miR-21-3p靶向STAT3促进银屑病角质形成细胞增殖的研究

目的探讨miR-21-3p及其靶蛋白信号转导子和转录激活子3蛋白(STAT3)在寻常型银屑病发生过程中角质形成细胞的作用意义。方法对皮肤组织中STAT3蛋白表达情况的检测选择免疫组织化学法,对健康人群皮肤组织及银屑病患者皮损组织miR-21-3p表达量的检测选择实时荧光定量PCR法,靶基因STAT3和miR-21-3p关系的检测选择双荧光素酶报告基因。化学合成miR-21-3p模拟物、抑制剂,瞬时转染HaCaT细胞,对不同分组细胞进行CCK8、流式细胞凋亡实验,探究分析miR-21-3p调控细胞表型主要作用。对于转染细胞中STAT3蛋白表达情况,选择Western Blot检测。结果寻常型银屑病患者皮肤组织中miR-21-3p呈高表达(P<0.05)。STAT3免疫组化阳性表达定位于细胞浆,在银屑病组患者皮损组织阳性表达率为82.22%(37/45)高于正常皮肤组织(P<0.01)。双荧光素酶报告基因显示miR-21-3p与STAT3存在结合,呈靶向关系。miR-21-3p mimics促进HaCaT细胞增殖活性,抑制细胞凋亡;miR-21-3p inhibitor抑制HaCaT细胞的增殖能力,促使细胞趋向凋亡。miR-21-3p转染HaCaT过表达可对STAT3蛋白表达量产生促进,相反则降低(F=48.632,P<0.01)。结论miR-21-3p呈现正调控关系,能够靶向调控STAT3;两者共同作用参与并加重银屑病的病程,并抑制患者细胞凋亡,调节角质形成细胞增殖活性。

miR-21-3p通过下调CCT4抑制食管鳞癌细胞的迁移及侵袭

目的:探讨miR-21-3p对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:通过数据库检索miR-21-3p的下游靶基因,GEPIA2数据库预测CCT4在食管鳞癌中的表达和对食管鳞癌患者预后的影响,培养食管鳞癌细胞TE-1、KYSE150,将miR-21-3p inhibitor、SiCCT4、Plenti-CMV-CCT4-GFP/Puro转染至TE-1和KYSE150细胞中,分为miR-21-3p inhibitor组和inhibitor NC组、SiCCT4组和SiNC组、Plenti-CMV-CCT4组和inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组,采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-21-3p和CCT4 mRNA的表达水平,Transwell迁移侵袭实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力,Western blot检测转染后各组细胞CCT4蛋白的表达水平。结果:数据库预测结果显示CCT4在食管鳞癌中过表达,与食管鳞癌患者总体生存期相关,与miR-21-3p呈正相关。qRT-PCR显示miR-21-3p和CCT4在食管癌细胞相较于正常上皮细胞表达显著升高,且在抑制miR-21-3p后CCT4表达水平显著降低(P<0.05)。Transwell实验显示,inhibitor组迁移率及侵袭率显著低于inhibitor NC组(P<0.05);SiCCT4组迁移率及侵袭率显著低于SiNC组(P<0.05);inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组迁移率及侵袭率显著高于inhibitor组(P<0.05);Western blot检测CCT4蛋白发现,inhibitor组蛋白低于inhibitor NC组(P<0.05),inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组蛋白显著高于inhibitor组(P<0.05)。结论:miR-21-3p和CCT4在食管癌中呈现过表达,miR-21-3p通过下调CCT4表达抑制食管癌细胞迁移和侵袭能力。

外周血miR-21-5p、Foxp3及凝血功能预测人工周期-冻融胚胎移植结局的价值

目的:探讨外周血miR-21-5p、Foxp3及凝血功能预测人工周期-冻融胚胎移植结局的价值。方法:选取2021年1月—2023年12月于赣州市人民医院行人工周期-冻融胚胎移植的患者108例,其中妊娠成功48例,妊娠失败60例。观察比较妊娠成功和失败患者外周血miR-21-5p、Foxp3、D-二聚体(D-D)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)的差异,并分析外周血miR-21-5p、Foxp3及凝血功能指标预测人工周期-冻融胚胎移植结局的价值。结果:妊娠成功患者外周血miR-21-5p、Foxp3 mRNA、D-D均高于妊娠失败患者,APTT和PT均明显长于妊娠失败患者(P<0.05)。miR-21-5p、Foxp3 mRNA、D-D和PT是妊娠失败的影响因素(P<0.05)。miR-21-5p、Foxp3 mRNA、D-D和PT预测妊娠失败的受试者操作特征(ROC)曲线下面积分别为0.857、0.790、0.922和0.861。结论:人工周期-冻融胚胎移植成功和失败患者外周血miR-21-5p、Foxp3及D-D和PT有所差异,且在预测妊娠结局方面有一定应用价值。

