甘露寡糖上调PIgR增强肉鸡肠道免疫屏障

为了探究甘露寡糖对肉鸡肠道屏障的影响,试验选用1日龄健康白羽肉仔鸡540只,肉鸡饲养至29日龄,按体重相近,公母各半的原则随机分为3组:模型对照组、甘露寡糖保健组和乳酸环丙沙星保健组,每组6个重复,每个重复30只,试验期为10 d。肉鸡30日龄时,模型对照组、甘露寡糖保健组、乳酸环丙沙星保健组肉鸡采用胸肌注射8.37×10^(9) CFU/mL的大肠杆菌菌液0.2 mL进行攻毒,之后分别给予饮用水、0.05 g/L甘露寡糖溶液和60 mg/L乳酸环丙沙星自由饮用,分别连用10 d。试验结束后对肉鸡称重,采集血液测定血清生化指标,采取小肠各段测定器官指数,通过RT-qPCR检测肉鸡肠道屏障关键基因表达。结果表明,模型对照组、甘露寡糖保健组和乳酸环丙沙星保健各组间各器官重、器官指数均无显著差异(P>0.05)。与模型对照组和乳酸环丙沙星保健组相比,甘露寡糖保健组肉鸡血清γ-谷氨酰转肽酶(γ-GGT)含量显著升高(P<0.05)。与模型对照组相比,甘露寡糖保健组肉鸡十二指肠多聚免疫球蛋白受体(PIgR)表达量显著升高(P<0.05);与乳酸环丙沙星保健组相比,甘露寡糖保健组肉鸡空肠PIgR表达量有升高的趋势(P=0.077)。综上所述,在饮水中添加甘露寡糖增加了血清γ-GGT,上调肉鸡十二指肠、空肠免疫屏障PIgR表达,增强肉鸡肠道免疫屏障,维护肠道健康,从而提高机体免疫能力,并相比乳酸环丙沙星效果更为显著。

猪PIGR基因多态性分析

多聚免疫球蛋白受体(PIGR)是免疫球蛋白超家族的一员,在机体免疫过程中发挥重要作用。本试验以40个晋汾白猪、40个新山西黑猪、30个杜洛克×晋汾白猪、23个大白×晋汾白猪的猪耳基因组DNA为实验对象,采用PCR-SSCP技术对PIGR基因多态性位点差异性进行分析。结果显示,PIGR基因在晋汾白猪、新山西黑猪、杜洛克×晋汾白猪中有2种基因型:AA、AG,优势等位基因均为A,在大白×晋汾白猪中有一种基因型:AA。应用SAS8.1进行基因型分布差异分析,显示PIGR基因多态位点在晋汾白猪、新山西黑猪、杜洛克×晋汾白猪、大白×晋汾白猪的基因型分布差异极显著(P=0.0070,P<0.01)。本试验为发现减轻仔猪腹泻的优势基因提供理论基础。

小鼠免疫刺激后乳腺pIgR mRNA转录及乳特异性IgA含量的变化

为了探讨免疫刺激后昆明小白鼠乳腺pIgR基因mRNA转录和特异性IgA含量变化。选择48只健康受孕昆明小白鼠,分为A、B、C、D组,分别于分娩后第4天注射灭菌生理盐水、Lipase+灭菌生理盐水、空ISCOM和Lipase+LTB+ISCOM,每组注射12只,并于分娩后第8天和12天采集小鼠乳样、血样和乳腺组织,用间接ELISA法测定乳和血浆中的特异性IgA含量,用Real Time-PCR检测小鼠乳腺中pIgR基因的相对转录水平。结果表明,免疫刺激对小鼠血浆中特异性IgA的含量无显著性影响(P>0.05),但是免疫B组和D组中小鼠分娩后12 d的乳中特异性IgA含量显著高于8 d乳中的特异性IgA含量(P<0.05)。RealTime-PCR相对定量也表明,免疫B组和D组中小鼠分娩后12 d的乳腺pIgR基因转录水平显著高于8 d乳腺pIgR基因转录水平(P<0.05)。免疫刺激后小鼠乳腺pIgR基因转录水平的提高能增加乳中特异性IgA的含量。

