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题名表皮葡萄球菌基因删除突变株构建方法的研究
被引量:2
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作者
娄强
朱涛
王家学
吴旸
朱于莉
瞿涤
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机构
复旦大学病原生物学研究所
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出处
《微生物与感染》
2008年第1期11-16,共6页
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基金
科技部国际科技合作项目20060FA32760
"973"2002CB512803
上海市科委055407069
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文摘
目的 探讨高效的表皮葡萄球菌基因删除突变株构建方法。方法 分别应用2种不同的穿梭质粒pMAD和pBT2,连接目的基因表皮葡萄球菌双组分信号转导系统arlS、saeRS和lytS的上下游片段,构建重组质粒,电转入金黄色葡萄球菌RN4220后转入表皮葡萄球菌1457,利用抗性和生物标志筛选出针对特定目的基因的突变株SE1457-ΔarlS、SE1457-ΔsaeRS和SE1457-ΔlytS,比较2种方法的优、缺点。结果 利用pMAD和pBT2分别构建基因删除同源重组质粒pMAD-ΔsaeRS、pBT2-ΔarlS和pBT2-ΔlytS,并均获得相应的表皮葡萄球菌基因删除突变株。在筛选过程中,以pMAD为载体构建基因删除突变株,仅需1轮抗性/蓝白斑筛选过程即获突变株;而以pBT2为载体构建基因删除突变株筛选方法,需经过5~10轮的筛选才可获得突变株。基因删除突变株经聚合酶链反应(PCR)和测序等鉴定确认。与野生株相比,SE1457-ΔarlS突变株的生物膜形成能力降低90.96%,而SE1457-ΔsaeRS和SE1457-ΔlytS株的生物膜形成能力略有增加。结论 以pMAD载体构建表皮葡萄球菌突变株比较快速和简便。
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关键词
基因删除
pMAD
pbt2
表皮葡萄球菌
双组分信号转导系统
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Keywords
Gene knock-out
pMAD
pbt2
Staphylococcus epidermidis
Two component signal transduction system
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分类号
R378
[医药卫生—病原生物学]
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