miR-21-3p靶向STAT3促进银屑病角质形成细胞增殖的研究

目的探讨miR-21-3p及其靶蛋白信号转导子和转录激活子3蛋白(STAT3)在寻常型银屑病发生过程中角质形成细胞的作用意义。方法对皮肤组织中STAT3蛋白表达情况的检测选择免疫组织化学法,对健康人群皮肤组织及银屑病患者皮损组织miR-21-3p表达量的检测选择实时荧光定量PCR法,靶基因STAT3和miR-21-3p关系的检测选择双荧光素酶报告基因。化学合成miR-21-3p模拟物、抑制剂,瞬时转染HaCaT细胞,对不同分组细胞进行CCK8、流式细胞凋亡实验,探究分析miR-21-3p调控细胞表型主要作用。对于转染细胞中STAT3蛋白表达情况,选择Western Blot检测。结果寻常型银屑病患者皮肤组织中miR-21-3p呈高表达(P<0.05)。STAT3免疫组化阳性表达定位于细胞浆,在银屑病组患者皮损组织阳性表达率为82.22%(37/45)高于正常皮肤组织(P<0.01)。双荧光素酶报告基因显示miR-21-3p与STAT3存在结合,呈靶向关系。miR-21-3p mimics促进HaCaT细胞增殖活性,抑制细胞凋亡;miR-21-3p inhibitor抑制HaCaT细胞的增殖能力,促使细胞趋向凋亡。miR-21-3p转染HaCaT过表达可对STAT3蛋白表达量产生促进,相反则降低(F=48.632,P<0.01)。结论miR-21-3p呈现正调控关系,能够靶向调控STAT3;两者共同作用参与并加重银屑病的病程,并抑制患者细胞凋亡,调节角质形成细胞增殖活性。

miR-21-3p通过下调CCT4抑制食管鳞癌细胞的迁移及侵袭

目的:探讨miR-21-3p对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:通过数据库检索miR-21-3p的下游靶基因,GEPIA2数据库预测CCT4在食管鳞癌中的表达和对食管鳞癌患者预后的影响,培养食管鳞癌细胞TE-1、KYSE150,将miR-21-3p inhibitor、SiCCT4、Plenti-CMV-CCT4-GFP/Puro转染至TE-1和KYSE150细胞中,分为miR-21-3p inhibitor组和inhibitor NC组、SiCCT4组和SiNC组、Plenti-CMV-CCT4组和inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组,采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-21-3p和CCT4 mRNA的表达水平,Transwell迁移侵袭实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力,Western blot检测转染后各组细胞CCT4蛋白的表达水平。结果:数据库预测结果显示CCT4在食管鳞癌中过表达,与食管鳞癌患者总体生存期相关,与miR-21-3p呈正相关。qRT-PCR显示miR-21-3p和CCT4在食管癌细胞相较于正常上皮细胞表达显著升高,且在抑制miR-21-3p后CCT4表达水平显著降低(P<0.05)。Transwell实验显示,inhibitor组迁移率及侵袭率显著低于inhibitor NC组(P<0.05);SiCCT4组迁移率及侵袭率显著低于SiNC组(P<0.05);inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组迁移率及侵袭率显著高于inhibitor组(P<0.05);Western blot检测CCT4蛋白发现,inhibitor组蛋白低于inhibitor NC组(P<0.05),inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组蛋白显著高于inhibitor组(P<0.05)。结论:miR-21-3p和CCT4在食管癌中呈现过表达,miR-21-3p通过下调CCT4表达抑制食管癌细胞迁移和侵袭能力。

外周血miR-21-5p、Foxp3及凝血功能预测人工周期-冻融胚胎移植结局的价值

目的:探讨外周血miR-21-5p、Foxp3及凝血功能预测人工周期-冻融胚胎移植结局的价值。方法:选取2021年1月—2023年12月于赣州市人民医院行人工周期-冻融胚胎移植的患者108例,其中妊娠成功48例,妊娠失败60例。观察比较妊娠成功和失败患者外周血miR-21-5p、Foxp3、D-二聚体(D-D)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)的差异,并分析外周血miR-21-5p、Foxp3及凝血功能指标预测人工周期-冻融胚胎移植结局的价值。结果:妊娠成功患者外周血miR-21-5p、Foxp3 mRNA、D-D均高于妊娠失败患者,APTT和PT均明显长于妊娠失败患者(P<0.05)。miR-21-5p、Foxp3 mRNA、D-D和PT是妊娠失败的影响因素(P<0.05)。miR-21-5p、Foxp3 mRNA、D-D和PT预测妊娠失败的受试者操作特征(ROC)曲线下面积分别为0.857、0.790、0.922和0.861。结论:人工周期-冻融胚胎移植成功和失败患者外周血miR-21-5p、Foxp3及D-D和PT有所差异,且在预测妊娠结局方面有一定应用价值。