乙肝病毒通过调控miR-21-5p/STAT3通路促进骨髓来源抑制细胞的增殖与活性

目的:探究乙肝病毒(HBV)对骨髓来源抑制细胞(MDSCs)的作用及其机制。方法:C57BL/6小鼠分为正常组和乙肝组,乙肝组建立慢性HBV感染模型,检测小鼠miR-21-5p水平;另将C57BL/6小鼠分为对照组、miR-21-5p阴性对照组、miR-21-5p过表达组和miR-21-5p沉默组,除对照组外其余小鼠注射miR-21-5p干预,除miR-21-5p阴性对照组外,所有小鼠建立慢性HBV感染小鼠模型,检测小鼠miR-21-5p水平及MDSCs数量;将miR-21-5p分别转染小鼠MDSCs,暴露于HBV病毒中,检测p-STAT3(Ser727)、Arginase-1、IL-10及p-STAT3蛋白水平;在培养基中加入Stattic(STAT3抑制剂),检测p-STAT3、Arginase-1以及IL-10蛋白水平。结果:乙肝组miR-21-5p表达水平高于正常组;miR-21-5p阴性对照组相较于对照组miR-21-5p表达水平及MDSCs数量升高,miR-21-5p过表达组相较于miR-21-5p沉默组miR-21-5p表达水平及MDSCs数量升高;小鼠MDSCs感染HBV后p-STAT3(Ser727)、Arginase-1、IL-10及p-STAT3蛋白表达升高,miR-21-5p过表达后p-STAT3(Ser727)、Arginase-1、IL-10及p-STAT3蛋白表达升高;加入Stattic后,p-STAT3、Arginase-1以及IL-10蛋白表达无差异。结论:HBV可能通过调控miR-21-5p/STAT3通路,从而促进MDSCs的增殖与活性。

血清miR-21-3p、IL-18水平检测对重症急性胰腺炎患者急性肾损伤预测评估的临床价值

目的探讨血清中微RNA(miR)-21-3p和白细胞介素(IL)-18水平对重症急性胰腺炎患者急性肾损伤(AKI)预测评估的临床价值。方法前瞻性选取2020年9月至2023年青岛市中医医院收治的146例急性重症胰腺炎患者,根据有无AKI分为AKI组(n=51)和非AKI组(n=95)。比较两组的临床资料[性别、年龄(≤50岁、>50岁)、病因类型(酒精性、胆源性、高血脂性、其他)、体重指数(≤28 kg/m 2、>28 kg/m 2)],比较两组血清中miR-21-3p(相对表达量、高表达比例、低表达比例)、IL-18水平(平均表达量、≤140 pg/mL比例、>140 pg/mL比例);采用Logistic回归模型分析影响重症急性胰腺炎患者住院期间AKI发生的因素;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析miR-21-3p、IL-18对重症急性胰腺炎患者并发AKI的预测价值。结果AKI组患者的性别、年龄、病因类型、体重指数与非AKI组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。AKI组的miR-21-3p相对表达量、IL-18水平、Ranson评分分别为2.24±0.52、(178.21±49.32)pg/mL、(6.14±1.24)分,均明显高于非AKI组[1.58±0.35、(82.35±38.43)pg/mL、(4.53±1.12)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,miR-21-3p和IL-18增高均是SAP患者发生AKI的危险因素(OR=1.490,95%CI:1.035~1.832;OR=1.421,95%CI:1.042~1.734;P<0.05)。miR-21-3p和IL-18联合检测对重症急性胰腺炎伴AKI的诊断具有更高的敏感性和特异性,AUC为0.873,敏感度为90.42%,特异度为91.24%。结论在重症急性胰腺炎合并AKI患者中,血清中miR-21-3p和IL-18水平显著升高。检测血清miR-21-3p和IL-18水平有助于预测重症急性胰腺炎合并AKI,尤其在联合检测时,有更高的准确性。

