参榆洗液对痔术后大鼠痛觉敏化及cAMP/PKA信号通路和TRPV1蛋白表达的影响

目的探讨参榆洗液对痔术后大鼠痛觉敏化及环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)信号通路、香草酸瞬时受体亚型1(TRPV1)蛋白表达的影响。方法取40只雄性SD大鼠,随机选择其中8只作为空白组,其余大鼠采用冰醋酸建立痔术后创面模型。将造模成功大鼠随机分为模型组及参榆洗液低、中、高剂量组,每组8只。自成功造模后的第1天开始,模型组给予高压灭菌水局部熏洗,参榆洗液低、中、高剂量组分别予以参榆洗液0.4 g生药/mL、0.8 g生药/mL、1.6 g生药/mL局部熏洗,均2次/d,每次15 min,2次治疗间隔12 h,连续7 d。记录大鼠第1,4,7天换药刺激后3 min内首次舔舐肛周创面潜伏时间、扭体反应次数以及舔舐肛周创面总时间,观察造模后和干预3,5,7 d后创面情况并记录创面愈合率,HE染色观察干预7 d后创面组织病理学形态,Western blot法检测干预7 d后创面组织中cAMP、PKA蛋白和背根神经节中TRPV1、p-PKA蛋白表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠首次舔舐肛周创面潜伏时间明显缩短(P<0.05),扭体反应次数明显增加(P<0.05),舔舐肛周创面总时间明显延长(P<0.05);创面组织中有大量中性粒细胞与淋巴细胞浸润,组织水肿明显;创面组织中cAMP、PKA蛋白相对表达量及背根神经节中TRPV1、p-PKA蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与模型组比较,参榆洗液中、高剂量组大鼠首次舔舐肛周创面潜伏时间明显延长(P均<0.05),扭体反应次数明显减少(P均<0.05),舔舐肛周创面总时间明显缩短(P均<0.05);参榆洗液各组干预5,7 d后创面愈合率更高(P均<0.05);参榆洗液各组大鼠创面组织中中性粒细胞、淋巴细胞浸润减少,成纤维细胞、新生血管增多;参榆洗液各组创面组织中cAMP、PKA蛋白相对表达量及背根神经节中TRPV1、p-PKA蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),且呈剂量依赖性下降(P均<0.05)。结论参榆洗液可呈剂量依赖性改善痔术后大鼠痛觉敏化,促进创面愈合,机制可能与下调cAMP/PKA信号通路相关蛋白及TRPV1蛋白表达有关。

优化新生脉散方调控β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的 基于β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路探讨优化新生脉散方对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组10只和手术组40只,采用左冠状动脉前降支结扎法建立心力衰竭大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、卡托普利组和中药低、高剂量组,每组8只,给药组分别予相应药物灌胃4周。超声心动图测定大鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS),测定心、肺质量并计算心、肺脏器系数,组织病理学观察心肌纤维化程度,ELISA测定血清N端脑利钠肽前体(NT-ProBNP)及心肌组织环磷酸腺苷(cAMP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)含量,免疫组化检测心肌组织β1肾上腺素受体(β1-AR)、cAMP阳性表达,Western blot检测心肌组织β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS明显降低(P<0.01),心、肺脏器系数明显升高(P<0.01);心肌细胞数目减少、胶原容积分数升高、Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比增加(P<0.01),血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量明显升高,心肌组织cAMP含量明显降低(P<0.01),心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达明显降低(P<0.01),β1-AR、腺苷酸环化酶(AC)1、cAMP、p-蛋白激酶A(PKA)、p-环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达明显降低,p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,给药组不同程度增加大鼠LVEF、LVFS,降低心、肺脏器系数;增加心肌细胞数目、减少胶原容积分数和Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比,下调血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量,上调cAMP含量,增加心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达,上调β1-AR、AC1、cAMP、p-PKA、p-CREB蛋白表达,抑制p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α-SMA蛋白表达,其中中药高剂量组和卡托普利组作用更明显(P<0.01,P<0.05)。结论 优化新生脉散方能减轻心力衰竭大鼠心肌纤维化程度,改善心肌肥厚和重构,增加左心室收缩力,其机制可能与激活β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路有关。

