猪圆环病毒2型ORF2基因的定点突变及其真核表达载体的构建

根据GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计并合成引物,采用重叠延伸PCR(splice overlap extension PCR,SOE-PCR)定点诱变技术对ORF2基因进行定点突变。DNA测序结果表明,ORF2基因片段的372—378 bp处的碱基由TCTAGAT突变为ATTGGAT,从而破坏酶切位点XbaⅠ,成功获得ORF2的突变基因片段。进而将其连接到腺病毒真核表达载体pAD5-Blue中,成功构建真核表达载体,并获得PCV2的Cap蛋白表达产物,为PCV2新型疫苗研究奠定了重要基础。