乙肝病毒通过调控miR-21-5p/STAT3通路促进骨髓来源抑制细胞的增殖与活性

目的:探究乙肝病毒(HBV)对骨髓来源抑制细胞(MDSCs)的作用及其机制。方法:C57BL/6小鼠分为正常组和乙肝组,乙肝组建立慢性HBV感染模型,检测小鼠miR-21-5p水平;另将C57BL/6小鼠分为对照组、miR-21-5p阴性对照组、miR-21-5p过表达组和miR-21-5p沉默组,除对照组外其余小鼠注射miR-21-5p干预,除miR-21-5p阴性对照组外,所有小鼠建立慢性HBV感染小鼠模型,检测小鼠miR-21-5p水平及MDSCs数量;将miR-21-5p分别转染小鼠MDSCs,暴露于HBV病毒中,检测p-STAT3(Ser727)、Arginase-1、IL-10及p-STAT3蛋白水平;在培养基中加入Stattic(STAT3抑制剂),检测p-STAT3、Arginase-1以及IL-10蛋白水平。结果:乙肝组miR-21-5p表达水平高于正常组;miR-21-5p阴性对照组相较于对照组miR-21-5p表达水平及MDSCs数量升高,miR-21-5p过表达组相较于miR-21-5p沉默组miR-21-5p表达水平及MDSCs数量升高;小鼠MDSCs感染HBV后p-STAT3(Ser727)、Arginase-1、IL-10及p-STAT3蛋白表达升高,miR-21-5p过表达后p-STAT3(Ser727)、Arginase-1、IL-10及p-STAT3蛋白表达升高;加入Stattic后,p-STAT3、Arginase-1以及IL-10蛋白表达无差异。结论:HBV可能通过调控miR-21-5p/STAT3通路,从而促进MDSCs的增殖与活性。

血清miR-21-3p、IL-18水平检测对重症急性胰腺炎患者急性肾损伤预测评估的临床价值

目的探讨血清中微RNA(miR)-21-3p和白细胞介素(IL)-18水平对重症急性胰腺炎患者急性肾损伤(AKI)预测评估的临床价值。方法前瞻性选取2020年9月至2023年青岛市中医医院收治的146例急性重症胰腺炎患者,根据有无AKI分为AKI组(n=51)和非AKI组(n=95)。比较两组的临床资料[性别、年龄(≤50岁、>50岁)、病因类型(酒精性、胆源性、高血脂性、其他)、体重指数(≤28 kg/m 2、>28 kg/m 2)],比较两组血清中miR-21-3p(相对表达量、高表达比例、低表达比例)、IL-18水平(平均表达量、≤140 pg/mL比例、>140 pg/mL比例);采用Logistic回归模型分析影响重症急性胰腺炎患者住院期间AKI发生的因素;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析miR-21-3p、IL-18对重症急性胰腺炎患者并发AKI的预测价值。结果AKI组患者的性别、年龄、病因类型、体重指数与非AKI组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。AKI组的miR-21-3p相对表达量、IL-18水平、Ranson评分分别为2.24±0.52、(178.21±49.32)pg/mL、(6.14±1.24)分,均明显高于非AKI组[1.58±0.35、(82.35±38.43)pg/mL、(4.53±1.12)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,miR-21-3p和IL-18增高均是SAP患者发生AKI的危险因素(OR=1.490,95%CI:1.035~1.832;OR=1.421,95%CI:1.042~1.734;P<0.05)。miR-21-3p和IL-18联合检测对重症急性胰腺炎伴AKI的诊断具有更高的敏感性和特异性,AUC为0.873,敏感度为90.42%,特异度为91.24%。结论在重症急性胰腺炎合并AKI患者中,血清中miR-21-3p和IL-18水平显著升高。检测血清miR-21-3p和IL-18水平有助于预测重症急性胰腺炎合并AKI,尤其在联合检测时,有更高的准确性。