PGE_(2)通过EP4/PKA信号通路调控滑膜细胞OAT1的表达及CP-25的作用

目的明确前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE_(2))对滑膜细胞有机阴离子转运体1(organic anion transporter 1,OAT1)膜表达的调控机制及芍药苷-6'-O-苯磺酸酯(CP-25)的作用。方法免疫荧光法检测不同浓度CP-25对PGE_(2)处理后滑膜细胞OAT1和前列腺素E受体4(prostaglandin E receptor 4,EP4)表达的影响;使用EP4激动剂(TCS2510)与拮抗剂(GW627368X),探究EP4在OAT1调节中的作用;使用CP-25和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂H-89,探究CP-25和PKA对滑膜细胞OAT1表达的影响。结果PGE_(2)在0~10 min内明显下调EP4与OAT1的膜表达,20~60 min后明显上调(P<0.05);CP-25明显上调PGE_(2)处理后细胞膜OAT1和EP4的表达(P<0.05);EP4激动剂TCS2510明显上调细胞膜OAT1的表达(P<0.01);CP-25上调PGE_(2)处理的细胞中OAT1的表达,GW627368X和H-89均能下调PGE_(2)和CP-25处理的滑膜细胞中OAT1的表达(P<0.01)。结论PGE_(2)介导的EP4/PKA信号通路可以调控OAT1在滑膜细胞膜上的表达,CP-25可以通过活化EP4/PKA信号通路明显上调滑膜细胞中OAT1的膜表达。

拓扑指数^mG及对无机氢化物pKa1值的预测

受Randic分子连接性拓扑指数mX的启发,构建了一种新的分子连接性拓扑指数mG.mG的0,1阶指数0G,1G与P区无机氢化物的pKa1值关联,拟合成2个线性方程,其相关系数与相关指数分别为0 9958和0 9959,拓扑指数的结构选择性满足惟一性表征.

拓扑指数^mN与无机氢化物pKa_1的关系

受Randic分子连接性拓扑指数的启发,构建了电负性拓扑指数mN。用其0,1阶指数0N和1N,与P区无机氢化物的pKa1值关联,拟合成2个回归方程,其相关系数与相关指数分别为0.9954和0.9954。结构选择性达到惟一性表征。预测取得了较好的结果。

键能/键长指数^mZ及对无机氢化物pKa_1值的预测

受Randic分子连接性拓扑指数mX的启发 ,本文构建了一种新的分子连接性拓扑指数mZ。用mZ的 0 ,1阶指数0 Z ,0 Z和 1Z ,0 Z和杨频的 ρ值分别与 p区无机氢化物的 pKa1值关联 ,拟合成 3个线性方程 ,其相关系数与相关指数分别为 0 .9938,0 .9944和 0 .9948,拓扑指数的结构选择性满足唯一性表征。预测取得了较好的结果。

无机含氧酸酸性pKa_(1)的分子拓朴研究

基于中心原子的价电子数,最高主量子数,中心原子直接键连的氢原子数和非羟基氧原子数,建立了一种分子拓朴指数y.它与27种无机含氧酸酸pKa(1)的线性方程为:pKa(1)=12.7853-1.245y.结果表明,y具有良好的结构选择性和性质相关性,可用于预测其它无机含氧酸的酸性pKa(1)值.

拓扑指数^mB与无机氢化物pKa1的关系

受 Randic分子连接性拓扑指数的启发 ,构建了拓扑指数 m B。用其 1阶 (1 B)指数 ,1阶指数和元素电负性差的平方 (x A- x H) 2 ,与 13种 p区无机氢化物的 p Ka1 值关联 ,拟合成 2个回归方程 ,其相关系数与相关指数分别为 0 .9934和0 .995 6。结构选择性达到唯一性表征。预测取得了较好的结果。

电负性指数^mD及对无机氢化物pKa1值的预测

受Randic分子连接性拓扑指数mX的启发,构建了一种新的分子连接性拓扑指数mD.用mD的0,1阶指数0D,1D与P区无机氢化物的pKa1值关联,拟合成2个线性方程,其相关系数与相关指数分别为0.9953和0.9955,拓扑指数的结构选择性满足唯一性表征.预测取得了较好的结果.

