Akt及磷酸化Akt308和473在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的:探讨Akt及磷酸化的Akt在人结直肠癌的发生和演进中的作用。方法:应用组织芯片结合免疫组化染色方法检测323例结直肠癌和107例对应的非癌粘膜组织中Akt、苏氨酸308位点磷酸化的Akt(pAkt308)和丝氨酸473位点磷酸化Akt(pAkt473)的表达和结直肠癌临床病理参数的关系,并分析三者以及VEGF和Ki67表达的相关性。结果:结直肠癌中Akt、pAkt308和pAkt473的阳性率分别为63.2%、64.7%、72.4%,在非癌粘膜组织中分别为37.4%、13.1%、16.8%。结直肠癌中三者的表达显著高于癌旁正常粘膜的表达(P<0.001)。肿瘤中Akt和pAkt473表达与肿瘤高分化具有统计学相关性(P=0.027,P=0.039),但与患者年龄、性别、肿瘤大小、淋巴管或静脉转移、淋巴结转移及Duke's分期无关(P>0.05)。pAkt308表达与淋巴结转移相关(P=0.017),但与其他临床病理参数无关(P>0.05)。而且,Akt表达与Akt308,pAkt473,VEGF和Ki67表达均有统计学相关性(P<0.01)。结论:在结直肠癌发生过程中,Akt、pAkt308和pAkt473表达明显上调。pAkt308是预示肿瘤演进和预后的良好指标,pAkt308和pAkt473可能是有效的结直肠癌的分子治疗新靶点。

补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠血小板PDK1/Akt Thr308通路的影响

目的:研究补阳还五汤预处理对急性脑缺血再灌注损伤大鼠血小板蛋白PDK1、Akt Thr308的影响,初步探讨补阳还五汤抗血小板活化作用与PDK1/Akt Thr308信号通路的关系。方法:用不同剂量补阳还五汤(29.69、14.84、7.42 g/kg)及硫酸氢氯吡格雷(7.81×10^(-3)mg/kg)分别ig预处理大鼠,模型组、假手术组及空白组给予蒸馏水ig,1天/次,连续14天。14天后采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)再灌注损伤模型,缺血2h再灌注6h后进行神经功能缺损评分及脑组织TTC染色,流式细胞术(FCM)检测全血中血小板CD62P含量,Western blot检测富血小板血浆(PRP)中PDK1、Akt Thr308蛋白磷酸化水平。结果:与假手术组比较,模型组血小板CD62P显著增高;与模型组比较,补阳还五汤组(29.69、14.84、7.42 g/kg)及硫酸氢氯吡格雷组(7.81×10^(-3)mg/kg)均明显降低血小板CD62P的表达;与假手术组比较,模型组PDK1、Akt Thr308蛋白磷酸化水平显著升高,而补阳还五汤组(29.69、14.84、7.42 g/kg)及硫酸氢氯吡格雷组(7.81×10^(-3)mg/kg)PDK1、Akt Thr308蛋白磷酸化水平明显低于模型组。结论:补阳还五汤预处理可降低急性脑缺血再灌注损伤大鼠血小板CD62P含量,并降低PDK1、Akt Thr308蛋白磷酸化水平,提示补阳还五汤可能通过抑制PDK1/Akt Thr308信号通路发挥抗血小板活化作用。

齐墩果酸对HL-60细胞AKT磷酸化的影响

目的研究齐墩果酸(Oleanolic Acid,OA)对人类急性粒细胞性白血病肿瘤细胞HL-60增殖、凋亡的影响及其发挥作用的机制,并分析OA能否抑制PI3K/AKT通路中AKT蛋白的磷酸化。方法以人HL-60细胞作为研究对象,设立对照组与实验组,对照组不加OA,而实验组加入浓度80μmol/L的OA后,利用CCK-8法检测两组细胞增殖情况、流式细胞仪检测细胞凋亡、Western Blot法检测P110α、AKT、p-AKT(Ser473)、p-AKT(Thr308)、mTOR蛋白的表达。结果OA能够抑制HL-60细胞增殖,促进HL-60细胞凋亡,并能下调P110a、p-AKT(Ser473)、p-AKT(Thr308)的表达。结论OA能够抑制HL-60细胞增殖并促进细胞凋亡,并可能通过抑制PI3K/AKT通路中的AKT Ser473及Thr308位点的磷酸化来发挥此作用。

电针对糖尿病小鼠骨骼肌磷酸化蛋白激酶B、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3蛋白表达的影响

目的:探讨电针对糖尿病小鼠骨骼肌天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)、磷酸化蛋白激酶B(pAkt)的影响,为针灸在临床上治疗糖尿病骨骼肌病变提供实验依据。方法:将18只C 57小鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组6只。注射链脲佐菌素建立糖尿病模型。电针组电针"足三里""阳陵泉"穴,连续波,频率20～30Hz,强度1mA,每次20min,每日1次,连续14d。取比目鱼肌、跖肌、腓肠肌、趾长伸肌和胫骨前肌分别进行肌肉湿重比较,采用Western blot方法检测pAkt(ser 473)、pAkt(Thr 308)、总Akt、caspase-3的蛋白表达。结果:与对照组相比,造模后5条肌肉湿重明显减轻(P<0.01),而电针组与模型组相比可增加肌肉湿重(P<0.05,P<0.01)。总Akt 3组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。pAkt(Thr 308)的表达模型组较对照组明显下调(P<0.01),pAkt(ser 473)模型组与对照组相比差异不明显(P>0.05),而电针治疗较模型组表达上调(P<0.01)。与对照组相比,模型组caspase-3明显增高(P<0.01),而电针组与模型组相比能明显下调caspase-3的表达(P<0.01)。结论:电针能够对糖尿病小鼠骨骼肌病变发挥治疗作用,其机制部分是通过促进pAkt(ser 473)/pAkt(Thr 308)、抑制caspase-3的表达实现的。