生变异。通过推导氨基酸序列统计P97R1区五氨基酸(AAKPV/E)重复数为9~18,平均值为12,TN重复数为1~4,结果发现广西陆川猪Mhp流行毒株变异使其毒力和黏附能力增强,再加上陆川猪呼吸道短小狭窄的特殊结构,更易导致广西陆川猪MPS的发生。 展开更多
关键词 广西陆川猪 猪肺炎支原体 p97基因R1区 克隆 序列分析
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