三阴性乳腺癌组织长链非编码RNA-P21、microRNA-17-3p的表达及其临床意义

目的探讨三阴性乳腺癌组织中长链非编码RNA-P21(LncRNA-P21)、microRNA-17-3p(miR-17-3p)的表达,分析其与三阴性乳腺癌患者的临床病理特征及预后的关系。方法选取2016年1月—2017年5月南通大学附属医院收治的106例三阴性乳腺癌患者经手术切除的癌组织和癌旁组织(距离癌组织至少5 cm)标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中LncRNA-P21和miR-17-3p的表达;收集患者的临床病理特征资料,分析LncRNA-P21、miR-17-3p表达与临床病理特征的关系;术后随访5年,采用Kaplan-Meier法绘制不同LncRNA-P21、miR-17-3p表达三阴性乳腺癌患者的生存曲线;Cox回归分析影响三阴性乳腺癌患者预后的因素。结果癌组织LncRNA-P21 mRNA相对表达量低于癌旁组织(P<0.05);癌组织miR-17-3p mRNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05)。临床Ⅲ期、腋窝淋巴结转移、Ki-67≥30%三阴性乳腺癌组织中LncRNA-P21 mRNA相对表达量低于临床Ⅰ、Ⅱ期,无腋窝淋巴结转移和Ki-67<30%(P<0.05);临床Ⅲ期、腋窝淋巴结转移、Ki-67≥30%三阴乳腺癌组织中miR-17-3p mRNA相对表达量高于临床Ⅰ、Ⅱ期,无腋窝淋巴结转移和Ki-67阴性表达(P<0.05)。不同年龄、肿瘤直径、分化程度、绝经状态的三阴性乳腺癌患者LncRNA-P21、miR-17-3p mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。三阴性乳腺癌组织中LncRNA-P21表达与miR-17-3p表达呈负相关(r=-0.570,P<0.05)。LncRNA-P21低表达组5年无病生存期(DFS)和总生存期(OS)生存率低于LncRNA-P21高表达组(P<0.05),miR-17-3p高表达组5年DFS、OS生存率低于miR-17-3p低表达组(P<0.05)。单因素Cox回归分析结果显示,分化程度、TNM分期、腋窝淋巴结转移、LncRNA-P21、miR-17-3p是三阴性乳腺癌患者预后的影响因素(P<0.05);多因素Cox风险比例回归分析结果显示,腋窝淋巴结转移、miR-17-3p是三阴性乳腺癌患者预后不良的危险因素(P<0.05),LncRNA-P21是保护因素(P<0.05)。结论三阴性乳腺癌组织LncRNA-P21表达下调,miR-17-3p表达上调,且与乳腺癌Ki-67≥30%、临床Ⅲ期、腋窝淋巴结转移及预后不良有关。

血清微小RNA-21-3p及白细胞介素-18水平对急性重症胰腺炎并发急性肾损伤的预测价值

目的:探讨血清微小RNA-21-3p(miR-21-3p)及白细胞介素18(IL-18)水平对急性重症胰腺炎并发急性肾损伤的预测价值。方法:纳入急性重症胰腺炎患者120例为研究对象,根据是否出现急性肾损伤分为急性肾损伤组(46例)和非急性肾损伤组(74例)。另选择同期体检健康者60例为健康组。三组均在入院时采集空腹状态下肘静脉血,采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定miR-21-3p表达量,采用酶联免疫吸附试验测定IL-18水平。比较三组miR-21-3p表达量、IL-18水平。比较不同临床资料患者miR-21-3p表达量和IL-18水平。采用多元Logistic回归分析急性重症胰腺炎并发急性肾损伤的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清miR-21-3p及IL-18对急性重症胰腺炎并发急性肾损伤的预测价值。结果:与健康组比较,急性肾损伤组、非急性肾损伤组血清miR-21-3p表达量和IL-18水平更高,且急性肾损伤组血清指标高于非急性肾损伤组(均P<0.05)。不同APACHEⅡ评分、CT分级、有无胸水患者的miR-21-3p表达量和IL-18水平比较差异有统计学意义(均P<0.05)。CT分级、胸水、血清miR-21-3p表达量和IL-18水平是急性重症胰腺炎并发急性肾损伤的影响因素(均P<0.05)。血清miR-21-3p、IL-18单独预测急性重症胰腺炎并发急性肾损伤有一定价值,但联合预测的价值更高(均P<0.05)。结论:急性重症胰腺炎患者血清miR-21-3p表达量及IL-18水平会明显上升,CT分级、胸水、血清miR-21-3p表达量和IL-18水平与急性重症胰腺炎并发急性肾损伤密切相关。血清miR-21-3p及IL-18联合检测对急性重症胰腺炎并发急性肾损伤具有较高的预测价值。