脓毒症并发急性肾损伤患儿的血清miR-182-5p、miR-21-3p表达变化及其临床意义

目的观察脓毒症并发急性肾损伤(AKI)患儿血清miR-182-5p、miR-21-3p的表达变化,并探讨其临床意义。方法113例脓毒症患儿,根据是否并发AKI分为AKI组89例和NAKI组24例,采集患儿入院后次日清晨空腹静脉血,采用实时荧光定量法检测血清miR-182-5p、miR-21-3p,采用ELISA法检测血清肾功能指标肾损伤分子-1(KIM-1)、胱抑素C(Cys-C)、肌酐(Scr),分析血清miR-182-5p、miR-21-3p表达与脓毒症并发AKI患儿血清KIM-1、Cys-C、Scr水平的相关性,采用多因素Logistics回归分析法分析脓毒症并发AKI的影响因素,绘制受试者工作特征曲线分析血清miR-182-5p、miR-21-3p表达对脓毒症患儿并发AKI的预测价值。结果AKI、NAKI组血清miR-182-5p相对表达量分别为1.54(0.98,1.98)、0.35(0.28,0.39),血清miR-21-3p相对表达量分别为2.66(1.83,3.28)、0.85(0.75,1.00),二者比较,P均<0.05。脓毒症并发AKI患儿的血清miR-182-5p、miR-21-3p表达与血清KIM-1、Cys-C、Scr水平均呈正相关(P均<0.05)。与NAKI组比较,AKI组患者24小时尿量少,血清KIM-1、Cys-C、Scr水平升高,急性生理和慢性健康评估Ⅱ评分、脓毒症相关的序贯器官衰竭评估评分增加(P均<0.05)。血清miR-182-5p、miR-21-3p、KIM-1、Cys-C、Scr为脓毒症患儿并发AKI独立危险因素(OR分别为1.530,1.247,1.249,1.473,1.741;95%CI分别为1.134~1.913,1.011~1.707,1.021~1.529,1.103~2.987,1.062~3.517;P均<0.05)。miR-182-5p+miR-21-3p联合预测脓毒症患儿并发AKI的曲线下面积明显高于血清miR-182-5p、miR-21-3p单独预测(Z=3.039、2.864,P=0.002、0.004)。结论脓毒症并发AKI患儿血清miR-182-5p、miR-21-3p表达降低。血清miR-182-5p、miR-21-3p表达降低是脓毒症患儿并发AKI的独立危险因素。血清miR-182-5p、miR-21-3p可作为脓毒症患儿并发AKI的预测指标。

上皮性卵巢癌组织中miR-21-5p、miR-29-3p、miR-139-5p表达变化及意义

目的观察上皮性卵巢癌(EOC)组织中miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p的表达变化,并探讨其临床意义。方法收集卵巢组织标本182例,其中正常卵巢组织56例、良性上皮性肿瘤(BEOT)42例、EOC 84例。采用实时荧光定量PCR技术测定组织标本中的miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p,并分析其与EOC患者临床病理特征的关系。结果与正常卵巢组织、BEOT组织相比,EOC组织中miR-21-5p和miR-29-3p相对表达量增加,miR-139-5p相对表达量降低(P均<0.05);正常卵巢组织与BEOT组织比较,差异无统计学意义。与中高度分化、Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移的EOC组织相比,低分化、Ⅲ~Ⅳ期和有淋巴结转移的EOC组织miR-21-5p和miR-29-3p高表达者多,miR-139-5p高表达者少(P均<0.05)。结论 EOC组织中miR-21-5p和miR-29-3p表达上调并可能发挥促癌作用,miR-139-5p表达下调并可能具有一定抑癌作用,三者均可作为EOC的预后指标或者治疗靶标。