多聚免疫球蛋白受体(pIgR)基因多态性及其与仔猪腹泻关系

采用PCR-SSCP结合测序方法,在民猪、长白猪两群体中检测p Ig R基因外显子1多态性,研究母猪基因多态性与仔猪腹泻关系。结果表明,p Ig R基因外显子1存在两个错义突变,第373位C→T导致丙氨酸→缬氨酸变异,第394位A→G导致天冬氨酸→丝氨酸变异。民猪群体有AA、AB和BB三种基因型,长白猪群体有AA和AB两种基因型,两群体基因型分布差异极显著(P<0.01)。民猪群体,不同基因型母猪仔猪腹泻指数和腹泻致死率均存在显著差异(P<0.05),但长白猪群体,仅腹泻指数表现显著差异(P<0.05)。

奶牛pIgR基因5′侧翼区SNP检测及其与IgA和IgM含量的相关性研究

本试验研究了pIgR基因5′侧翼区的多态性及其对IgA和IgM含量的影响。从NCBI上的Map Viewer数据库下载牛pIgR基因的5′侧翼区的序列(NW_174143),长度为3.2 kb,设计4对引物进行PCR扩增,通过对25头奶牛的PCR产物直接测序发现并确定SNP位点,并用SNP Stream标签微列阵基因分型系统对189头牛进行基因分型,将其与牛奶和血液中的IgA和IgM的含量进行关联分析。结果表明,pIgR基因在-3128、-3072、-2834、-2348和-515位发现了5个SNP位点,其中SNP1和SNP2为A/G突变,SNP3、SNP4和SNP5为T/C突变。方差分析结果表明,SNP1对牛奶IgM和血液IgA含量有显着的影响(P<0.05),SNP3和SNP5对血液IgM含量有显着影响(P<0.05),其他SNP位点与单倍型组合对乳及血液中IgA和IgM的含量均没有显著影响(P<0.05);多重比较分析表明,SNP1位点的基因型AB个体与BB个体的牛奶IgM和血液IgA含量的最小二乘均数差异显著(P<0.05),SNP3和SNP5的不同基因型对血液IgM含量的最小二乘均数分别达到了显著水平(P<0.05)。因此得出,牛pIgR基因5′侧翼区的多态性影响牛奶和血液中的IgA和IgM的含量,这为进一步研究牛奶中IgA和IgM分泌转运机理提供了理论依据。

臭灵丹调控甲流病毒H3N2感染后多聚免疫球蛋白pIgR与炎症反应的体外实验研究

目的:探讨臭灵丹对甲型流感病毒H3N2感染黏膜免疫功能(多聚免疫球蛋白pIgR)及炎症反应的影响。方法:采用CCK-8法检测并选择臭灵丹对细胞的最大无毒浓度进行后续实验研究。采用CCK-8法检测预防模式、治疗模式、共同作用模式下臭灵丹抗病毒药效;16-HBE细胞按正常对照组、臭灵丹对照组、模型组、奥司他韦组及臭灵丹高、低浓度组。除正常对照组及臭灵丹对照组外,其余各组感染流感病毒H3N2后,应用CPE法检测病毒滴度,qPCR法检测细胞中IL-6、IP-10、MCP-1 mRNA表达,Western Blot检测pIgR、NF-κB p65、p-NF-κB p65、TLR1蛋白表达。结果:预防模式下,臭灵丹抗病毒药效选择指数高于其他模式。治疗模式下,与模型组比较,臭灵丹高浓度组细胞上清液病毒滴度显著降低,pIgR蛋白表达显著上调,臭灵丹各组均能显著降低IL-6、IP-10、MCP-1 mRNA及p-NF-κB p65、TLR1蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:在细胞实验中,预防模式下臭灵丹抗病毒药效最佳。臭灵丹可上调pIgR,能抑制甲流H3N2病毒复制且在病毒感染细胞中发挥更显著的pIgR上调作用,同时一定程度抑制病毒诱发宿主NF-κB通路及Toll样受体的激活及相应炎症因子产生;pIgR调控可作为“辛味”中药对流感早期防治机制研究的新切入点。