miR-21-5p对川崎病内皮细胞焦亡的作用及其机制研究

目的探究miR-21-5p对川崎病(KD)内皮细胞焦亡的作用及其机制。方法采用随机数字表法将16只C57BL/6小鼠分为KD组和PBS组,每组8只。利用干酪乳杆菌细胞壁提取物(LCWE)腹腔注射小鼠,构建KD模型。利用LCWE处理小鼠冠状动脉内皮细胞(MCAECs),构建KD体外细胞模型。在使用LCWE处理的基础上,根据转染miR-21-5p抑制剂(miR-21-5p inhibitor)或inhibitor阴性对照物(inhibitor-NC)、miR-21-5p模拟物(miR-21-5p mimics)或mimics阴性对照物(miR-NC)、用或不用含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)抑制剂MCC950,将MCAECs分组为:(1)LCWE组和对照组;(2)LCWE+inhibitor-NC组和LCWE+miR-21-5p inhibitor组;(3)LCWE组、LCWE+MCC950组、LCWE+MCC950+miR-NC组和LCWE+MCC950+miR-21-5p mimics组。采用HE染色观察小鼠冠状动脉组织病理学变化;采用qRT-PCR法检测miR-21-5p表达变化;采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)、caspase-1前体(pro-caspase-1)、消皮素D蛋白(GSDMD)p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达;采用细胞计数盒法检测细胞活力;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH活性。结果与PBS组相比,KD组小鼠冠状动脉组织病变明显,冠状动脉组织中NLRP3介导的细胞焦亡、miR-21-5p表达水平均升高(均P<0.01)。与对照组相比,LCWE组MCAECs细胞活力明显降低并且miR-21-5p表达水平明显升高(均P<0.01)。与LCWE+inhibitor-NC组相比,LCWE+miR-21-5p inhibitor组细胞miR-21-5p表达水平、NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达以及LDH活性均明显降低(均P<0.01),而细胞活力明显升高(P<0.05)。与LCWE组相比,LCWE+MCC950组NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达以及LDH活性均明显降低(均P<0.01),且细胞活力明显升高(P<0.01),而进一步转染miR-21-5p mimics明显逆转了以上变化(均P<0.01)。结论在KD中,miR-21-5p通过激活NLRP3炎症小体调节血管内皮细胞焦亡,从而加剧血管内皮细胞损伤。提示抑制miR-21-5p可以部分改善KD期间的血管内皮细胞损伤,miR-21-5p可以作为治疗KD的潜在干预靶点。

血清miR-21-3p检测联合淋巴结粗针穿刺活检对甲状腺癌颈淋巴结转移的诊断价值

目的:探讨血清miR-21-3p检测联合超声引导下淋巴结粗针穿刺活检(LCNB)对甲状腺癌颈淋巴结转移的诊断价值。方法:选取甲状腺癌伴颈淋巴结肿大(均行血清miR-21-3p检测及LCNB)病人80例,以手术病理为标准,比较血清miR-21-3p检测、超声引导下LCNB及两者联合检查对甲状腺癌伴颈淋巴结转移的诊断价值。结果:80例病人经手术病理检查,有淋巴结转移者49例,无转移者31例。血清miR-21-3p检测联合超声引导下LCNB诊断甲状腺癌伴颈淋巴结转移准确度为91.8%、灵敏度为87.6%,均高于两者独立检查准确度76.2%、84.7%和灵敏度82.3%、85.7%(P<0.05),联合检查受试者工作曲线下面积为0.9071,大于两者单独检测的0.7765、0.8292(P<0.05)。结论:相较于单独检测,血清miR-21-3p联合超声引导下LCNB诊断甲状腺癌淋巴结转移的准确度、灵敏度更好,诊断效能更高。

丙泊酚调控miR-21-3p对缺氧/复氧所诱导心肌细胞损伤的影响

目的探讨丙泊酚对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法以H/R诱导的大鼠心肌细胞H9C2建立心肌缺血再灌注损伤模型,不同剂量的丙泊酚处理H9C2细胞;采用CCK-8法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用qRT-PCR法检测miR-21-3p的表达量;ELISA法检测白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的水平;anti-miR-NC、anti-miR-21-3p分别转染至H9C2细胞后进行H/R处理,miR-NC、miR-21-3p mimics分别转染至H9C2细胞后用50μmol/L丙泊酚处理24 h,然后进行H/R处理,采用上述方法分别检测细胞增殖、凋亡及炎性细胞因子表达水平;Western blot测定B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达量。结果丙泊酚处理后,H/R诱导的H9C2细胞增殖抑制率、TNF-α、细胞凋亡率、IL-1β、Bax蛋白水平、IL-6、miR-21-3p表达量下降(P<0.05),Bcl-2蛋白水平上升(P<0.05),且呈剂量依赖性;转染anti-miR-21-3p可降低细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Bax蛋白水平、IL-6、TNF-α、IL-1β水平(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05);转染miR-21-3p mimics可减弱丙泊酚对H/R诱导的H9C2细胞增殖、凋亡及炎性因子表达水平的作用。结论丙泊酚可通过抑制miR-21-3p表达而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎性反应从而减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。

LncRNA SNHG3通过miR-330-5p/PAK1信号轴调节前列腺癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质转化