三阴性乳腺癌组织长链非编码RNA-P21、microRNA-17-3p的表达及其临床意义

目的探讨三阴性乳腺癌组织中长链非编码RNA-P21(LncRNA-P21)、microRNA-17-3p(miR-17-3p)的表达,分析其与三阴性乳腺癌患者的临床病理特征及预后的关系。方法选取2016年1月—2017年5月南通大学附属医院收治的106例三阴性乳腺癌患者经手术切除的癌组织和癌旁组织(距离癌组织至少5 cm)标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中LncRNA-P21和miR-17-3p的表达;收集患者的临床病理特征资料,分析LncRNA-P21、miR-17-3p表达与临床病理特征的关系;术后随访5年,采用Kaplan-Meier法绘制不同LncRNA-P21、miR-17-3p表达三阴性乳腺癌患者的生存曲线;Cox回归分析影响三阴性乳腺癌患者预后的因素。结果癌组织LncRNA-P21 mRNA相对表达量低于癌旁组织(P<0.05);癌组织miR-17-3p mRNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05)。临床Ⅲ期、腋窝淋巴结转移、Ki-67≥30%三阴性乳腺癌组织中LncRNA-P21 mRNA相对表达量低于临床Ⅰ、Ⅱ期,无腋窝淋巴结转移和Ki-67<30%(P<0.05);临床Ⅲ期、腋窝淋巴结转移、Ki-67≥30%三阴乳腺癌组织中miR-17-3p mRNA相对表达量高于临床Ⅰ、Ⅱ期,无腋窝淋巴结转移和Ki-67阴性表达(P<0.05)。不同年龄、肿瘤直径、分化程度、绝经状态的三阴性乳腺癌患者LncRNA-P21、miR-17-3p mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。三阴性乳腺癌组织中LncRNA-P21表达与miR-17-3p表达呈负相关(r=-0.570,P<0.05)。LncRNA-P21低表达组5年无病生存期(DFS)和总生存期(OS)生存率低于LncRNA-P21高表达组(P<0.05),miR-17-3p高表达组5年DFS、OS生存率低于miR-17-3p低表达组(P<0.05)。单因素Cox回归分析结果显示,分化程度、TNM分期、腋窝淋巴结转移、LncRNA-P21、miR-17-3p是三阴性乳腺癌患者预后的影响因素(P<0.05);多因素Cox风险比例回归分析结果显示,腋窝淋巴结转移、miR-17-3p是三阴性乳腺癌患者预后不良的危险因素(P<0.05),LncRNA-P21是保护因素(P<0.05)。结论三阴性乳腺癌组织LncRNA-P21表达下调,miR-17-3p表达上调,且与乳腺癌Ki-67≥30%、临床Ⅲ期、腋窝淋巴结转移及预后不良有关。

血清微小RNA-21-3p及白细胞介素-18水平对急性重症胰腺炎并发急性肾损伤的预测价值

目的:探讨血清微小RNA-21-3p(miR-21-3p)及白细胞介素18(IL-18)水平对急性重症胰腺炎并发急性肾损伤的预测价值。方法:纳入急性重症胰腺炎患者120例为研究对象,根据是否出现急性肾损伤分为急性肾损伤组(46例)和非急性肾损伤组(74例)。另选择同期体检健康者60例为健康组。三组均在入院时采集空腹状态下肘静脉血,采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定miR-21-3p表达量,采用酶联免疫吸附试验测定IL-18水平。比较三组miR-21-3p表达量、IL-18水平。比较不同临床资料患者miR-21-3p表达量和IL-18水平。采用多元Logistic回归分析急性重症胰腺炎并发急性肾损伤的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清miR-21-3p及IL-18对急性重症胰腺炎并发急性肾损伤的预测价值。结果:与健康组比较,急性肾损伤组、非急性肾损伤组血清miR-21-3p表达量和IL-18水平更高,且急性肾损伤组血清指标高于非急性肾损伤组(均P<0.05)。不同APACHEⅡ评分、CT分级、有无胸水患者的miR-21-3p表达量和IL-18水平比较差异有统计学意义(均P<0.05)。CT分级、胸水、血清miR-21-3p表达量和IL-18水平是急性重症胰腺炎并发急性肾损伤的影响因素(均P<0.05)。血清miR-21-3p、IL-18单独预测急性重症胰腺炎并发急性肾损伤有一定价值,但联合预测的价值更高(均P<0.05)。结论:急性重症胰腺炎患者血清miR-21-3p表达量及IL-18水平会明显上升,CT分级、胸水、血清miR-21-3p表达量和IL-18水平与急性重症胰腺炎并发急性肾损伤密切相关。血清miR-21-3p及IL-18联合检测对急性重症胰腺炎并发急性肾损伤具有较高的预测价值。

