人参二醇通过调节PI3K/Akt/GSK3β信号通路诱导血小板聚集参与止血过程

目的目的研究人参二醇(PD)的止血作用并探讨其作用机制。方法在体内研究中,采用小鼠断尾和肝划痕方法,观察PD对小鼠断尾出血时间和肝划痕出血时间的影响,应用血常规分析仪检测血常规;在体外研究中,采用血凝分析仪检测凝血四项;应用血小板聚集仪检测血小板聚集度;应用流式细胞仪检测人洗涤血小板中P-选择素(CD62P)和糖蛋白IIb/IIIa(PAC-1)表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测人血小板的相关蛋白表达。结果与空白对照组比较,PD能明显降低小鼠断尾和肝划痕的出血时间;显著增加大鼠血浆中红细胞分布宽度标准差(RDW-SD)、红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)、血小板数量(PLT)、血小板压积(PCT)和大型血小板比率(P-LCR);PD能显著缩短大鼠血清的活化部分凝血活酶时间(APTT)和增加纤维蛋白原的含量(FIB);在血小板聚集的结果中,大鼠和人的血小板聚集率随着PD浓度的增加而显著增加,当PD浓度为140μM时,最大聚集率分别为51.40%和33.40%。PD激活血小板,促进CD62P的释放和增加糖蛋白Ⅱb/Ⅲa的表达。同时,PD能显著增加磷酸肌醇3激酶(Phosphoinositide3-kinase,PI3K)、蛋白酶B(Protein Kinase B,Akt)和糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3 beta,GSK3β)磷酸化水平。结论PD具有止血作用,作用机制是通过激活内源性凝血途径和血小板的PI3K/Akt/GSK3β信号通路促进血小板聚集,形成血栓,参与止血过程。

人参二醇皂苷对失血性休克-内毒素二次打击大鼠肺组织一氧化氮含量的影响

目的探讨失血性休克复合内毒素二次打击大鼠肺组织一氧化氮(NO)含量的变化及人参二醇皂苷(PDS)对其影响。方法利用失血性休克对Wistar大鼠制造首次打击,给予地塞米松(Dex)或PDS预治疗,之后腹腔注入脂多糖(LPS)进行第二次打击,二次打击6h后处死大鼠,取肺脏组织进行一氧化氮合酶(NOS)、诱导型NOS(iNOS)活力和NO代谢产物NO2-/NO3-含量的测定。结果二次打击的大鼠肺脏组织NOS、iNOS活力水平及NO2-/NO3-均明显高于假手术对照组(P<0.05),而经过Dex或PDS处理的大鼠肺脏组织NOS、iNOS活力水平及NO2-/NO3-与二次打击大鼠相比均明显降低(P<0.05)。结论失血-内毒素二次打击时,NO产生过多可能参与了急性肺损伤的发生,PDS可通过抑制NO的产生从而达到保护肺脏的作用。

人参二醇对鱼藤酮、MPP+诱导的PC12细胞损伤的作用

目的观察人参二醇对鱼藤酮、MPP+诱导的大鼠嗜铬细胞瘤损伤的影响。方法以大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞为研究对象,以鱼藤酮(0.3、1、3、10、30μmol/L)或MPP+(0.1、0.3、1、3mmol/L)诱导细胞损伤。设阴性对照组、人参二醇对照组(10、25、50、75、100mg/L)、鱼藤酮(3μmol/L,24h)或MPP+(1mmol/L,48h)组,人参二醇(10、25、50、75、100mg/L)联合鱼藤酮(3μmol/L)或MPP+(1mmol/L)组。采用MTT法检测细胞增殖活性;PI和Hoechst 33342染色检测细胞坏死和凋亡;并以免疫组织化学测定细胞酪氨酸羟化酶(TH)的表达。结果人参二醇(10、25、50、75、100mg/L)本身不会抑制PC12细胞增殖,其中50、75mg/L人参二醇还可促进细胞增殖;各浓度人参二醇对鱼藤酮诱导的细胞损伤均不具有保护作用;在MPP+处理诱导细胞损伤后,50、75mg/L人参二醇可提高细胞增殖活性,但人参二醇对细胞凋亡和坏死及TH的表达无影响。结论人参二醇(50、75mg/L)对MPP+诱导的PC12细胞损伤有保护作用,其作用机制与促进细胞增殖有关;人参二醇对鱼藤酮诱导的细胞损伤无明显保护作用。