目的 探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(LncRNA SNHG)3通过miR-330-5p/P21活化激酶(PAK)1信号轴调节前列腺癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质转化。方法 体外培养人前列腺上皮细胞和人前列腺癌细胞株PC-3、DU 145、VCaP,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各细胞中LncRNA SNHG3、miR-330-5p与PAK1 mRNA表达。体外培养人前列腺癌细胞PC-3,随机分为对照组、LncRNA SNHG3 siRNA组、miR-330-5p inhibitor组、共转染阴性对照(LncRNA SNHG3 siRNA阴性对照+miR-330-5p inhibitor阴性对照)组、共转染(LncRNA SNHG3 siRNA+miR-330-5p inhibitor)组,分组转染LncRNA SNHG3 siRNA及其阴性对照、miR-330-5p inhibitor及其阴性对照后,以噻唑蓝(MTT)和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测PC-3细胞增殖情况;以流式细胞术检测PC-3细胞凋亡情况;以Transwell实验检测PC-3细胞侵袭情况;以qRT-PCR检测PC-3细胞miR-330-5p、PAK1与上皮间质转化因子E-钙黏附蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;以双荧光素酶报告基因实验检测PC-3细胞中LncRNA SNHG3对miR-330-5p的靶向调控作用。结果 与人前列腺上皮细胞比较,PC-3、DU 145、VCaP细胞中LncRNA SNHG3、PAK1 mRNA表达明显升高,miR-330-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组、共转染组分别相比,LncRNA SNHG3siRNA组细胞活力与相对增殖率、细胞Vimentin与PAK1 mRNA表达、侵袭细胞数均明显降低,细胞凋亡率、细胞miR-330-5p、E-cadherin mRNA表达均明显升高(均P<0.05);miR-330-5p inhibitor组细胞活力与相对增殖率、细胞Vimentin与PAK1 mRNA表达、侵袭细胞数均明显升高,细胞凋亡率、细胞miR-330-5p、E-cadherin mRNA表达均降低(P<0.05);共转染阴性对照组细胞各指标均无显著差异(P>0.05)。在PC-3细胞中,LncRNA SNHG3可靶向下调miR-330-5p表达。结论 下调LncRNA SNHG3可通过上调miR-330-5p表达而降低PAK1表达,进而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化,诱导其凋亡。

miR-195及miR-21-3p在老年重症急性胰腺炎中的表达及相关性

选取新疆医科大学第一附属医院2020年2月—2022年3月收治的老年重症急性胰腺炎患者102例作为研究对象,按照不同疾病严重程度分为轻度组(n=45)及重度组(n=57),同时选择健康受试者50例作为对照组,全部人员均接受了荧光定量法检测,对3组人员的miR-195及miR-21-3p表达水平进行测量;对比轻度组与重度组急性生理与慢性健康评估(APACHEⅡ)评分、RANSON系统评分;采用Spearman相关性探讨APACHEⅡ及RANSON分别与微小RNA-195(miR-195)及微小RNA-21-3p(miR-21-3p)表达水平相关性;将老年重症急性胰腺炎患者按照不同预后分为死亡组(n=21)及生存组(n=36),采用ROC曲线分析miR-195及miR-21-3p对老年重症急性胰腺炎的预测价值。结果显示,轻度组与重度组的miR-195及miR-21-3p表达水平均明显高于对照组,重度组的miR-195及miR-21-3表达水平均明显高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度组与轻度组相比,APACHEⅡ评分及RANSON评分均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。采用Spearman相关性分析,APACHEⅡ及RANSON评分分别与miR-195及miR-21-3p表达水平均呈现出了明显的正相关性(P<0.05)。死亡组与生存组相比miR-195及miR-21-3p表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析可见,miR-195及miR-21-3p分别用于预测重度急性胰腺炎患者曲线下面积分别为0.932、0.901。miR-195及miR-21-3p在老年重症急性胰腺炎患者中呈现出了异常升高的表达水平,与疾病严重程度呈现出了正相关性;miR-195及miR-21-3p在预测老年重症急性胰腺炎不良预后上具有一定的应用价值。