重症急性胰腺炎患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p与并发肺损伤的相关性

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p与并发肺损伤(ALI)的相关性。方法选择2017年7月~2020年2月本院收治的124例SAP患者作为研究对象,按照是否合并ALI分为单纯SAP组(78例)、SAP合并ALI组(46例);另选择同期体检的50例健康志愿者作为对照组。采集患者外周静脉血,采用实时荧光反转录定量聚合酶链式反应检测miR-21-3p、miR-22-3p表达,收集SAP患者临床资料。结果单纯SAP组、SAP合并ALI组患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p显著高于对照组(P<0.05);SAP合并ALI组高于单纯SAP组(P<0.05)。不同CT分级、伴有胸水与否、急性生理学与慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p水平比较差异具统计学意义(P<0.05);CT分级为E级、合并胸水、APACHEⅡ评分≥15分患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p水平高于CT分级为D级、无胸水、APACHEⅡ评分<15分的患者(P<0.05)。Logistic回归分析显示,CT分级、胸水、外周血miR-21-3p、miR-22-3p表达水平与SAP患者并发ALI相关(P<0.05)。外周血miR-21-3p、miR-22-3p诊断ALI曲线下面积(AUC)为0.770、0.812,当截点值为2.668、1.815时,约登指数最大;两者联合诊断AUC为0.869。结论SAP患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p与ALI并发密切相关,临床可检测其水平明确SAP程度及是否发生ALI,对指导临床治疗具有重要价值。

hsa-miR-21-5p/ZNF367分子轴通过PI3K/Akt通路影响胃癌细胞的增殖和迁移

目的探讨ZNF367通过PI3K/Akt通路抑制胃癌(GC)细胞的增殖和迁移,并初步探讨其作用分子机制。方法收集2015年8月–2018年10月上海市第八人民医院普外科手术切除的GC组织(非坏死部分)和相邻癌旁组织(距肿瘤组织>3 cm)标本46例,同时选取正常人胃黏膜上皮细胞GES1及GC细胞系MGC-803和MKN-45。采用qRT-PCR、Western blot实验检测ZNF367和hsa-miR-21-5p(mi R-21-5p)在组织和细胞系中的表达情况,进行Kaplan-Meier生存分析得出总生存期;利用脂质体LipofectamineTM 2000转染寡核苷酸片段mi RNA-NC、miR-21-5pmimic和miR-21-5pinhibitor至MGC-803细胞,通过CCK8法和划痕实验检测细胞的增殖和迁移能力;采用双荧光素酶报告载体系统验证ZNF367和miR-21-5p的作用靶点,采用qRT-PCR、 Westernblot实验检测miR-21-5pmimic和miR-21-5pinhibitor转染MGC-803细胞中ZNF367、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin以及PI3K/Akt通路中p-PI3K和p-Akt的表达情况。结果 ZNF367在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达水平分别显著低于癌旁组织和GES-1细胞(P<0.01),且在MGC-803细胞中表达水平最低,而miR-21-5p的表达正相反;在MGC-803细胞中,OE-ZNF367和miR-21-5p inhibitor转染组的细胞增殖和迁移能力显著低于对照组,而si RNA-ZNF367和miR-21-5pmimic转染组的细胞增殖和迁移能力显著高于对照组;生物信息学和荧光素酶活性实验结果表明ZNF367与miR-21-5p具有直接靶向关系;qRT-PCR、Western blot实验结果表明在miR-21-5p inhibitor转染组中,E-cadherin的表达是显著提高的(P <0.01),而N-cadherin、Vimentin、p-PI3K和p-Akt的表达是显著下降的(P<0.01);在miR-21-5pmimic转染组中,结果相反(P <0.01)。结论 hsa-miR-21-5p/ZNF367分子轴通过调控PI3K/Akt通路抑制EMT过程,从而影响胃癌细胞MGC-803的增殖和迁移。

不明原因复发性自然流产患者蜕膜组织中miR-21和miR-31的表达及其与FOXP3的相关性研究

目的研究微小核糖核酸-21(miR-21)、miR-31和叉头样转录因子P3(FOXP3)在不明原因复发性自然流产(URSA)患者蜕膜中的表达情况,探讨miR-21、miR-31与FOXP3之间的相关性。方法运用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法测定miR-21、miR-31及FOXP3在URSA患者及正常对照组蜕膜组织中的表达情况,并分析miR-21、miR-31的表达与FOXP3表达的相关性。结果FOXP3、miR-21在URSA组中的表达均明显低于正常对照组(P均<0.05),而miR-31在URSA组中的表达高于对照组(P>0.05)。蜕膜组织中miR-21,miR-31的表达与FOXP3的表达相关(P均<0.05),其中miR-21与FOXP3表达呈正相关,而miR-31与FOXP3表达呈负相关。结论蜕膜组织中miR-21和miR-31的表达异常,可能通过下调FOXP3基因的表达而引起母体免疫耐受机制紊乱,从而导致URSA的发生。