不同无机盐对二醇型人参皂苷分纯效果的影响

研究了二醇型人参皂苷在NaCl、KCl、CaCl2、MgCl2等不同无机盐溶液中的溶解度,采用萃取方法分离二醇型人参皂苷,经高效液相色谱检测,确定了二醇型人参皂苷提纯所需的最佳无机盐及浓度。结果显示采用丙酮-5%CaCl2盐溶液(体积比6∶1)溶剂系统,萃取分离效果最好,其最高得率可达93%。

人参二醇对鱼藤酮MPP＋诱导的BV2细胞活性下降的作用

目的观察人参二醇对鱼藤酮、MPP＋诱导的小鼠小胶质细胞活性下降的影响。方法以小鼠BV2细胞为研究对象，以鱼藤酮（0．03、0．1、0．3、1、3μmol／L）或MPP＋（10、30、100、300、1000μmol／L）处理24h和诱导细胞活性下降。设阴性对照组、人参二醇对照组（100mg／L），鱼藤酮（0．1μmol／L）或MPP＋（100μmol／L）损伤组，人参二醇治疗组（10、25、50、75、100mg／L）。采用MTT法检测细胞活性。结果各浓度人参二醇对BV2细胞的活性无明显影响。鱼藤酮或MPP＋处理24h可诱导BV2细胞活性下降，各浓度人参二醇不能逆转鱼藤酮或MPP＋造成的细胞活性下降。结论人参二醇对鱼藤酮或MPP＋诱导的BV2细胞活性下降无保护作用。

人参二醇对β-淀粉样蛋白介导原代培养胎鼠皮质神经元毒性的保护作用

目的研究β-淀粉样蛋白(Aβ)1-40对原代培养胎鼠皮质神经元的毒性作用及人参二醇对Aβ1-40毒性的拮抗作用。方法通过测定原代培养胎鼠皮质神经元培养液中LDH的活力变化,并用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定神经元存活率,观察Aβ1-40对神经元的毒性及人参二醇对神经细胞的保护作用。结果终浓度为3、6、12μmol/LAβ1-40作用于皮质神经元48h后,培养液中LDH的活力增高,神经细胞的存活率下降,与不作任何处理的空白对照组比较差异有显著性(P<0.05,P<0.01);与单独加入12μmol/LAβ1-40损伤组相比,经10、20、40mg/L人参二醇预处理24h再加入12μmol/LAβ1-40作用48h,LDH活力下降,细胞存活率升高,与仅加入12μmol/LAβ1-40的损伤组比较有统计学差异(P<0.05,P<0.01)。结论人参二醇能拮抗Aβ1-40诱导的神经细胞凋亡,对Aβ1-40引起的神经细胞毒性有一定保护作用。

人参二醇组皂苷对内毒素诱导急性肾损伤小鼠肾脏UT-A2和UT-A3表达的影响

目的探讨人参二醇组皂苷(PDS)对内毒素血症小鼠肾脏保护作用,并揭示其保护作用与炎症因子的释放、尿素通道蛋白A2(UT-A2)和尿素通道蛋白A3(UT-A3)的表达关系。方法构建C57BL/6小鼠内毒素血症模型,实验分为4组,分别为对照组、LPS组、PDS+LPS组和Dexa+LPS组。麻醉下记录心率和平均动脉压;称取体质量和肾脏质量,并计算系数;肾脏固定和冻存,用于HE和免疫组化检测。结果与对照组比较,LPS组小鼠心率和平均动脉压下降(P<0.05),TNF-α、IL-6含量明显升高(P<0. 01),肾脏组织UT-A2和UT-A3蛋白表达水平显著降低且肾脏病理炎症增加和肾间质细胞水肿。与模型组比较,PDS+LPS组和Dexa+LPS组均能恢复心率和平均动脉压(P<0.05);明显降低TNF-α、IL-6含量(P<0.05),升高肾脏组织UT-A2和UT-A3蛋白的表达并且减轻肾脏病理炎症和间质细胞水肿。结论人参二醇组皂苷和地塞米松类似,可降低内毒素血症小鼠促炎因子TNF-α、IL-6含量,升高肾脏组织UT-A2和UT-A3蛋白的表达,改善肾脏病理炎症,减轻肾脏间质细胞水肿状态,从而有效防治保护内毒素血症肾脏损伤。