复方中药白龙对G_1期人胃癌细胞中抑癌基因的影响及与PKA信号通路的相关性

目的 :探讨复方中药白龙 (简称白龙 )对人胃癌BGC82 3G1期细胞周期蛋白激酶抑制因子(CKI) p16INK4a、p2 1以及Rb、c myc等基因转录的影响和cAMP PKA信号通路的调节关系。 方法 :通过实验室常规分子生物学手段 (细胞同步化、分子杂交———Northern杂交、Western杂交等 )检测相关基因的表达变化。结果 :白龙对G1期细胞p16INK4a表达有强烈促进作用 ,mRNA和蛋白水平均显著升高 ;处理细胞的同时加入PKA抑制剂阻断该信号通路后 ,白龙作用丧失 ,p16INK4a mRNA和蛋白水平明显下降 ;白龙还可以促进抑癌基因Rb、p2 1的mRNA表达和抑制癌基因c mycmRNA的表达 ;同样在白龙作用的同时阻断该信号通路 ,则白龙的上述作用随之丧失。结论 :白龙可以通过影响BGC82 3G1期细胞中众多抑癌基因 (包括p16INK4a、p2 1、Rb)和癌基因 (包括c myc)的转录发挥其抑瘤生理效应 ,而这种变化发生的机理是与cAMP PKA信号通路的调节机制密切相关的。

价轨道能量差连接性指数m^F与无机氢化物pKa_1的关系

该文运用徐光宪院士的 E_i=n_i+0.4L 公式,对 Randic 分子连接性拓扑指数 ~mX 的核心概念“点价”δ_i进行改造,构建了一种新的价轨道能量差连接性指数~mF,用其0,1阶指数~0F、~1F 与 p 区无机氢化物的 pKa_1,值关联,拟合成2个线性方程。其相关系数与相关指数分别为0.9934与0.9940,拓扑指数的结构选择性满足唯一性表征,预测取得了较好的结果。

PKA-CREB通路参与电针对退变椎间盘AQP1、3基因表达的影响

目的：研究电针夹脊穴对兔退变椎间盘组织中磷酸化环腺苷酸反应序列结合蛋白（p CREB）表达的影响,探讨PKA-CREB通路参与电针调控终板软骨细胞水通道蛋白1和3（AQP1、3）基因表达的作用可能机制。方法：50只健康的骨骼发育成熟的雄性新西兰大白兔,随机分为正常组、假模型组、模型组、模型＋电针组、模型＋电针＋H89组,每组各10只。采用克氏针横穿椎体后椎体间加压法复制椎间盘退变模型。电针组针刺L4、L5夹脊穴28 d。正常组和假模型组在到达造模周期后、余下3组均在造模成功后的第1天和第28天,分别各取5只行L4-5椎间盘MRI检查,然后取椎间盘组织,供酶联免疫吸附剂测定（ELISA）、Western Blot、Real-time PCR检测。结果：MRI（T2加权）平扫提示电针治疗后的退变椎间盘信号较模型组增强;造模成功后,c AMP依赖性蛋白激酶A（PKA）、p CREB蛋白及AQP1、3mRNA表达均降低（P〈0.05）;电针治疗干预后可上调PKA、p CREB蛋白及AQP1、3mRNA表达水平（P〈0.05）;H89能够起到抑制PKA的表达（P〈0.05）、翻转电针上调p CREB蛋白表达的作用（P〈0.05）,AQP1、3mRNA表达水平也随之下降（P〈0.05）。结论：电针夹脊穴通过上调PKA-CREB通路的表达水平,继而增加AQP1、3mRNA的转录,促进椎间盘AQP1、3蛋白的表达,延缓椎间盘退变。