miR-21-5p对川崎病内皮细胞焦亡的作用及其机制研究

目的探究miR-21-5p对川崎病(KD)内皮细胞焦亡的作用及其机制。方法采用随机数字表法将16只C57BL/6小鼠分为KD组和PBS组,每组8只。利用干酪乳杆菌细胞壁提取物(LCWE)腹腔注射小鼠,构建KD模型。利用LCWE处理小鼠冠状动脉内皮细胞(MCAECs),构建KD体外细胞模型。在使用LCWE处理的基础上,根据转染miR-21-5p抑制剂(miR-21-5p inhibitor)或inhibitor阴性对照物(inhibitor-NC)、miR-21-5p模拟物(miR-21-5p mimics)或mimics阴性对照物(miR-NC)、用或不用含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)抑制剂MCC950,将MCAECs分组为:(1)LCWE组和对照组;(2)LCWE+inhibitor-NC组和LCWE+miR-21-5p inhibitor组;(3)LCWE组、LCWE+MCC950组、LCWE+MCC950+miR-NC组和LCWE+MCC950+miR-21-5p mimics组。采用HE染色观察小鼠冠状动脉组织病理学变化;采用qRT-PCR法检测miR-21-5p表达变化;采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)、caspase-1前体(pro-caspase-1)、消皮素D蛋白(GSDMD)p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达;采用细胞计数盒法检测细胞活力;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH活性。结果与PBS组相比,KD组小鼠冠状动脉组织病变明显,冠状动脉组织中NLRP3介导的细胞焦亡、miR-21-5p表达水平均升高(均P<0.01)。与对照组相比,LCWE组MCAECs细胞活力明显降低并且miR-21-5p表达水平明显升高(均P<0.01)。与LCWE+inhibitor-NC组相比,LCWE+miR-21-5p inhibitor组细胞miR-21-5p表达水平、NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达以及LDH活性均明显降低(均P<0.01),而细胞活力明显升高(P<0.05)。与LCWE组相比,LCWE+MCC950组NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达以及LDH活性均明显降低(均P<0.01),且细胞活力明显升高(P<0.01),而进一步转染miR-21-5p mimics明显逆转了以上变化(均P<0.01)。结论在KD中,miR-21-5p通过激活NLRP3炎症小体调节血管内皮细胞焦亡,从而加剧血管内皮细胞损伤。提示抑制miR-21-5p可以部分改善KD期间的血管内皮细胞损伤,miR-21-5p可以作为治疗KD的潜在干预靶点。

Hsa-miR-21-3p对食管癌细胞运动与侵袭能力的影响

目的:研究hsa-miR-21-3p对人食管癌细胞Eca9706侵袭和迁移能力的影响。方法:采用终浓度为30 nmol/L的寡核苷酸hsa-miR-21-3p mimics和阴性对照转染Eca9706细胞48 h后,用实时荧光定量PCR检测转染后hsa-miR-21-3p的表达水平,通过Transwell体外侵袭试验和划痕愈合试验分别观察hsa-miR-21-3p对Eca9706细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:与阴性对照组相比4较,hsa-miR-21-3p mimics转染组细胞中hsa-miR-21-3p表达明显升高(P<0.01),是阴性对照的1.1×10倍;Transwell体外侵袭试验结果显示镜下每个视野穿膜细胞数试验组(76.67±6.11)较阴性对照组(42.33±2.52)增加了81.1%(P<0.01),表明hsa-miR-21-3p的过表达显著增强食管癌细胞的侵袭能力;划痕愈合试验结果显示,hsa-miR-21-3p试验组的划痕宽度较对照组窄,在相同的时间点,试验组的划痕愈合能力均大于对照组(P<0.01),说明转染了hsa-miR-21-3p mimics的试验组细胞的迁移能力大于对照组。结论:Hsa-miR-21-3p的高表达可以使人食管癌细胞Eca9706的侵袭和迁移能力增强,提示其可能参与了食管癌进程中的浸润和转移。