人参二醇组皂苷对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制

目的:探讨人参二醇组皂苷(PDS)对四氯化碳(CCl4)所致急性肝损伤(ALD)大鼠的保护作用,并阐明其作用机制。方法:50只大鼠随机分为对照组(给予生理盐水),模型组(制备ALD模型,给予生理盐水),低、中和高剂量PDS组(制备ALD模型,给予10、20和40mg·kg^-1PND),每组10只。观察各组大鼠一般状态;检测各组大鼠谷氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)和总蛋白(TP)水平;ELISA法测定各组大鼠肝组织匀浆中白细胞介素12 (IL^-12)、白细胞介素6 (IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western blotting法检测各组大鼠肝组织中蛋白激酶B (又称AKT)和磷酸化蛋白激酶B (p-AKT)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠一般状态差,ALT、AST和TBIL水平明显升高(P<0.01),TP水平降低(P<0.01),IL^-12、IL-6和TNF-α水平均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,各剂量PDS组大鼠肝功能明显改善,ALT、AST和TBIL水平降低(P<0.01),TP水平升高(P<0.01),IL^-12、IL-6和TNF-α水平降低(P<0.01),肝组织中AKT蛋白表达水平降低(P<0.01),p-AKT蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:PDS对ALD具有保护作用,其机制可能与降低炎症因子的表达、影响p-AKTAKT信号通路有关。

人参二醇组皂苷保护内毒素血症小鼠肾脏的机制研究

目的观察人参二醇组皂苷(PDS)对内毒素血症小鼠肾脏的保护作用与炎症因子的释放、水通道蛋白1 (AQP1)和水通道蛋白2 (AQP2)表达的关系。方法构建C57BL/6小鼠内毒素血症模型,实验共分为4组,分别为对照组,LPS组,PDS+LPS组, Dexa+LPS组。麻醉后记录心率和平均动脉压;称取体重和肾脏重量,并计算系数;肾脏固定和冻存,用于HE和免疫组化检测。结果相比于对照组,LPS组小鼠的心率和平均动脉压下降(P<0.05),TNF-α,IL-6含量明显升高(P<0.01),肾脏组织AQP1和AQP2蛋白表达水平显著降低,肾脏病理炎症增加和肾间质细胞水肿。相比于模型组,PDS+LPS组和Dexa+LPS组均能恢复心率和平均动脉压(P<0.05);明显降低TNF-α,IL-6含量(P<0.05),升高肾脏组织AQP1和AQP2蛋白的表达并且减轻肾脏病理炎症和间质细胞水肿。结论人参二醇组皂苷具有保护内毒素血症肾脏损伤的作用,通过降低内毒素血症小鼠促炎因子TNF-α,IL-6含量,升高肾脏组织AQP1和AQP2蛋白的表达,改善肾脏病理炎症,减轻肾脏间质细胞水肿状态。

人参和酶解人参中的人参二醇和人参三醇的含量比较

建立了高效液相法色谱测定人参和通过酶解工艺处理后的人参中的人参二醇和人参三醇的含量比较的方法。色谱条件:Diamonsil C18色谱柱,流动相为甲醇∶水,(95∶5)检测波长为230 nm。结果样品经提取,水解和衍生化等前处理后,人参二醇平均回收率为92.87%,RSD为2.18%(n=6);人参三醇为平均回收率91.7%,RSD为2.10%(n=6)。人参二醇1.6 ug^16 ug内有良好的线性关系,r=0.999 7。人参三醇1.6 ug^16 ug内有良好的线性关系,r=0.999 1。

