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S-腺苷甲硫氨酸合成酶在毕赤酵母中的分泌表达(英文)
被引量:
6
1
作者
王莲哲
张现青
+2 位作者
李洋
杨广笑
何光源
《Agricultural Science & Technology》
CAS
2009年第2期49-53,共5页
S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)是甲硫氨酸(Met)的活性形式。生物体内,SAM由S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)[EC2.5.1.6]催化L.甲硫氨酸(L.Met)和A11)反应而合成。酿酒酵母细胞中有2种SAM合成酶的同工酶,即SAMS1和SAMS2,分别由基...
S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)是甲硫氨酸(Met)的活性形式。生物体内,SAM由S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)[EC2.5.1.6]催化L.甲硫氨酸(L.Met)和A11)反应而合成。酿酒酵母细胞中有2种SAM合成酶的同工酶,即SAMS1和SAMS2,分别由基因saml和sam2编码,二者氨基酸序列的同源性高达92%。在过量L-Met存在下,saml的转录受到抑制;已有酶促法合成研究显示sam2编码的合成酶没有产物抑制现象。笔者将sam2基因连接于毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K,并通过同源重组整合到酵母染色体上,以实现SAM合成酶的分泌性表达,为开发和建立酶促法生产SAM工艺奠定基础。
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关键词
S-腺苷甲硫氨酸合成酶
毕赤酵母
分泌表达
SAM合成酶
分泌型表达载体
L-甲硫氨酸
酿酒酵母细胞
PPIC9K
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职称材料
毕赤酵母表达皮蝇素A蛋白
被引量:
4
2
作者
孙怡
徐梅倩
+1 位作者
高兴春
何国声
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期296-299,共4页
建立了用毕赤酵母表达系统表达皮蝇素A(Hypodermotin A,HA)的技术,并对表达条件进行了优化筛选。将皮蝇素A基因连接到质粒pPIC9k上,构建了重组转移质粒pPIC9k—HA。重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后,用组氨酸缺陷培养基和G...
建立了用毕赤酵母表达系统表达皮蝇素A(Hypodermotin A,HA)的技术,并对表达条件进行了优化筛选。将皮蝇素A基因连接到质粒pPIC9k上,构建了重组转移质粒pPIC9k—HA。重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选。重组酵母细胞在含0.5%甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白,培养3d后收取上清,用阴离子交换层析柱分离纯化。经SDS—PAGE检测,所表达的蛋白相对分子质量约为30000。Western—blotting表明,该蛋白能与兔抗HA血清特异性结合。明胶电泳检测显示,该蛋白具有酶活性。单因素改变表达条件的结果表明,甲醇浓度在0.5%~1%、溶氧量在70%以上、诱导2~3d的情况下表达产量最高,达1500mg/L左右。该研究结果对防治牛皮蝇蛆痛疫苗的深入研究及毕赤酵母在寄生虫领域的应用有一定价值。
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关键词
皮蝇素A
毕赤酵母GS115
表达
优化
质粒pPIC9k
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职称材料
α-2b干扰素重组质粒的建立及在毕赤酵母中的表达
被引量:
1
3
作者
丁鹏
方斌
+1 位作者
梁布锋
何光源
《生物技术》
CAS
CSCD
2007年第3期18-20,共3页
目的:采用基因工程手段构建基因工程菌表达α-2b干扰素。方法:根据毕赤酵母密码子嗜好性原理设计并合成α-2b干扰素基因序列,将其插入到毕赤酵母Pichia pastoris的分泌型表达质粒pPIC9K中,得到重组分泌表达质粒pPIC9K-IFNα-2b,并用电...
目的:采用基因工程手段构建基因工程菌表达α-2b干扰素。方法:根据毕赤酵母密码子嗜好性原理设计并合成α-2b干扰素基因序列,将其插入到毕赤酵母Pichia pastoris的分泌型表达质粒pPIC9K中,得到重组分泌表达质粒pPIC9K-IFNα-2b,并用电转化法转化P.pastoris GS115。筛选出整合型His+Muts菌株,进一步用G418筛选获得高拷贝转化子,经5d诱导表达后SDS-PAGE检测。结果:菌落PCR和序列测定结果显示重组表达质粒已成功构建,SDS-PAGE结果显示目的蛋白已成功表达。结论:在毕赤酵母中成功表达α-2b干扰素。
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关键词
Α-2B干扰素
毕赤酵母
PPIC9K
SDS-PAGE
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职称材料
重组免疫毒素IL3-PE38KDEL真核表达载体的构建
4
作者
白凤霞
娄世峰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期106-108,共3页
目的:构建大肠杆菌-毕赤酵母表达载体Ppic9k-IL3-Linker-PE38KDEL。方法:用PCR的方法扩增所需要的目的片段IL3及PE38KDEL,再通过酶切和连接的方法定向克隆到载体Ppic9k-Linker中,得到融合基因Ppic9k-IL3-Linker-PE38KDEL。重组载体经酶...