腹水草对人胃上皮细胞GES-1的保护作用及其对PKA、CREB、AQP1的调控研究

[目的]研究腹水草(Veronicastrum axillare,V.axillare)含药血清对乙醇损伤的人胃上皮细胞(gastric epithelial cells-1,GES-1)的保护作用及其对环腺苷酸依赖性激酶(protein kinase A,PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)、水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)表达水平的调控作用。[方法]20只雄性SD大鼠随机分为5组(n=4),连续灌胃给药14d,制备正常组(生理盐水20 m L·kg-1)、雷尼替丁组(0.027g·kg-1)以及V.axillare低、中、高剂量组(0.7、1.4、2.8 g·kg-1)含药血清。MTT法检测体外培养的GES-1细胞的活性,研究V.axillare含药血清及PKA抑制剂H-89(25μmol·m L-1)预处理对5%乙醇诱导GES-1细胞活力的影响。荧光定量RT-PCR检测PKA、CREB及AQP1 m RNA的表达水平,Western blot检测AQP1蛋白表达水平。[结果]模型组和H-89组GES-1细胞活性低于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);乙醇造模处理显著上调PKA、CREB及下调AQP1的表达水平,差异有统计学意义(P<0.01);H-89处理显著抑制PKA和CREB m RNA表达水平(P<0.01);加入各剂量V.axillare含药血清不能显著改善H-89对PKA、CREB和AQP1 m RNA表达水平的抑制作用。V.axillare中、高剂量含药血清细胞活性高于模型组,PKA、CREB m RNA表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01),而V.axillare中、低剂量含药血清AQP1表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]V.axillare含药血清显著减轻乙醇对GES-1细胞的损伤,对GES-1细胞具有保护作用,其保护机制与下调PKA、CREB及上调AQP1的表达有关。

基于PKA/CREB/GLP-1信号通路探讨加味葛根芩连汤对糖尿病db/db小鼠胰腺损伤的影响

目的观察加味葛根芩连汤对2型糖尿病db/db小鼠胰腺损伤的影响,基于PKA/CREB/GLP-1信号通路探讨其治疗糖尿病胰腺损伤的作用机制。方法将50只db/db小鼠随机分为模型组、二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中、低剂量组,每组10只。另取10只m/m小鼠作为空白组。加味葛根芩连汤高、中、低剂量组分别予加味葛根芩连汤31.9、19.1、6.4 g/kg灌胃,二甲双胍组予二甲双胍0.2 g/kg灌胃,空白组和模型组予蒸馏水灌胃,连续12周。给药结束后检测小鼠空腹血糖(FBG),进行口服葡萄糖耐量试验,检测小鼠糖化血红蛋白(HbA1c)含量,TUNEL法检测胰腺组织细胞凋亡情况,RT-qPCR检测胰腺组织G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)、蛋白激酶A(PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、前蛋白转化酶1/3(PC1/3)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)mRNA表达,免疫组化法检测胰腺组织TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达,免疫荧光染色检测胰腺组织TGR5/GLP-1、神经源性分化因子1(NeuroD1)/GLP-1共表达。结果与空白组比较,模型组小鼠FBG、HbA1c含量显著升高(P<0.01),口服葡萄糖耐量显著降低;胰腺组织细胞凋亡率显著升高(P<0.01),TGR5、PKA、CREB、PC1/3、GLP-1 mRNA表达显著降低(P<0.01),TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达显著降低(P<0.01),TGR5/GLP-1、NeuroD1/GLP-1共表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中剂量组小鼠FBG、HbA1c含量显著降低(P<0.01,P<0.05),口服葡萄糖耐量升高(P<0.01);各给药组小鼠胰腺组织细胞凋亡率显著降低(P<0.01),二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中剂量组小鼠胰腺组织TGR5、PKA、CREB、PC1/3、GLP-1 mRNA表达显著升高(P<0.01),TGR5/GLP-1、NeuroD1/GLP-1共表达显著升高(P<0.01),二甲双胍组和加味葛根芩连汤高剂量组胰腺组织TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论加味葛根芩连汤可能通过激活TGR5调节PKA/CREB/GLP-1信号通路,恢复db/db小鼠胰岛功能,改善胰腺损伤。

袖状胃切除术通过GLP-1激活cAMP/PKA通路拮抗血管外周脂肪组织炎症

目的基于GLP-1激活环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)通路探讨袖状胃切除术拮抗血管外周脂肪组织炎症。方法选取SPF级六周龄雄性大鼠48只作为本次研究的对象,无差别分为空白组、袖状胃切除术组以及GLP-1受体激动剂组、GLP-1受体拮抗剂组Exendin(9-39),对四组小鼠血管外周脂肪组织的cAMP/PKA水平以及炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α水平进行测定。结果(1)cAMP/PKA水平比较:GLP-1受体激动剂进一步升高袖状胃切除术小鼠血管外周脂肪组织cAMP/PKA水平,其拮抗剂显著降低血管外周脂肪组织cAMP/PKA水平,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α水平:GLP-1受体激动剂显著降低血管袖状胃切除术小鼠外周脂肪组织炎症,其拮抗剂显著提高血管外周脂肪组织炎症水平,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论GLP-1受体激动剂与拮抗剂对袖状胃切除术大鼠血管外周脂肪组织炎症以及cAMP/PKA水平均具有较强的相关性,表明GLP-1可能通过激活cAMP/PKA通路参与袖状胃切除术拮抗血管外周脂肪组织炎症。