多聚免疫球蛋白受体(pIgR/SC)在肺癌组织的表达及其临床意义

背景与目的:探讨多聚免疫球蛋白受体(polymeric immunoglobulin receptor/secretory component,pIgR/SC)在肺癌组织中的表达情况及其临床意义。材料与方法:采用大样本石蜡包埋组织(包含344例肺鳞癌、93例肺腺癌、47例小细胞肺癌以及30例同组患者的正常肺组织)构建的组织微阵列,进行免疫组织化学(SP法)染色,分析pIgR/SC蛋白表达情况及其与肺癌临床分期和病理分级间的关系。结果:pIgR/SC蛋白在肿瘤组织(尤其是非小细胞肺癌)中的表达水平(54.1%)显著高于正常对照组织(6.7%),其差异具有统计学意义(P<0.001);在肺癌组织不同病理类型之间的差异具有统计学意义(P<0.001),其表达的阳性率从高到低依次为:鳞癌66.3%>腺癌34.4%>小细胞肺癌4.3%。而pIgR/SC蛋白表达水平在肺癌的临床分期和组织分级间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:pIgR/SC蛋白的异常表达反应了肺癌细胞组织学来源的差异,其过表达可能出现在肺癌(尤其是鳞癌)发生发展的早期阶段。

TNF-α对肠上皮细胞PIgR、NF-κB亚单位表达影响

目的:研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对Caco-2细胞表达多聚免疫球蛋白受体(pIgR)和核因子-κB(NF-κB)亚单位RelA/RelB的影响。方法:采用Real-time PCR方法检测肠上皮细胞表达pIgR、RelA和RelB的变化。结果:与无TNF-α刺激比较,用不同浓度TNF-α刺激后pIgR、RelA和RelB基因的表达明显增加(P<0.01)。结论:TNF-α促进肠上皮细胞表达pIgR、NF-κB亚单位基因表达,TNF-α通过NF-κB通路激活pIgR基因的转录。

半滑舌鳎多聚免疫球蛋白受体(pIgR)基因的克隆和表达分析

本研究根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)基因组数据库中预测的多聚免疫球蛋白受体(Polymeric immunoglobulin receptor, pIgR)序列,通过PCR和RACE技术获得了半滑舌鳎pIgR基因cDNA,全长为1419 bp,开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,5′UTR区域为109 bp,3′UTR区域为290bp。保守结构域分析显示,半滑舌鳎pIgR蛋白包含1个信号肽,2个免疫球蛋白功能域(Ig-like domain, ILD)和1个跨膜结构域。经蛋白序列同源比对和系统进化树分析,发现半滑舌鳎pIgR与大菱鲆(Scophthalmus maximus)和牙鲆(Paralichthy solivaceus)的pIgR亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析显示,pIgR基因在健康半滑舌鳎的不同组织中均有表达,在鳃中表达较高,在肌肉中表达最低。经哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)病原感染刺激后,pIgR基因在半滑舌鳎的5个组织(肝脏、脾脏、肾脏、肠和鳃)中均呈先上升后下降的趋势,其中,在脾脏和鳃中48 h达到最高值,在肝脏、肾脏和肠中72 h达到峰值。与内脏组织不同的是,pIgR基因在皮肤中呈一直上升的趋势。上述结果表明,pIgR基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌的免疫应答中发挥重要作用。

