酪氨酸羟化酶基因载体－pCMVTH 质粒的构建及在大鼠骨骼肌内的表达

为用转基因方法治疗巴金森氏病大鼠模型，本研究采用分子克隆技术，将合成多巴胺的关键酶－酪氨酸羟化酶（ＴＨ）的基因，克隆进入以巨细胞病毒ＣＭＶ为启动子的载体质粒内，经限制性内切酶定位分析证实该重组的ＤＮＡ质粒的可靠性。携带ＴＨ基因的ＰＣＭＶＴＨ质粒以ＬＩＰＯ－ＦＥＣＴＩＮ介导，在培养的原代骨骼肌细胞中高效表达。本研究为进一步用转基因的细胞植入脑内以治疗巴金森氏病打下一定基础。

基因治疗巴金森氏病大鼠模型的实验研究

巴金森氏病以黑质多巴胺能神经元变性减少为特征，以６－羟多巴胺单侧损毁大鼠脑内多巴胺能系统可建立巴金森氏病的动物模型，当给予阿普吗啡后通过检测这些大鼠的旋转圈数和纹状体多巴胺及其主要代谢产物的水平则可反映多巴胺的减少或恢复程度。为达到基因治疗巴金森氏病大鼠模型的目的，本研究将带有酪氨酸羟化酶基因的重组载体－质粒ｐＣＭＶＴＨ（６．０４ｋｂ）在体外通过脂质体转染技术转入原代培养的骨骼肌细胞内；再将这些经遗传改造、能表达酪氨酸羟化酶的骨骼肌细胞植入模型大鼠脑的纹状体内。结果显示，这些表达酪氨酸羟化酶的肌细胞可在大鼠模型脑内长期存活，这些模型大鼠的异常运动显现实质性改善，它们的纹状体多巴胺水平明显升高。