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重组人TGF-β1融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定
被引量:
4
1
作者
姜昌丽
张英起
颜真
《第四军医大学学报》
北大核心
2006年第3期193-195,共3页
目的构建人转化生长因子-β1(TGF-β1)基因的原核表达载体,表达并纯化GST-hTGFβ1.方法应用RT-PCR获得人TGF-β1的基因片段,成功构建人TGF-β1原核表达载体,诱导表达人TGF-β1与GST的融合蛋白;应用亲和层析法纯化重组融合蛋白,对纯化产...
目的构建人转化生长因子-β1(TGF-β1)基因的原核表达载体,表达并纯化GST-hTGFβ1.方法应用RT-PCR获得人TGF-β1的基因片段,成功构建人TGF-β1原核表达载体,诱导表达人TGF-β1与GST的融合蛋白;应用亲和层析法纯化重组融合蛋白,对纯化产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western Blot检测分析.结果成功构建了人TGF-β1重组融合表达质粒pGEX-4T-1-TGF-β1,表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在Mr约为39×103处出现了一条新生的蛋白条带,该表达蛋白具有与TGF-β1抗体特异性的结合能力.结论成功构建了人TGF-β1基因的原核表达载体并纯化了该基因的原核表达产物,为下一步的人TGF-β1自体疫苗的研制奠定了基础.
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关键词
转化生长因子-Β
1
重组融合蛋白/分离与纯化
pgex4t-1
载体
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职称材料
重组蛋白Cox7a2原核表达及鉴定
2
作者
陈亮
辛钟成
+5 位作者
姜学军
田龙
袁亦铭
刘刚
宋卫东
郭应禄
《中华男科学杂志》
CAS
CSCD
2006年第9期794-797,共4页
目的:从原代培养的小鼠睾丸Leyd ig细胞中克隆Cox7a2基因,构建pGEX4T-1-Cox7 a2载体,表达和鉴定重组蛋白。方法:应用RT-PCR方法从原代培养的小鼠睾丸Leyd ig细胞中克隆Cox7 a2,利用BamH I和EcoR I酶切位点把Cox7a2克隆到pGEX4T-1载体,...
目的:从原代培养的小鼠睾丸Leyd ig细胞中克隆Cox7a2基因,构建pGEX4T-1-Cox7 a2载体,表达和鉴定重组蛋白。方法:应用RT-PCR方法从原代培养的小鼠睾丸Leyd ig细胞中克隆Cox7 a2,利用BamH I和EcoR I酶切位点把Cox7a2克隆到pGEX4T-1载体,酶切和测序鉴定后,诱导重组蛋白的表达,进行纯化后,利用蛋白免疫印迹进行鉴定。结果:从原代培养的小鼠睾丸Leyd ig细胞克隆到Cox7a2完整的编码序列,构建了pGEX4T-1-Cox7 a2载体,表达了预期相对分子质量的融合蛋白,并经免疫印迹检测鉴定。结论:成功克隆Cox7a2,表达纯化了其融合蛋白,为基因的功能研究奠定了前期基础。
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关键词
COX7A2
线粒体
pgex4t-1
重组
睾丸
小鼠
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职称材料
牛金属硫蛋白素bMTcin编码区的克隆及其在大肠杆菌中的表达研究
3
作者
袁静
唐兴芳
+1 位作者
刘变芳
李元瑞
《西北农业学报》
CAS
CSCD
2002年第4期28-31,87,共5页
以本实验室由RT—PCR扩增得到的含有牛金属硫蛋白(bMT)cDNA的重组质粒pYJ101为模板,PCR扩增出牛金属硫蛋白素bMTcin的编码区,将其克隆到pGEM—T载体上并进行DNA序列测定。利用融合表达载体pGEX4T—1,在E.coli中诱导表达bMTcin,经过Gluta...
以本实验室由RT—PCR扩增得到的含有牛金属硫蛋白(bMT)cDNA的重组质粒pYJ101为模板,PCR扩增出牛金属硫蛋白素bMTcin的编码区,将其克隆到pGEM—T载体上并进行DNA序列测定。利用融合表达载体pGEX4T—1,在E.coli中诱导表达bMTcin,经过Glutathine Sepharose 4B亲和层析纯化后,SDS—PAGE检测GST:bMTcin的条带。结果表明,所克隆的bMTcin序列全长为141bp,其DNA序列与原模板中的序列完全相同,与GenBank中另外5个bMTcin DNA相比,第31位和86位与Conneely的序列为A和G,导致第11位(Thr)和29位(Arg)的氨基酸不同于其他4个序列(11位为Ala,29位为Lys)。融合表达产物亲和层析纯化后,用SDS-PAGE检测可见融合蛋白GST:bMTcin的条带,紫外分光光度计测定,融合蛋白GST:bMTcin的表达量大约为1.1mg/L发酵液。
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关键词
牛金属硫蛋白素bMTcin
编码区
克隆
大肠杆菌
表达
pGEM-T载体
DNA序列分析
pgex4t-1
下载PDF
职称材料
题名
重组人TGF-β1融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定
被引量:
4
1
作者
姜昌丽
张英起
颜真
机构
第四军医大学药学系生物技术中心
出处
《第四军医大学学报》
北大核心
2006年第3期193-195,共3页
基金
教育部"长江学者和创新团队发展计划"(IRT0459)
文摘
目的构建人转化生长因子-β1(TGF-β1)基因的原核表达载体,表达并纯化GST-hTGFβ1.方法应用RT-PCR获得人TGF-β1的基因片段,成功构建人TGF-β1原核表达载体,诱导表达人TGF-β1与GST的融合蛋白;应用亲和层析法纯化重组融合蛋白,对纯化产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western Blot检测分析.结果成功构建了人TGF-β1重组融合表达质粒pGEX-4T-1-TGF-β1,表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在Mr约为39×103处出现了一条新生的蛋白条带,该表达蛋白具有与TGF-β1抗体特异性的结合能力.结论成功构建了人TGF-β1基因的原核表达载体并纯化了该基因的原核表达产物,为下一步的人TGF-β1自体疫苗的研制奠定了基础.