血清miR-21-3p检测联合淋巴结粗针穿刺活检对甲状腺癌颈淋巴结转移的诊断价值

目的:探讨血清miR-21-3p检测联合超声引导下淋巴结粗针穿刺活检(LCNB)对甲状腺癌颈淋巴结转移的诊断价值。方法:选取甲状腺癌伴颈淋巴结肿大(均行血清miR-21-3p检测及LCNB)病人80例,以手术病理为标准,比较血清miR-21-3p检测、超声引导下LCNB及两者联合检查对甲状腺癌伴颈淋巴结转移的诊断价值。结果:80例病人经手术病理检查,有淋巴结转移者49例,无转移者31例。血清miR-21-3p检测联合超声引导下LCNB诊断甲状腺癌伴颈淋巴结转移准确度为91.8%、灵敏度为87.6%,均高于两者独立检查准确度76.2%、84.7%和灵敏度82.3%、85.7%(P<0.05),联合检查受试者工作曲线下面积为0.9071,大于两者单独检测的0.7765、0.8292(P<0.05)。结论:相较于单独检测,血清miR-21-3p联合超声引导下LCNB诊断甲状腺癌淋巴结转移的准确度、灵敏度更好,诊断效能更高。

丙泊酚调控miR-21-3p对缺氧/复氧所诱导心肌细胞损伤的影响

目的探讨丙泊酚对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法以H/R诱导的大鼠心肌细胞H9C2建立心肌缺血再灌注损伤模型,不同剂量的丙泊酚处理H9C2细胞;采用CCK-8法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用qRT-PCR法检测miR-21-3p的表达量;ELISA法检测白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的水平;anti-miR-NC、anti-miR-21-3p分别转染至H9C2细胞后进行H/R处理,miR-NC、miR-21-3p mimics分别转染至H9C2细胞后用50μmol/L丙泊酚处理24 h,然后进行H/R处理,采用上述方法分别检测细胞增殖、凋亡及炎性细胞因子表达水平;Western blot测定B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达量。结果丙泊酚处理后,H/R诱导的H9C2细胞增殖抑制率、TNF-α、细胞凋亡率、IL-1β、Bax蛋白水平、IL-6、miR-21-3p表达量下降(P<0.05),Bcl-2蛋白水平上升(P<0.05),且呈剂量依赖性;转染anti-miR-21-3p可降低细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Bax蛋白水平、IL-6、TNF-α、IL-1β水平(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05);转染miR-21-3p mimics可减弱丙泊酚对H/R诱导的H9C2细胞增殖、凋亡及炎性因子表达水平的作用。结论丙泊酚可通过抑制miR-21-3p表达而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎性反应从而减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。

LncRNA SNHG3通过miR-330-5p/PAK1信号轴调节前列腺癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质转化

目的 探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(LncRNA SNHG)3通过miR-330-5p/P21活化激酶(PAK)1信号轴调节前列腺癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质转化。方法 体外培养人前列腺上皮细胞和人前列腺癌细胞株PC-3、DU 145、VCaP,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各细胞中LncRNA SNHG3、miR-330-5p与PAK1 mRNA表达。体外培养人前列腺癌细胞PC-3,随机分为对照组、LncRNA SNHG3 siRNA组、miR-330-5p inhibitor组、共转染阴性对照(LncRNA SNHG3 siRNA阴性对照+miR-330-5p inhibitor阴性对照)组、共转染(LncRNA SNHG3 siRNA+miR-330-5p inhibitor)组,分组转染LncRNA SNHG3 siRNA及其阴性对照、miR-330-5p inhibitor及其阴性对照后,以噻唑蓝(MTT)和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测PC-3细胞增殖情况;以流式细胞术检测PC-3细胞凋亡情况;以Transwell实验检测PC-3细胞侵袭情况;以qRT-PCR检测PC-3细胞miR-330-5p、PAK1与上皮间质转化因子E-钙黏附蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;以双荧光素酶报告基因实验检测PC-3细胞中LncRNA SNHG3对miR-330-5p的靶向调控作用。结果 与人前列腺上皮细胞比较,PC-3、DU 145、VCaP细胞中LncRNA SNHG3、PAK1 mRNA表达明显升高,miR-330-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组、共转染组分别相比,LncRNA SNHG3siRNA组细胞活力与相对增殖率、细胞Vimentin与PAK1 mRNA表达、侵袭细胞数均明显降低,细胞凋亡率、细胞miR-330-5p、E-cadherin mRNA表达均明显升高(均P<0.05);miR-330-5p inhibitor组细胞活力与相对增殖率、细胞Vimentin与PAK1 mRNA表达、侵袭细胞数均明显升高,细胞凋亡率、细胞miR-330-5p、E-cadherin mRNA表达均降低(P<0.05);共转染阴性对照组细胞各指标均无显著差异(P>0.05)。在PC-3细胞中,LncRNA SNHG3可靶向下调miR-330-5p表达。结论 下调LncRNA SNHG3可通过上调miR-330-5p表达而降低PAK1表达,进而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化,诱导其凋亡。