SE感染对雏鸡空回肠组织中TLR4信号转导通路及pIgR的影响

为了研究肠炎沙门菌(SE)对TLR4信号通路调节雏鸡空肠和回肠组织中多聚免疫球蛋白受体(pIgR)的影响,本试验以7日龄海兰褐雏鸡的空肠和回肠组织为主要研究对象,通过口服SE的方式感染雏鸡,于感染后的1,3,7和14d,检测雏鸡的空肠和回肠组织中TLR4信号通路下游因子MyD88、TRAF6、NF-B和pIgR mRNA表达。结果表明:雏鸡感染SE后,TLR4信号通路被激活,且空肠、回肠组织中pIgR mRNA的表达量升高(P<0.01),同时上调空肠和回肠组织中pIgR的蛋白水平。证实SE能够激活空肠和回肠黏膜细胞表面的TLR4信号通路并上调pIgR的表达,进而增强雏鸡的肠黏膜免疫。

鱼类多聚免疫球蛋白受体(pIgR)研究进展

鱼类皮肤、鳃、消化道等黏膜相关淋巴组织及其表面的黏液是鱼类抵御外界病原入侵的第一道防线,而其局部的特异性免疫应答对病原体的抵御更加重要。黏膜免疫系统以分泌型抗体(SIgs)为主要的防御因子,多聚体IgM、IgT等黏膜免疫球蛋白通过多聚免疫球蛋白受体(pIgR)介导的转胞吐作用被转运穿过黏膜上皮细胞,以SIgs形式分泌到黏膜表面,在鱼类黏膜免疫防御中发挥重要作用。硬骨鱼类pIgR研究在近年来成为日渐活跃的领域,本文综述了有关鱼类pIgR基因与结构、表达分布、功能及表达调节等方面的研究进展,有助于促进对pIgR在鱼类黏膜免疫中作用的理解。

清热解毒化浊片对内毒素性肝损伤大鼠肠道sIgA、pIgR的影响

目的:观察清热解毒化浊片对内毒素性肝损伤大鼠肠黏膜免疫球蛋白A(sIgA)、多聚免疫球蛋白合体(pIgR)的影响。方法:以高脂饮食加白酒灌胃法建立内毒素性肝损伤大鼠模型,将造模成功的18只大鼠随机分为模型组、治疗组、阳性对照组,并设正常组,每组各6只。药物干预4周后观察各组大鼠肝功能[丙氨酸氨基转移酶(AST)、天冬氨酸氨基转移酶(ALT)],sIgA、pIgR水平,以及肝脏组织病理。结果:与模型组比较,治疗组AST、ALT均下降(P<0.05),但较正常组高(P<0.05),sIgA、pIgR均升高(P<0.01或P<0.05),但较正常组低(P<0.01或P<0.05);与模型组相比,治疗组肝脏组织肝细胞脂肪变及炎性细胞浸润程度均有改善。结论:清热解毒化浊片能改善内毒素性肝损伤大鼠的肝功能,减轻其炎性细胞浸润及肝细胞脂肪变程度,作用机制与减少肠黏膜sIgA、pIgR的表达、保护肠黏膜免疫屏障有关。

三硬骨鱼类多聚免疫球蛋白受体(pIgR)结构与功能研究进展

多聚免疫球蛋白受体(Polymeric immunoglobulin receptor,pIgR)是介导分泌型免疫球蛋白(Ig)多聚体跨过上皮细胞转运的I型跨膜糖蛋白,已在多种高等脊椎动物中得到克隆。2007年以来,陆续在红鳍东方鲀、斑马鱼及鲤鱼等多种硬骨鱼中克隆得到pIgR基因,并对其进行了表达分析。硬骨鱼类pIgR包含2个免疫球蛋白样功能域,含有4个保守的半胱氨酸(Cys)残基,能很好地结合Ig多聚体,进而介导其向皮肤或肠等黏液中的转运。但目前对pIgR基因功能及作用机制仍了解较少。本文拟对硬骨鱼中pIgR基因分子结构、转胞吞作用、功能及表达模式差异做简要概述,以期为今后深入研究pIgR在黏膜免疫中的功能及转运机制提供指导。