CRH通过CRHR1激活cAMP/PKA通路调节宫颈癌细胞的免疫逃逸和促进宫颈癌生长

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)及其受体(corticotropinreleasing hormone receptor 1,CRHR1)影响宫颈癌免疫逃逸和生长的途径。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和Western blot检测宫颈癌组织、宫颈癌细胞(HeLa细胞)和人宫颈永生化上皮细胞(H8细胞)中CRH、CRHR1、CTLA-4、IL-10和TGF-β1的表达量;用不同浓度CRH(0、1、10及20 nmol/L)作用细胞48 h或用10 nmol/L CRH作用细胞不同时间点后(12、24、36及48 h),通过CCK-8法检测各组细胞的增殖能力;CRH、CRH+CRHR1选择性阻断剂安塔拉明(CRH+Antalarmin)分别作用细胞后,RT-qPCR检测细胞CTLA-4的表达量,Western blot检测细胞中cAMP、PKA蛋白的磷酸化水平和Bax、Bcl-2、IL-10和TGF-β1表达量,CCK-8法测定细胞增殖能力;CRH、CRH+PKA通路抑制剂H-89(CRH+H-89)分别作用细胞后,RT-qPCR检测细胞CTLA-4的表达量,Western blot检测细胞中cAMP、PKA蛋白的磷酸化水平和IL-10、TGF-β1、Bax和Bcl-2表达量,CCK-8法测定细胞增殖能力。结果与癌旁正常组织和H8细胞相比,宫颈癌组织和HeLa细胞中的CRH及CRHR1表达量均显著升高(P<0.01);1、10及20 nmol/L CRH作用48 h后细胞增殖能力明显高于0 nmol/L CRH处理组(P<0.01);10 nmol/L CRH作用细胞24、36和48 h后细胞增殖能力明显高于CRH作用12 h组(P<0.01)。CRH通过CRHR1激活cAMP/PKA信号通路,促进细胞的增殖以及CTLA-4、IL-10、TGF-β1的表达。和Control组相比,CRH组细胞的CTLA-4、Bcl-2、IL-10和TGF-β1表达量升高,Bax表达量明显降低;和CRH组相比,CRH+H-89组细胞的CTLA-4、Bcl-2、IL-10和TGF-β1表达量降低,Bax表达量明显升高。结论CRH通过受体CRHR1促进宫颈癌的免疫逃逸和生长,其作用机制可能与激活cAMP/PKA通路有关。

GLP—1受体基因表达cAMP-PKA途径调控的研究

本文利用蛋白激酶A(PKA)的激活剂Forsolin对大白鼠胰岛素瘤细胞(RINm5F)上GLP一1受体的基因表达进行了研究。在forskolin的作用下,使类胰高血糖素肽I(GLP—1)受体的转水平明显下降,即GLP一1受体mRNA的量明显减少,出现了GLP一1受体基因表达的负调控,但forskoln可以使GLP—1受体的mRNA的稳定性增加结果表明,GLP—1受体的转录是通过cAMP—蛋白激酶A途径进行调控的,因此,影响此途径的物质对类胰高血糖素肽—1的生理功能以及在临床应用方面起着重要作用。