miR-195及miR-21-3p在老年重症急性胰腺炎中的表达及相关性

选取新疆医科大学第一附属医院2020年2月—2022年3月收治的老年重症急性胰腺炎患者102例作为研究对象,按照不同疾病严重程度分为轻度组(n=45)及重度组(n=57),同时选择健康受试者50例作为对照组,全部人员均接受了荧光定量法检测,对3组人员的miR-195及miR-21-3p表达水平进行测量;对比轻度组与重度组急性生理与慢性健康评估(APACHEⅡ)评分、RANSON系统评分;采用Spearman相关性探讨APACHEⅡ及RANSON分别与微小RNA-195(miR-195)及微小RNA-21-3p(miR-21-3p)表达水平相关性;将老年重症急性胰腺炎患者按照不同预后分为死亡组(n=21)及生存组(n=36),采用ROC曲线分析miR-195及miR-21-3p对老年重症急性胰腺炎的预测价值。结果显示,轻度组与重度组的miR-195及miR-21-3p表达水平均明显高于对照组,重度组的miR-195及miR-21-3表达水平均明显高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度组与轻度组相比,APACHEⅡ评分及RANSON评分均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。采用Spearman相关性分析,APACHEⅡ及RANSON评分分别与miR-195及miR-21-3p表达水平均呈现出了明显的正相关性(P<0.05)。死亡组与生存组相比miR-195及miR-21-3p表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析可见,miR-195及miR-21-3p分别用于预测重度急性胰腺炎患者曲线下面积分别为0.932、0.901。miR-195及miR-21-3p在老年重症急性胰腺炎患者中呈现出了异常升高的表达水平,与疾病严重程度呈现出了正相关性;miR-195及miR-21-3p在预测老年重症急性胰腺炎不良预后上具有一定的应用价值。

miRNA-21-3p对小鼠肝细胞系BNL CL.2体积和增殖的影响

目的观察miRNA-21-3p对小鼠肝细胞系(BNL CL.2)体积和增殖的影响。方法小鼠肝细胞系BNL CL.2转染miRNA-21-3p模拟物和抑制物。DiO染膜法和CCK-8法测定miRNA-21-3p对小鼠肝细胞系体积和增殖的影响;荧光定量PCR法检测miRNA-21-3p以及干预该miRNA后与细胞周期相关的基因的表达情况。结果在小鼠肝细胞系,转染miRNA-21-3p的模拟物可以显著增加miRNA-21-3p的表达,转染miRNA-21-3p抑制剂可以显著降低miRNA-21-3p的表达(P<0.01)。干预miRNA-21-3p不影响细胞的体积。增加miRNA-21-3p的表达显著促进细胞增殖(P<0.01),而抑制miRNA-21-3p的表达可以显著降低细胞增殖(P<0.01)。干预miRNA-21-3p,检测细胞周期相关的基因的表达,发现上调该miRNA可以下调Cyclin E(P<0.05),上调Ki67、p15、p16和p18(P<0.05),且对于CDKN3、Orc6、MCM4和p57没有影响(P>0.05)。下调该miRNA对于以上基因均没有影响(P>0.05)。结论 miRNA-21-3p对于小鼠肝细胞系体积没有影响,但是可以调控增殖,且它对于增殖的调控效应是部分通过影响周期相关的基因实现。

寻常型银屑病患者miR-21-3p及STAT3基因的表达研究

观察寻常型银屑病发生、发展这一动态过程,病人体内miR-21-3p、STAT3两种基因的表达状况,并分析其实际意义。方法:纳入15例寻常型银屑病患者作为研究组,同时选择15例正常皮肤人员组织作为参照组,病例选取于2015年至2019年间,其中各组人员中miR-21-3p、STAT3的表达量采用实时荧光定量PCR法检测,差别倍数用2-ΔΔCt值表示。结果:miR-21-3p在研究组患者皮损组织中的表达水平更高(t=5.511,P<0.01);且研究组患者皮损组织中STAT3的表达水平亦更高,差异有统计学意义(t=6.368,P<0.01)。结论:miR-21-3p及STAT3基因在寻常型银屑病患者皮肤组织中的表达异常,且均呈现高表达,其可能参与寻常型银屑病的发病过程,且呈现正相关的关系。