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pRNA介导的RNA干扰抑制HBV表达和复制的研究 被引量:4
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作者 张正茂 田拥军 +3 位作者 杨燕 王宝菊 郭培宣 杨东亮 《中国病毒学》 CAS CSCD 2006年第6期599-603,共5页
为了研究由pRNA携带的siRNA(HBVsi18-42)所介导的RNAi过程能有效地抑制HBV的基因表达和病毒复制,我们利用细胞模型和高压注射小鼠模型评价HBVsi18-42对HBV复制和基因表达的抑制作用。通过Western印迹检测细胞内的HBsAg含量,用ELISA检测... 为了研究由pRNA携带的siRNA(HBVsi18-42)所介导的RNAi过程能有效地抑制HBV的基因表达和病毒复制,我们利用细胞模型和高压注射小鼠模型评价HBVsi18-42对HBV复制和基因表达的抑制作用。通过Western印迹检测细胞内的HBsAg含量,用ELISA检测细胞培养上清和小鼠血清中的HBsAg水平,采用Southern印迹检测HBV的复制中间体,通过免疫组织化学检测肝组织切片中HBcAg的表达情况。试验结果显示,HBVsi18-42能以剂量依赖的方式在293T细胞中抑制HBsAg的表达以及在HepG2细胞中下调病毒HBsAg和HBeAg的表达和病毒复制中间体的水平。在小鼠模型中,注射后的3d内HBVsi18-42使小鼠血清中HBsAg的水平分别下降了98.98%、77.07%和60.73%,免疫组织化学检测显示,在注射后的第3天小鼠肝组织内HBcAg阳性细胞数减少了79.1%。初步结果显示HBVsi18-42无论是在细胞或是在小鼠模型中都能下调HBV的复制和基因的表达。本研究为我们下一步实现由pRNA介导的靶向RNAi及基因治疗提供了理论和技术支持。 展开更多
关键词 RNA干扰 prna 乙型肝炎病毒
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pRNA的结构、功能及其研究近况 被引量:1
2
作者 周辉 卢向阳 +1 位作者 田云 黄成江 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1180-1184,共5页
在噬菌体phi29中,基因组DNA的包装需要由病毒基因组编码的pRNA参与,6个pRNA分子通过由pRNA分子间相互作用形成的六聚体来启动DNA转运马达,这个过程由ATP提供能量。RNA纳米技术将pRNA与siRNA、核酶、反义RNA等分子稳定结合,pRNA作为一种... 在噬菌体phi29中,基因组DNA的包装需要由病毒基因组编码的pRNA参与,6个pRNA分子通过由pRNA分子间相互作用形成的六聚体来启动DNA转运马达,这个过程由ATP提供能量。RNA纳米技术将pRNA与siRNA、核酶、反义RNA等分子稳定结合,pRNA作为一种载体把它们准确运输到癌细胞和病毒感染细胞的作用靶点,从而发挥它们各自的功能。作为一种非编码RNA,对pRNA的深入研究将有助于我们了解生命起源问题,并有着广阔的应用前景。 展开更多
关键词 prna 六聚体 DNA转运 纳米粒子
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噬菌体phi29 pRNA载体在RNA干扰中的初步应用研究
3
作者 田拥军 张正茂 +4 位作者 杨燕 覃莉 孟忠吉 刘慎沛 杨东亮 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期148-152,共5页
Gene-silencing siRNA has shown great promise for the treatment of genetic diseases,cancers,and viral infections,but its therapeutic value has been hindered by the lack of an efficient and safe in vivo delivery system ... Gene-silencing siRNA has shown great promise for the treatment of genetic diseases,cancers,and viral infections,but its therapeutic value has been hindered by the lack of an efficient and safe in vivo delivery system to target specific cells.The motor pRNA of phi29 has a strong tendency to form dimers,trimers and hexamers by interaction of interlocking right and left hand loops.This unique feature makes pRNA an ideal vector for the delivery of multiple therapeutic RNAs.Toxicity of pRNA was detected by transfection of 8 pRNA in HeLa cells.A pRNA-based vector was designed to carry siRNAs to inhibit GFP or HBV surface gene expression.Silence effects on siRNA against expression of GFP or HBV surface gene were detected in HeLa cells.Viral replicative intermediates were detected by Southern blotting.The results of toxicity study showed there was no toxicity of pRNA to cultured monolayer cells.The siRNA connected with pRNA can inhibit GFP or HBV surface gene expression in HeLa cells and inhibit HBV replication in HepG2 cells.These data suggest that pRNA can be used as a vector for imparting stability to siRNA in vitro. 展开更多