结直肠癌患者血清miR-21-5p、miR-377-3p表达与Wnt/β-catenin信号通路和预后的关系分析

目的研究结直肠癌(CRC)患者血清微小RNA(miR)-21-5p、miR-377-3p表达及与Wnt/β-连环蛋白(catenin)通路及预后的关系。方法选取2017年1月—2018年1月中国人民解放军联勤保障部队第九八九医院肿瘤科收治的CRC患者92例作为CRC组,医院同期健康体检者60例作为健康对照组。检测血清miR-21-5p、miR-377-3p表达量及Wnt/β-catenin通路指标Wnt3a、β-catenin、c-myc、细胞周期素D1(Cyclin D1)mRNA表达量。Pearson相关分析miR-21-5p、miR-377-3p与Wnt3a、β-catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA表达的相关性。比较不同临床病理特征CRC患者血清miR-21-5p、miR-377-3p表达差异。Kaplan-Meier曲线及Logrank检验分析不同血清miR-21-5p、miR-377-3p表达CRC患者预后的差异。多因素Cox回归分析CRC患者预后的影响因素。结果与健康对照组比较,CRC组患者血清miR-21-5p、Wnt3a、β-catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA表达量显著升高,miR-377-3p表达量显著降低(t/P=29.202/<0.001、52.006/<0.001、45.973/<0.001、39.196/<0.001、23.119/<0.001、38.120/<0.001)。血清miR-21-5p与Wnt3a、β-catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA表达呈正相关(r/P=0.404/<0.001、0.410/0.002、0.529/<0.001、0.378/<0.001),miR-377-3p与Wnt3a、β-catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA表达呈负相关(r/P=-0.347/0.007、-0.408/<0.001、-0.450/<0.001、-0.419/<0.001)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期和伴淋巴结转移CRC患者血清miR-21-5p表达明显高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移患者,而血清miR-377-3p表达明显低于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移患者,差异具有统计学意义(t/P=19.741/<0.001、18.534/<0.001、11.799/<0.001、17.639/<0.001)。血清miR-21-5p高表达患者3年生存率低于低表达患者(χ^(2)/P=17.700/<0.001),miR-377-3p低表达患者3年生存率低于高表达患者(χ^(2)/P=21.380/<0.001)。多因素Cox回归分析显示,肿瘤TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、伴淋巴结转移、miR-21-5p升高是CRC患者预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.875(1.322~2.662)、1.662(1.163~2.374)、1.847(1.366~2.500)],miR-377-3p升高是CRC患者预后的独立保护因素[OR(95%CI)=0.518(0.363~0.739)]。结论CRC患者血清miR-21-5p表达升高,miR-377-3p表达降低,两者可通过调控Wnt/β-catenin通路促进CRC的肿瘤进展,可作为辅助评估CRC患者预后的肿瘤标志物。

miR21-5p靶向转录激活蛋白STAT3减轻高氧性急性肺损伤

目的探讨miR21-5p调控转录激活蛋白STAT3在高氧性急性肺损伤(HALI)中的作用及机制。方法选择40只C57BL/6J小鼠随机分为常氧组、高氧组、高氧+miR21-5p组及高氧+空载体组,吸入90%以上浓度氧气建立HALI小鼠模型。常氧组饲养于正常空气中;高氧+miR21-5p组及高氧+空载体组分别经气管导管滴入miR21-5p AAV6或空载体,饲养3周后建立HALI小鼠模型。高氧暴露48 h后,取肺组织采用ELISA试剂盒检测炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)和氧化应激标志物(SOD、MDA、ROS)水平;计算肺水含量;行HE染色观察形态学变化并行病理学评分;Tunel法检测肺组织细胞凋亡率;RT-PCR检测miR21-5p表达水平;Western blot检测STAT3、p-STAT3、Bax及Bcl-2蛋白相对表达水平。结果与常氧组比较,高氧组肺损伤病理评分、肺水含量及肺组织细胞凋亡率升高(P<0.05),炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平升高(P<0.05),MDA和ROS水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),STAT3、p-STAT3及Bax蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05);与高氧组比较,高氧+miR21-5p组肺损伤病理评分、肺水含量及肺组织细胞凋亡率降低(P<0.05),炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平降低(P<0.05),MDA和ROS水平降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05),STAT3、p-STAT3及Bax蛋白表达降低(P<0.05),高Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。高氧组HE染色可见肺泡结构紊乱、间隔增厚,大量炎症细胞浸润,透明膜形成及肺泡萎陷,高氧+miR21-5p组HE染色结果显示肺损伤程度明显减轻。结论miR21-5p靶向转录激活蛋白STAT3活性抑制炎症反应及凋亡并维持氧化还原平衡减轻HALI。

MiR-21-3p在心肌梗死后心肌纤维化中的作用与机制研究

目的 研究miR-21-3p在心肌梗死后心肌纤维化重塑中的作用与机制。方法 选取40只C57雄性小鼠,随机分为正常组、假手术组、心肌梗死+病毒对照组、心肌梗死+miR-21-3p抑制组各10只。利用miR-21-3p mimics转染心肌成纤维细胞,转染48 h以后,利用实时定量PCR及免疫荧光的方法检测mi R-21-3p对心肌成纤维细胞分化以及胶原合成的影响;手术完成4周后行小动物心脏超声、Masson染色以及定量PCR检测各组实验小鼠心功能状态及心肌纤维化程度。利用双荧光素酶实验以及蛋白电泳实验,明确miR-21-3p与磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)的调控关系。结果 miR-21-3p在心梗组织中显著上调,miR-21-3p表达上调可以显著促进心肌成纤维细胞的增殖、迁移以及分化功能;相较于心肌梗死+病毒对照组,心肌梗死+miR-21-3p抑制组小鼠的左心室射血分数显著改善[(36.12±6.54)%比(18.72±4.23)%,P<0.05],左心室舒张末容积内径显著减少[(3.54±2.13)mm比(5.67±1.42)mm,P<0.05],同时伴有心肌纤维化面积的显著减轻[(23.42±2.69)mm^(2)比(42.12±7.15)mm^(2),P<0.05]。MiR-21-3p可以靶向结合PTEN的3’非编码区(3’UTR),并抑制PTEN的蛋白表达。结论 MiR-21-3P通过抑制PTEN的表达,介导心肌梗死后心肌纤维化的发生以及心功能的恶化。

