激光微束诱导pSV－β质粒导入Hela细胞的研究

本文报道了用一套Ｎｄ：ＹＡＧ紫外激光微束系统研究基因转移。我们以ｐＳＶ－β质粒（β─半乳糖苷酶基因）作为报道基因，利用紫外激光微束将其导入Ｈｅｌａ细胞中，通过组织化学染色检测到质粒在Ｈｅｌａ细胞中获得表达，在最佳的激光辎照条件下，Ｈｅｌａ细胞的导入表达成功率在８０％以上。本工作是国内首次报道激光微束诱导外源基因进入动物细胞中并获得表达，为激光微束技术在动、植物细胞高效率导入外源ＤＮＡ的研究中摸索到一套经验，也将有力地促进这一技术在细胞工程方面的应用。

肿瘤特异性锚定型α-gal模拟表位真核表达质粒的构建及功能研究

目的构建Survivin启动子调控的、α-gal模拟表位序列和GPI锚定序列融合基因的真核表达质粒,研究该质粒在肺癌A549细胞表面锚定表达α-gal模拟表位及其抗肺癌细胞效应。方法 PCR法扩增gal-GPI融合基因,以pSGFP质粒为载体,构建Survivin启动子调控的pSGFP-gal-GPI真核表达质粒。将其用脂质体瞬时转染A549细胞后,用荧光显微镜观察GPI锚定表达功能,分别用免疫组化法和Western-blot法对锚定表达的α-gal模拟表位进行定位和免疫反应性分析,并用新鲜人血清对表达α-gal模拟表位的A549细胞进行补体介导的溶细胞效应研究。结果 pSGFP-gal-GPI质粒转染细胞的绿色荧光不均匀分布在细胞膜周围,免疫细胞化学分析表明重组融合蛋白表达在细胞膜上,Western-blot结果表明重组融合蛋白与人IgG有良好的免疫反应性;人新鲜血清对表达该表位的A549细胞具有明显的溶细胞效应。结论成功构建了能在A549细胞膜锚定表达α-gal模拟表位的pSGFP-gal-GPI真核表达质粒,为肺癌等靶向基因治疗奠定了基础。

重组质粒导入真核细胞的两种方法比较

目的 :比较糖化多聚赖氨酸介导和电穿孔两种方法将重组质粒导入真核细胞的优缺点。方法 :用最佳电压、电容、温度、DNA浓度进行电穿孔转染 ,或者先使重组质粒与糖化多聚赖氨酸电性结合后 ,再与 2 .2 .15细胞共同温育的方法 ,分别将pcEP4-aC重组质粒导入 2 .2 .15细胞 ,经潮霉素筛选 ,比较两种方法的优劣。结果 :两种方法都能成功地将重组质粒导入 2 .2 .15细胞 ,但糖化多聚赖氨酸介导者 ,细胞生存时间较长。结论 :糖化多聚赖氨酸导向配体具有良好的导入重组质粒进入肝细胞的功能 。

Use of Laser Microbeam and Ultrasound Methods to Enhance the Efficiency of Gene Transfer into Osteoblast Cells

Gene transfer introduced by physical methods is widely used for its convenient operation, high transfer efficiency and no host distinctive limitation. In this article pSV β Gal plasmid was induced into osteoblast cells successfully by laser microbeam method and ultrasound method, and β Gal gene was highly expressed. The optimal conditions for the ultrasound and laser microbeam methods of gene transfer were obtained.