丁酸钠对IPI-2I细胞中pIgR表达的影响

丁酸钠已被证实能够改善肠黏膜免疫功能,提高机体IgA分泌,但其机制尚不明确。本试验以猪回肠上皮细胞IPI-2I为细胞模型,利用2.0 mmol/L丁酸钠对IPI-2I细胞进行处理,通过荧光定量PCR、免疫蛋白印迹和信号通路阻断技术,观察丁酸钠对IPI-2I细胞pIgR表达的影响,并探讨其参与调控的信号通路。结果表明,2.0%mmol/L丁酸钠可通过激活IPI-2I细胞内GPR109A受体和ERK1/2信号通路进而增加pIgR的表达。

鱿鱼墨多糖改善小鼠肠粘膜免疫及作用机制的研究

目的探讨鱿鱼墨多糖对小鼠肠粘膜免疫的影响及其作用机制。方法将50只Balb/c小鼠随机分为5组:正常组、模型组、低、中、高鱿鱼墨多糖剂量组。采用环磷酰胺腹腔注射法制备免疫低下小鼠模型,并通过灌胃给予各剂量组小鼠鱿鱼墨多糖饲养28 d。检测胸腺指数/脾指数,取小鼠空肠段检测肠粘膜SIgA的含量,观察北太平洋鱿鱼墨多糖对肠道粘膜免疫的保护作用。采用酶联免疫反应和RT-PCR方法,检测了pIgR的蛋白质与mRNA表达量。结果与正常组相比,模型组小鼠胸腺指数、脾指数分别下降44.4%、19.4%,肠道SIgA的表达量下降40.9%,免疫组织化学染色也显示肠道IgA明显下降;与模型组相比,鱿鱼墨多糖可以改善免疫低下小鼠的机体免疫功能,并且呈剂量依赖性,胸腺指数在模型组水平上分别升高了53.5%、67.6%、61.8%,脾指数分别升高了12.7%、13.1%、15.6%。鱿鱼墨多糖还可以提高小鼠肠粘膜SIgA的分泌功能,相比于模型组小鼠,鱿鱼墨多糖组小鼠SIgA的分泌量分别升高了43.9%、63.6%、68.7%;免疫组织化学染色发现鱿鱼墨多糖组小鼠肠道固有层中IgA明显增加,且ELISA检测发现鱿鱼墨多糖高剂量组小鼠小肠pIgR的蛋白表达量明显增加。结论北太平洋鱿鱼墨多糖能够促进小鼠肠粘膜SIgA的分泌,并呈剂量依赖关系,作用机制可能与其促进浆细胞分泌IgA以及促进上皮细胞分泌pIgR有关。

大菱鲆多聚免疫球蛋白受体基因的克隆及表达分析

鱼类多聚免疫球蛋白受体(polymeric immunoglobulin receptor,pIgR)是黏膜免疫系统的关键因子,能够介导多聚免疫球蛋白向黏液中的转运和分泌。本研究利用同源克隆和cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification ofcDNA ends,RACE),首次得到了大菱鲆(Scophthalmus maximus)pIgR完整的cDNA序列,全长1 584 bp,该序列包含一个1 005 bp的开放阅读框及5’和3’UTR,编码334个氨基酸。同源性比较发现,大菱鲆pIgR氨基酸序列与牙鲆(Paralichthys olivaceus)、斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)鲀、红鳍东方(Takifugu rubripes)的序列相似性分别是74%、74%和59%,表现出较高的保守性。多序列比对显示,硬骨鱼pIgR包含两个ILD(Ig-like domain),分别对应哺乳类的ILD1和ILD5区域。系统进化树分析表明,大菱鲆pIgR和牙鲆的聚为一支。半定量RT-PCR显示,pIgR在健康大菱鲆各组织中均有表达,但表达水平不同,其中在黏膜相关淋巴组织中表达最强。经灭活的鳗弧菌菌液浸泡处理后,实时荧光定量PCR结果显示,大菱鲆各组织中pIgR的相对表达量在72 h内均呈现先增加后减少的趋势,在48 h内均有一个最高值出现,且黏膜相关淋巴组织中峰值出现较早,说明pIgR在硬骨鱼类黏膜免疫中发挥了重要作用。