miR-21-3p/p53信号通路对缺血/再灌注损伤小鼠的肾脏保护作用及其机制

目的观察miR-21-3p对肾缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤小鼠的影响,并探讨其肾脏保护作用是否与通过miR-21-3p/p53信号通路而调控凋亡水平有关。方法体内实验随机分为Sham、I/R、I/R+agomir、I/R+agomir+PIF、I/R+PIF共5组。建立小鼠肾缺血/再灌注(I/R)损伤模型;构建过表达miR-21-3p(agomiR-21-3p)小鼠,同时给予p53抑制剂Pifithrin-α(PIF)处理;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-21-3p与p53的互作;检测小鼠血清中肾功能指标小鼠胱抑素C(Cys C)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)的含量,以及炎症指标肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)含量水平;此外,TUNEL染色观察肾细胞凋亡情况,并检测肾组织(细胞)匀浆中细胞凋亡相关基因p53、Bax、Bcl2、Caspase-3的表达水平。结果与Sham组比较,I/R组小鼠肾细胞miR-21-3p表达明显降低;而与I/R组相比,I/R+agomir组、I/R+PIF组和I/R+agomir+PIF组miR-21-3p表达均明显升高(P<0.05),而p53表达趋势相反;双荧光素酶报告基因实验证实miR-21-3p与p53存在互作关系;与Sham组比较,其他肾组织细胞凋亡率均升高;但是与I/R组相比,I/R+agomir组、I/R+PIF组和I/R+agomir+PIF组凋亡率降低,I/R+agomir+PIF组损伤最低(P<0.05)。结论miR-21-3p可以通过靶向下调p53表达来抑制凋亡的发生,从而减轻肾I/R小鼠的肾损伤,发挥肾脏保护作用。

miR-21-3p靶向RNF-11基因对脊索瘤细胞生物学行为的影响

目的 观察miR-21-3p对脊索瘤细胞生物学行为的影响,并初步探究其作用机制。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-21-3p在脊索瘤组织及配对癌旁组织中的表达,在脊索瘤细胞U-CH1中转染特异性miR-21-3p inhibitors(anti-miR-21-3p组)或阴性对照inhibitors(anti-NC组),同时设置空白对照(Blank组),分别采用噻唑蓝(MTT)、克隆形成、流式细胞术、Transwell和划痕实验探究下调miR-21-3p对U-CH1细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响,采用qRT-PCR和Western印迹分析细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达,生物信息学软件TargetScan预测miR-21-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-21-3p和RNF-11基因的靶向关系。结果 脊索瘤组织中miR-21-3p的表达量明显高于癌旁组织(P<0.05),与Blank组相比,anti-miR-21-3p组U-CH1细胞中miR-21-3p的表达量、N-cadherin和Vimentin的mRNA和蛋白表达水平降低,细胞增殖、侵袭和迁移能力均受到抑制,凋亡率、E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平升高,差异均有显著意义(P<0.05)。生物信息学分析发现miR-21-3p的可能靶基因是RNF-11,双荧光素酶报告基因实验证实了RNF-11是miR-21-3p的靶基因。结论 miR-21-3p靶向RNF-11调控脊索瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为。