关键词
转化生长因子-Β
1
重组融合蛋白/分离与纯化
pgex4t-1
载体
Keywords
transforming growth factor-β
1
recombinant fusionproteins / isolation & purification
pgex
-d
t-
1vector
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
重组蛋白Cox7a2原核表达及鉴定
2
作者
陈亮
辛钟成
姜学军
田龙
袁亦铭
刘刚
宋卫东
郭应禄
机构
北京大学第一医院男科中心
中国科学院微生物研究所
出处
《中华男科学杂志》
CAS
CSCD
2006年第9期794-797,共4页
基金
北京大学医学部"十五""211"工程建设项目(219)
文摘
目的:从原代培养的小鼠睾丸Leyd ig细胞中克隆Cox7a2基因,构建pGEX4T-1-Cox7 a2载体,表达和鉴定重组蛋白。方法:应用RT-PCR方法从原代培养的小鼠睾丸Leyd ig细胞中克隆Cox7 a2,利用BamH I和EcoR I酶切位点把Cox7a2克隆到pGEX4T-1载体,酶切和测序鉴定后,诱导重组蛋白的表达,进行纯化后,利用蛋白免疫印迹进行鉴定。结果:从原代培养的小鼠睾丸Leyd ig细胞克隆到Cox7a2完整的编码序列,构建了pGEX4T-1-Cox7 a2载体,表达了预期相对分子质量的融合蛋白,并经免疫印迹检测鉴定。结论:成功克隆Cox7a2,表达纯化了其融合蛋白,为基因的功能研究奠定了前期基础。
关键词
COX7A2
线粒体
pgex4t-1
重组
睾丸
小鼠
Keywords
Cox7a2
mitochondria
pgex4t-1
recombinant
testis
mouse
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
牛金属硫蛋白素bMTcin编码区的克隆及其在大肠杆菌中的表达研究
3
作者
袁静
唐兴芳
刘变芳
李元瑞
机构
西北农林科技大学食品科学与工程学院
出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
2002年第4期28-31,87,共5页
文摘
以本实验室由RT—PCR扩增得到的含有牛金属硫蛋白(bMT)cDNA的重组质粒pYJ101为模板,PCR扩增出牛金属硫蛋白素bMTcin的编码区,将其克隆到pGEM—T载体上并进行DNA序列测定。利用融合表达载体pGEX4T—1,在E.coli中诱导表达bMTcin,经过Glutathine Sepharose 4B亲和层析纯化后,SDS—PAGE检测GST:bMTcin的条带。结果表明,所克隆的bMTcin序列全长为141bp,其DNA序列与原模板中的序列完全相同,与GenBank中另外5个bMTcin DNA相比,第31位和86位与Conneely的序列为A和G,导致第11位(Thr)和29位(Arg)的氨基酸不同于其他4个序列(11位为Ala,29位为Lys)。融合表达产物亲和层析纯化后,用SDS-PAGE检测可见融合蛋白GST:bMTcin的条带,紫外分光光度计测定,融合蛋白GST:bMTcin的表达量大约为1.1mg/L发酵液。
关键词
牛金属硫蛋白素bMTcin
编码区
克隆
大肠杆菌
表达
pGEM-T载体
DNA序列分析
pgex4t-1
Keywords
Bovine Metallothioneincin
PCR
pGEM-T vector
Gene cloning
DNA sequence analysis
pgex4t-1
E.coli
Affinity chromatograghy
SDS-PAGE
GST : bMTcin
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人TGF-β1融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定
姜昌丽
张英起
颜真
《第四军医大学学报》
北大核心
2006
4
下载PDF
职称材料
2
重组蛋白Cox7a2原核表达及鉴定
陈亮
辛钟成
姜学军
田龙
袁亦铭
刘刚
宋卫东
郭应禄
《中华男科学杂志》
CAS
CSCD
2006
0
下载PDF
职称材料
3
牛金属硫蛋白素bMTcin编码区的克隆及其在大肠杆菌中的表达研究
袁静
唐兴芳
刘变芳
李元瑞
《西北农业学报》
CAS
CSCD
2002
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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