目的:构建大肠杆菌-毕赤酵母表达载体Ppic9k-IL3-Linker-PE38KDEL。方法:用PCR的方法扩增所需要的目的片段IL3及PE38KDEL,再通过酶切和连接的方法定向克隆到载体Ppic9k-Linker中,得到融合基因Ppic9k-IL3-Linker-PE38KDEL。重组载体经酶切,菌落PCR鉴定,DNA序列分析插入片段完全正确。结果:经限制性内切酶酶切鉴定,菌落PCR及DNA序列分析表明重组表达载体Ppic9k-IL3-Lin-ker-PE38KDEL构建成功。结论:成功地构建融合基因IL3-PE38KDEL的毕赤酵母表达载体,为后续的蛋白质的表达、纯化及功能研究奠定基础。
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关键词
融合基因
IL3
PE38KDEL
真核表达载体
PPIC9K
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职称材料
人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性检测
被引量:
4
5
作者
夏清风
侯英敏
+1 位作者
曹芳
金朝霞
《大连工业大学学报》
CAS
北大核心
2011年第5期346-349,共4页
将PCR扩增的人溶菌酶编码基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,双酶切和测序鉴定表明,重组载体构建正确。电转化毕赤酵母GS115菌株,通过G418筛选获得高拷贝重组菌株后,用甲醇诱导表达;通过SDS-PAGE检测证明上清中有目的蛋白,表达...
将PCR扩增的人溶菌酶编码基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,双酶切和测序鉴定表明,重组载体构建正确。电转化毕赤酵母GS115菌株,通过G418筛选获得高拷贝重组菌株后,用甲醇诱导表达;通过SDS-PAGE检测证明上清中有目的蛋白,表达产物与预期大小的人溶菌酶蛋白分子质量15ku一致,其表达量占分泌总蛋白的32%。体外抑菌实验证实重组人溶菌酶蛋白对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草杆菌均有明显的抑菌作用,表明在毕赤酵母中成功表达了重组人溶菌酶。
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关键词
人溶菌酶
毕赤酵母
PPIC9K
表达
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职称材料
题名
S-腺苷甲硫氨酸合成酶在毕赤酵母中的分泌表达(英文)
被引量:
6
1
作者
王莲哲
张现青
李洋
杨广笑
何光源
机构
河南城建学院生物工程系
湖北大学生命科学学院
华中科技大学中英HUST-RRes基因工程与基因组学联合实验室
出处
《Agricultural Science & Technology》
CAS
2009年第2期49-53,共5页
基金
国家“973”计划项目(2002CB111302)~~
文摘
S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)是甲硫氨酸(Met)的活性形式。生物体内,SAM由S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)[EC2.5.1.6]催化L.甲硫氨酸(L.Met)和A11)反应而合成。酿酒酵母细胞中有2种SAM合成酶的同工酶,即SAMS1和SAMS2,分别由基因saml和sam2编码,二者氨基酸序列的同源性高达92%。在过量L-Met存在下,saml的转录受到抑制;已有酶促法合成研究显示sam2编码的合成酶没有产物抑制现象。笔者将sam2基因连接于毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K,并通过同源重组整合到酵母染色体上,以实现SAM合成酶的分泌性表达,为开发和建立酶促法生产SAM工艺奠定基础。
关键词
S-腺苷甲硫氨酸合成酶
毕赤酵母
分泌表达
SAM合成酶
分泌型表达载体
L-甲硫氨酸
酿酒酵母细胞
PPIC9K
Keywords
SAM
Pichia pastoris
ppicgk
Secreted expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
毕赤酵母表达皮蝇素A蛋白
被引量:
4
2
作者
孙怡
徐梅倩
高兴春
何国声
机构
中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期296-299,共4页
基金
欧盟项目(ICA42000-30036)
文摘
建立了用毕赤酵母表达系统表达皮蝇素A(Hypodermotin A,HA)的技术,并对表达条件进行了优化筛选。将皮蝇素A基因连接到质粒pPIC9k上,构建了重组转移质粒pPIC9k—HA。重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选。重组酵母细胞在含0.5%甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白,培养3d后收取上清,用阴离子交换层析柱分离纯化。经SDS—PAGE检测,所表达的蛋白相对分子质量约为30000。Western—blotting表明,该蛋白能与兔抗HA血清特异性结合。明胶电泳检测显示,该蛋白具有酶活性。单因素改变表达条件的结果表明,甲醇浓度在0.5%~1%、溶氧量在70%以上、诱导2~3d的情况下表达产量最高,达1500mg/L左右。该研究结果对防治牛皮蝇蛆痛疫苗的深入研究及毕赤酵母在寄生虫领域的应用有一定价值。
关键词