关键词 噬菌体 prna RNA干扰 乙型 肝炎病毒
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pRNA:一种安全、稳定、大容量的基因治疗分子载体 被引量:1
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作者 徐凤萍 杨君 +1 位作者 冯雪松 安利佳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期96-100,共5页
疾病的基因治疗需要安全、高效、靶向性的分子载体。通过对pRNA分子的结构和作用机理的研究,发现pRNA分子极易穿过细胞膜,有多个结合位点,能有效转导多个外源分子进入靶细胞,在体内几乎不引起免疫反应,而且可能通过设计多功能靶向复合... 疾病的基因治疗需要安全、高效、靶向性的分子载体。通过对pRNA分子的结构和作用机理的研究,发现pRNA分子极易穿过细胞膜,有多个结合位点,能有效转导多个外源分子进入靶细胞,在体内几乎不引起免疫反应,而且可能通过设计多功能靶向复合物将疾病的检测和治疗有机地结合在一起,成为一种理想的基因治疗型载体。 展开更多
关键词 prna 多价载体 基因治疗 安全性
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普城沙雷氏菌硝吡咯菌素prnA基因突变株的构建 被引量:1
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作者 于晓莉 刘晓光 《生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期10-13,共4页
普城沙雷氏菌(Serratia plymuthica)G3是小麦内生菌,通过合成硝吡咯菌素(Pyrrolnitrin,PRN)抑制植物病原菌。PRN是色氨酸衍生物,通过抑制病原菌呼吸链电子传递系统而具有抗生作用。已报道在假单胞菌和布氏杆菌属中PRN生物合成由prnABCD... 普城沙雷氏菌(Serratia plymuthica)G3是小麦内生菌,通过合成硝吡咯菌素(Pyrrolnitrin,PRN)抑制植物病原菌。PRN是色氨酸衍生物,通过抑制病原菌呼吸链电子传递系统而具有抗生作用。已报道在假单胞菌和布氏杆菌属中PRN生物合成由prnABCD操纵子控制,需要4个酶PrnA-D顺序作用。而在沙雷氏菌中PRN生物合成还较少有研究。通过基因替换、同源重组策略,构建了G3菌株prnA基因缺失突变体。研究结果表明△prnA突变体不能合成PRN,同时也丧失了对板栗疫病菌Cryphonectria parasitica的拮抗活性,证明prnA基因也是S.plymuthica合成PRN所必需的;也为进一步鉴定抗生素PRN的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 沙雷氏菌 硝吡咯菌素 prna突变体 拮抗作用
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pRNA导入型Ribozyme的设计和体外转录制备 被引量:1
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作者 周颖 方静 +1 位作者 毛建平 祝延 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期99-105,共7页
目的:枯草杆菌的包装RNA分子pRNA是新型纳米分子载体,将其同锤头型核酶Ribozyme重组可以构建结构稳定、能进入细胞、主动识别结合和剪切基因RNA的pRNA-Ribozyme。由于目前100 nt以上的RNA分子采用化学合成制备较为困难,实验采用基因重... 目的:枯草杆菌的包装RNA分子pRNA是新型纳米分子载体,将其同锤头型核酶Ribozyme重组可以构建结构稳定、能进入细胞、主动识别结合和剪切基因RNA的pRNA-Ribozyme。由于目前100 nt以上的RNA分子采用化学合成制备较为困难,实验采用基因重组构建并体外转录制备170 nt的pRNA-Ribozyme。方法:依据pRNA序列和Ribozyme分子序列,采用PCR扩增和克隆重组,将pRNA-Ribozyme按照顺式连接开放式结构、和Ribozyme嵌入pRNA成自身环化闭合型结构,制备其DNA质粒;再在体外转录制备pRNA-Ribozyme分子。结果:体外生物合成制备pRNA-Ribozyme顺式连接开放式结构、和Ribozyme嵌入pRNA成自身环化闭合型结构pRNA-Ribozyme分子,它们能通过自身正确折叠形成聚合体结构。体外鉴定pRNA-Ribozyme对其靶mRNA均具有切割降解活性,为pRNA-Ribozyme分子的细胞内应用和在胞内表达应用打下基础。 展开更多
关键词 prna RIBOZYME
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RNA转移载体—pRNA
7
作者 杨燕 张正茂 杨东亮 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期366-368,376,共4页