灰葡萄孢PKA编码基因在病菌生长发育和致病过程中的功能

为明确灰葡萄孢cAMP信号途径中蛋白激酶A的催化亚基基因pka1、pka2和调节亚基基因pkaR在病菌生长、发育和致病过程中的功能,本研究构建了灰葡萄孢pka1、pka2和pkaR基因的RNAi突变体,以野生型菌株BC22为对照,对pka1、pka2和pkaR基因的RNAi突变体的表型和致病力进行分析,发现pka1基因的RNAi突变体的生长速率明显减慢、菌丝细胞变短、分生孢子产量增加、致病力减弱,菌落颜色、形态以及穿透寄主组织的能力与野生型没有明显差别;pka2基因RNAi突变体的菌丝较野生型明显变细,分生孢子产量降低,生长速率、致病力和穿透寄主组织的能力与野生型没有明显差别;pkaR基因RNAi突变体的菌丝变细,生长速率减慢,分生孢子产量降低,致病力减弱,穿透寄主组织的能力与野生型没有明显差别。结果表明:灰葡萄孢pka1基因正调控病菌的生长、菌丝发育和致病力,负调控分生孢子的形成;pka2基因正调控病菌的菌丝发育和分生孢子的形成;pkaR基因正调控病菌的生长、菌丝发育、分生孢子的形成和病菌的致病力。

蛋白激酶A在转化生长因子-β_(1)刺激增生性瘢痕成纤维细胞增殖中的作用

目的 :探讨蛋白激酶 A在转化生长因子 - β1 (TGF-β1 )刺激增生性瘢痕和正常人皮肤成纤维细胞 (HS- FB和 NS-FB)增殖中的信号转导作用。 方法 :利用 32 P掺入底物法测定HS- FB和 NS- FB的 PKA活性 ;使用直接计数法和 MTT法测定 TGF-β1 和 c AMP、H7等刺激两种细胞后增殖能力的变化。 结果 :NS- FB被 TGF-β1 刺激后 PKA的活性短暂升高后很快恢复 (30 m in内 ,但 P>0 .0 5 ) ,HS- FB则在 30～ 6 0 min降低(P<0 .0 5 ) ,1h后恢复 ;HS- FB的 PKA活性比 NS- FB低 (但P >0 .0 5 )。 TGF-β1 能强烈刺激两种细胞增殖 (30 min后 P<0 .0 5 ) ,对 HS- FB的刺激作用更强 (刺激 6 0 m in后 P<0 .0 5 )。c AMP可抑制两种细胞增殖 (6 0 m in后 P<0 .0 5 ) ,H7有拟 TGF-β1 作用 (30 min后 P<0 .0 5 ) ,H7还可增强 TGF-β1 的刺激作用 (30～ 6 0 min后 P<0 .0 5 )。 结论 :TGF-β1 刺激后 PKA的活性在两种细胞有不同的变化 ,提示两种细胞的 c AMP/ PKA信号通道存在一定的差异 ;TGF-β1 刺激作用部分经 PKA活性变化介导 ,但活化 PKA通道可以逆转 TGF-β1 的作用。

EP2受体介导的前列腺素E_2影响胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1表达和侵袭的研究

目的 :探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)通过EP2受体影响人胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达及癌细胞的侵袭能力。方法:用PGE2、EP1～4四种受体激动剂(17-phenyltrinorProstaglandin E2、Butaprost、Sulprostone和Prostaglandin E1 Alcohol)、EP2受体抑制剂AH6809、腺苷酸环化酶(AC)抑制剂SQ22536和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89处理HuCCT1细胞,通过Western blot、划痕试验等方法检测ICAM-1的蛋白表达水平以及HuCCT1细胞侵袭能力的变化。结果:PGE2明显提高HuCCT1细胞ICAM-1蛋白的表达水平,5μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白表达水平与对照组相比上升了66.17%(P<0.05),并呈浓度依赖性和时间依赖性;5μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了43.29%(P<0.01)。10μmol/L EP1～4受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中EP2受体激动剂上升了257.88%(P<0.05),10μmol/L EP2受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了56.99%(P<0.01);10μmol/LEP2受体抑制剂AH6809处理后ICAM-1蛋白的表达水平与PGE2组相比下降了49.14%(P<0.05),细胞侵袭能力下降了52.06%(P<0.01)。25μmol/L AC抑制剂SQ22536、10μmol/L PKA抑制剂H89处理HuCCT1细胞后,ICAM-1蛋白的表达水平较EP2受体激动剂处理组分别下降了72.87%(P<0.05)和80.78%(P<0.05)。结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路上调HuCCT1细胞ICAM-1的表达,从而促进HuCCT1细胞的侵袭转移。