早产儿坏死性小肠结肠炎患者血清miR-21-3p和miR-22-3p水平表达与病情严重程度的分析研究

目的 探究坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)早产儿血清微小核糖核酸(micro RNA,miR)-21-3p和微小核糖核酸(micro RNA,miR)-22-3p水平与病情严重程度的分析。方法 选取海南省人民医院2020年3月~2022年12月收治的112例NEC早产儿为NEC组,根据患儿病情严重程度将其分为轻度组(n=35)、中度组(n=47)和重度组(n=30);同时根据患儿肠道菌群紊乱程度将其分为Ⅰ级紊乱组(n=34)、Ⅱ级紊乱组(n=52)和Ⅲ级紊乱组(n=26)。另选取在该院同期体检健康的早产儿100例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定研究对象血清miR-21-3p和miR-22-3p水平;采用spearman分析血清miR-21-3p和miR-22-3p水平与NEC患儿病情程度和肠道紊乱程度相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miR-21-3p和miR-22-3p水平在预测NEC中重度患儿中的价值。结果 NEC组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(36.27±8.56 pg/ml)、白细胞介素-6(IL-6)(429.52±68.36pg/ml)、白细胞介素-10(IL-10)(25.83±6.46 pg/ml)和miR-21-3p(2.16±0.73)水平均较对照组(12.26±2.73 pg/ml,14.34±3.36 pg/ml,3.62±1.05 pg/ml,0.92±0.28)上调,血清miR-22-3p(0.74±0.26)水平较对照组(1.36±0.42)下调,差异具有统计学意义(t=26.850,60.654,33.974,15.967,13.069,均P<0.05);NEC患儿血清miR-21-3p水平随患儿肠道菌群紊乱程度和病情严重程度加重而逐渐升高(F=53.934,55.720,均P<0.05);血清miR-22-3p水平随患儿肠道菌群紊乱程度和病情严重程度加重而逐渐降低,差异具有统计学意义(F=18.037,24.017,均P<0.05);miR-21-3p与NEC患儿病情严重程度以及肠道菌群紊乱程度呈正相关(r=0.516,0.531,均P<0.05),miR-22-3p与NEC患儿病情严重程度以及肠道菌群紊乱程度呈负相关(r=-0.504,-0.529,均P<0.05);ROC结果显示,血清miR-21-3p,miR-22-3p预测NEC患儿是否为中重度患儿的AUC分别为0.837,0.852,两者联合预测的AUC为0.912,均高于两者单独预测,且特异度为97.14%。结论 NEC早产儿血清miR-21-3p水平上调,miR-22-3p水平下调,且两者与肠道菌群紊乱程度和病情严重程度相关。

ighv3-21基因、SOX11与P53蛋白表达对套细胞淋巴瘤诊断、治疗及预后的价值

目的:探讨ighv3-21基因、SOX11与P53蛋白表达对套细胞淋巴瘤诊断、治疗及预后的价值。方法:通过检测23例套细胞淋巴瘤和10例良性淋巴结增生的ighv3-21基因和SOX11与P53蛋白表达及相关数据的回顾性分析,探讨他们的表达对于套细胞淋巴瘤的诊断、治疗和预后的价值。结果:套细胞淋巴瘤组和良性淋巴结肿大组之间SOX11免疫组化检测的差异有统计学意义,套细胞淋巴瘤多以阳性率低于25%为主。SOX11染色强度≥2的患者,靶向治疗的有效率更高。结论:SOX11免疫组化检测阳性率在套细胞淋巴瘤组中更高。B症状与治疗的有效率有关。全程管理中推荐积极加用靶向药物的应用。

“杜仲-当归”调控NLPR3炎症小体对骨关节炎大鼠改善作用的研究

目的:探究药对“杜仲-当归”对骨关节炎(osteoarthritis,OA)大鼠膝组织的改善效果及对NLPR3炎症小体的调控。方法:24只雄性SD大鼠随机挑选18只采用前交叉韧带切断术(ACLT)进行OA造模,随后将大鼠分为正常组、OA模型组、杜仲-当归组和阳性药物组,每组6只,后两组分别给与“杜仲-当归”或西乐葆和奥泰灵混合液治疗8周。收集大鼠外周血,ELISA测定IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平;另取大鼠膝关节软骨组织,HE染色观察病理改变,番红-固绿染色观察软骨钙化情况并行OARSI评分,免疫组化和TUNEL染色分别检测膝关节软骨组织Caspase1、CollagenⅡ表达和软骨细胞凋亡情况,Western blot检测基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、p53、p21、NLPR3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Pro-Caspase-1蛋白表达。结果:与正常组相比,OA模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均显著上升(P<0.01),膝关节损伤明显,OARSI评分显著升高(P<0.01),软骨细胞凋亡显著增加(P<0.01),组织Caspase1含量、MMP-13、p53、p21、NLPR3、ASC、Pro-Caspase-1蛋白表达均显著升高(P<0.01),而CollagenⅡ含量和TIMP-1蛋白表达显著降低(P<0.01)。与OA模型组相比,杜仲-当归组和阳性药物组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平显著下降(P<0.05),膝关节损伤改善,OARSI评分降低(P<0.01),软骨细胞凋亡显著减少(P<0.01),组织Caspase1含量,MMP-13、p53、NLPR3、Pro-Caspase-1蛋白表达显著降低(P<0.05)、CollagenⅡ含量和TIMP-1蛋白表达显著增加(P<0.05),杜仲-当归组大鼠p21、ASC蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:“杜仲-当归”可改善OA大鼠软骨病变,其作用可能与介导NLPR3/ASC/Pro-Caspase-1炎性体通路,下调IL-1β及相关炎性因子水平、抑制软骨细胞凋亡有关。