皮蝇素A
毕赤酵母GS115
表达
优化
质粒pPIC9k
Keywords
hypodermin A
Pichia Pastoris GS115
expression
optimization
ppicgk
分类号
S852.7 [农业科学—基础兽医学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
α-2b干扰素重组质粒的建立及在毕赤酵母中的表达
被引量:
1
3
作者
丁鹏
方斌
梁布锋
何光源
机构
华中科技大学生命科学与技术学院中英联合实验室
中国科学院武汉病毒所苏中药业联合实验室
出处
《生物技术》
CAS
CSCD
2007年第3期18-20,共3页
基金
国家"973"项目(2002CB111302)
国家自然基金项目(30370807)资助
文摘
目的:采用基因工程手段构建基因工程菌表达α-2b干扰素。方法:根据毕赤酵母密码子嗜好性原理设计并合成α-2b干扰素基因序列,将其插入到毕赤酵母Pichia pastoris的分泌型表达质粒pPIC9K中,得到重组分泌表达质粒pPIC9K-IFNα-2b,并用电转化法转化P.pastoris GS115。筛选出整合型His+Muts菌株,进一步用G418筛选获得高拷贝转化子,经5d诱导表达后SDS-PAGE检测。结果:菌落PCR和序列测定结果显示重组表达质粒已成功构建,SDS-PAGE结果显示目的蛋白已成功表达。结论:在毕赤酵母中成功表达α-2b干扰素。
关键词
Α-2B干扰素
毕赤酵母
PPIC9K
SDS-PAGE
Keywords
Interferon α-2b
Pichia pastoris
ppicgk
SDS- PAGE
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
重组免疫毒素IL3-PE38KDEL真核表达载体的构建
4
作者
白凤霞
娄世峰
机构
重庆医科大学附属第二医院血液内科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期106-108,共3页
文摘
目的:构建大肠杆菌-毕赤酵母表达载体Ppic9k-IL3-Linker-PE38KDEL。方法:用PCR的方法扩增所需要的目的片段IL3及PE38KDEL,再通过酶切和连接的方法定向克隆到载体Ppic9k-Linker中,得到融合基因Ppic9k-IL3-Linker-PE38KDEL。重组载体经酶切,菌落PCR鉴定,DNA序列分析插入片段完全正确。结果:经限制性内切酶酶切鉴定,菌落PCR及DNA序列分析表明重组表达载体Ppic9k-IL3-Lin-ker-PE38KDEL构建成功。结论:成功地构建融合基因IL3-PE38KDEL的毕赤酵母表达载体,为后续的蛋白质的表达、纯化及功能研究奠定基础。
关键词
融合基因
IL3
PE38KDEL
真核表达载体
PPIC9K
Keywords
fusion gene
IL3
PE38KDEL
eukaryolic expression
ppicgk
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性检测
被引量:
4
5
作者
夏清风
侯英敏
曹芳
金朝霞
机构
大连工业大学生物工程学院
出处
《大连工业大学学报》
CAS
北大核心
2011年第5期346-349,共4页
基金
大连市优秀青年人才基金项目(2009J22DW036)
文摘
将PCR扩增的人溶菌酶编码基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,双酶切和测序鉴定表明,重组载体构建正确。电转化毕赤酵母GS115菌株,通过G418筛选获得高拷贝重组菌株后,用甲醇诱导表达;通过SDS-PAGE检测证明上清中有目的蛋白,表达产物与预期大小的人溶菌酶蛋白分子质量15ku一致,其表达量占分泌总蛋白的32%。体外抑菌实验证实重组人溶菌酶蛋白对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草杆菌均有明显的抑菌作用,表明在毕赤酵母中成功表达了重组人溶菌酶。
关键词
人溶菌酶
毕赤酵母
PPIC9K
表达
Keywords
human lysozyme
Pichia pastoris
ppicgk
expression
分类号
TQ127.2 [化学工程—无机化工]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
S-腺苷甲硫氨酸合成酶在毕赤酵母中的分泌表达(英文)
王莲哲
张现青
李洋
杨广笑
何光源
《Agricultural Science & Technology》
CAS
2009
6
下载PDF
职称材料
2
毕赤酵母表达皮蝇素A蛋白
孙怡
徐梅倩
高兴春
何国声
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
4
下载PDF
职称材料
3
α-2b干扰素重组质粒的建立及在毕赤酵母中的表达
丁鹏
方斌
梁布锋
何光源
《生物技术》
CAS
CSCD
2007
1
下载PDF
职称材料
4
重组免疫毒素IL3-PE38KDEL真核表达载体的构建
白凤霞
娄世峰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
下载PDF
职称材料
5
人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性检测
夏清风
侯英敏
曹芳
金朝霞
《大连工业大学学报》
CAS
北大核心
2011
4
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
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