pRNA(packging RNA)是枯草杆菌噬菌体φ29前衣壳上分离出的一种小RNA分子,它作为一种效应分子的天然生物载体,可以保护效应分子不被核酸外切酶降解,防止效应分子在体内的错误折叠。pRNA能够形成二聚体、三聚体和六聚体,因此pRNA不仅可... pRNA(packging RNA)是枯草杆菌噬菌体φ29前衣壳上分离出的一种小RNA分子,它作为一种效应分子的天然生物载体,可以保护效应分子不被核酸外切酶降解,防止效应分子在体内的错误折叠。pRNA能够形成二聚体、三聚体和六聚体,因此pRNA不仅可以携带效应分子,而且可以同时携带配体分子,使效应分子具有明确的靶向性。pRNA作为新一代基因转移载体,具有非常强大的应用前景。 展开更多
关键词 prna 基因治疗 靶向性
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Translation of the long-term fundamental studies on viral DNA packaging motors into nanotechnology and nanomedicine
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作者 Chenxi Liang Tao Weitao +1 位作者 Lixia Zhou Peixuan Guo 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2020年第8期1103-1129,共27页
Many years of fundamental studies on viral genome packaging motors have led to fruitful applications.The double-stranded DNA(dsDNA)viruses package their genomes into preformed protein shells via nanomotors including s... Many years of fundamental studies on viral genome packaging motors have led to fruitful applications.The double-stranded DNA(dsDNA)viruses package their genomes into preformed protein shells via nanomotors including several elegant and meticulous coaxial modules.The motor is geared by the hexameric RNA ring.An open washer displayed as hexametric string of phi29 motor ATPase has been reported.The open washer linked into a filament as a queue with left-handed chirality along the dsDNA chain.It was found that a free 5′-and 3′-dsDNA end is not required for one gp16 dimer and four monomers to assemble into the hexametric washer on dsDNA.The above studies have inspired several applications in nanotechnology and nanomedicine.These applications include:(i)studies on the precision motor channels have led to their application in the single pore sensing;(ii)investigations into the hand-in-hand integration of the hexametric pRNA ring have resulted in the emergence of the new field of RNA nanotechnology;and(iii)the studies on the motor stoichiometry of homologous multi-subunits that subsequently have inspired the discovery of new methods in highly potent drug development.This review focuses on the structure and function of the viral DNA packaging motors and describes how fundamental studies inspired various applications.Given these advantages,more nanotechnological and biomedical applications using bacteriophage motor components are expected. 展开更多
关键词 NANOPORES packaging motor phi29 prna single pore sensing chemical detection peptide differentiation and sensing NANOTECHNOLOGY NANOBIOTECHNOLOGY
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