动物多聚免疫球蛋白受体研究概况

多聚免疫球蛋白受体(polymeric immunoglobulin receptor,pIgR)是主要组织相容性复合物(MHC)家族中的重要成员,是分泌性免疫系统(SIS)的重要组成成分,在IgA/IgM的转运和黏膜免疫中发挥着重要的作用。作者结合近年来的研究综述了pIgR的分子结构、生物学功能和研究概况。

多聚免疫球蛋白受体基因的多态性与鼻咽癌易感性的关系

背景和目的:多聚免疫球蛋白受体(polymericimmunoglobulinreceptor,pIgR)基因在机体免疫应答过程中发挥重要作用,并且与EB病毒(Epstein鄄Barrvirus,EBV)的感染途径密切相关,因而是研究鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)遗传易感性的理想候选基因。本研究旨在探讨pIgR基因与NPC遗传易感性之间的关系。方法:针对预选的4个单核苷酸多态性位点(singlenucleotidepolymorphisms,SNPs),通过PCR产物直接测序,对广东地区的528例NPC患者及408例健康人血标本DNA进行基因分型,然后采用病例鄄对照的研究方法分析等位基因频率之间的差异。结果:4个SNPs总体的基因频率分布在病例鄄对照之间无显著性差异(P>0.05);按45岁年龄分组分析,在小于等于45岁年龄组,多态性位点C8880T(Gly199同义突变)的次要等位基因T的频率在NPC患者中为7%,在健康人中为4%,病例与对照之间具有显著性差异(P<0.05),OR值(1.84)也提示携带次要等位基因T的个体患病风险增加。结论:pIgR基因外显子区域多态性位点C8880T与NPC的易感性相关,pIgR可能在NPC的发生发展中起一定作用。

鸡plgR多克隆抗体的制备及初步鉴定

根据GenBank中鸡pIgR基因序列和蛋白序列,设计引物,利用PCR技术扩增胞外配体结合区片段,构建原核重组表达质粒pET-32a(+)/pIgR,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG的诱导表达融合蛋白,通过镍离子螯合柱纯化后免疫新西兰大白兔,获得兔抗鸡pIgR多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验(ELISA法)和Western Blot法检测抗体的效价和特异性。结果显示,成功制备特异性的鸡pIgR抗体,为研究鸡pIgR的功能提供有力依据。

肺泡灌洗液中多聚免疫球蛋白受体分泌片段测定的临床意义

背景与目的:检测肺癌患者支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中多聚免疫球蛋白受体分泌片段(polymeric immunoglobulin receptor/secretory component,pIgR/SC)的蛋白水平,并探讨其临床意义。材料与方法:采用酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定52例肺癌患者患侧肺及其中18例患者配对健侧肺BALF中pIgR/SC的蛋白水平。结果:肺癌患者患侧BALF中pIgR/SC蛋白水平显著高于健侧对照组(P=0.009);肺腺癌患者BALF中pIgR/SC蛋白水平显著高于肺鳞癌患者(P=0.014);而在肺鳞癌患者组,手术时发现淋巴结转移的患者BALF中pIgR/SC蛋白水平显著高于手术时未发现淋巴结转移患者(P=0.012)。结论:BALF中pIgR/SC蛋白水平在肺癌患者患侧较健侧显著升高,肺腺癌患者BALF中pIgR/SC蛋白水平显著高于肺鳞癌患者,BALF中pIgR/SC蛋白水平与肺鳞癌淋巴结转移密切相关。