新人参皂苷元HPD相关物质的分离鉴定研究

目的分离纯化新人参皂苷元羟基人参二醇(hydroxylation panoxadiol,HPD)的主要相关物质,并进行结构确证。方法利用反复硅胶柱层析和重结晶方法对HPD合成过程中所产生的相关物质进行分离纯化,得到4个化合物,经理化性质及波谱学方法(LC-MS、~1H-NMR、^(13)C-NMR)鉴定其结构。结果新人参皂苷元HPD中4个相关物质分别是(20S,24R)-达玛-20,24-环氧-3β,6α,12β,25-四醇、(20S,24S)-达玛-20,24-环氧-3β,12β,25-三醇、(20S,25R)-达玛-20,25-环氧-3β,12β,26-三醇和达玛-24-烯-3β,12β,20S-三醇。结论新人参皂苷元HPD相关物质的定量和定性研究可以为HPD原料药的质量控制提供依据。

人参二醇组皂苷增强顺铂对人前列腺癌DU145细胞凋亡的效应

目的探讨人参二醇组皂苷(panoxadiol saponin PDS)与顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对DU145前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法采用MTT比色法检测PDS与DDP联合应用对DU145细胞增殖活力的影响;吖啶橙染色观察诱导细胞凋亡情况;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡,并计算细胞平均凋亡率;免疫化学和Western blot技术观察细胞内激活的caspase3的表达。结果100mg/L PDS与0.2μmol/L DDP联合给药:(1)48h后可使单独应用0.2μmol/L DDP组其肿瘤细胞生长抑制率由16.35%提高到47.13%;(2)吖啶橙荧光染色可见细胞呈现明显凋亡形态,其凋亡率与2μmol/L DDP组相当;(3)流式细胞术结果显示,可使单独应用0.2μmol/L DDP组其诱导DU145细胞凋亡率从5.53%提高到19.39%,相当于其10倍剂量即2.0μmol/L DDP的诱导凋亡效应(21.05%),明显高于PDS单独应用的凋亡率;(4)免疫化学和Western blot结果显示,可使单独应用0.2μmol/L DDP组细胞内激活的caspase3阳性细胞率与2μmol/L DDP组相当。结论PDS能增强DDP对DU145前列腺癌细胞的致凋亡效应。

人参二醇组皂苷对人前列腺癌DU145细胞增殖与凋亡的影响

目的观察人参二醇组皂苷(panoxadiol saponin PDS)体外对DU145前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法采用MTT比色法检测不同浓度PDS对DU145细胞增殖活力的影响。吖啶橙染色观察PDS诱导细胞凋亡情况;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡,并计算细胞平均凋亡率;细胞免疫化学和Western blot技术观察细胞内激活的caspase3的表达。结果经中(100mg/L)、高(200mg/L)剂量的PDS处理后,DU145细胞生长受到不同程度抑制,且呈现剂量依赖性;吖啶橙荧光染色可见经中、高剂量PDS处理后的细胞呈明显凋亡形态,并随药物剂量增加,凋亡细胞数增多;流式细胞术结果显示,PDS可明显提高细胞的凋亡率,呈剂量依赖关系;免疫细胞化学染色和Western blot结果,随着PDS剂量增加,细胞内激活的caspase3的表达上调。结论 PDS体外对DU145细胞增殖具有明显的抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。

人参二醇型皂苷及其各单体的心血管药理活性研究进展

人参二醇型皂苷(PDS)作为人参的主要皂苷,可有效地对抗心肌动脉粥样硬化、保护心肌缺血和缺血再灌注损伤、治疗心肌梗死、抑制心肌细胞肥大、改善心脏能量代谢、抑制细胞凋亡及发挥负性频率作用等。本文对人参二醇型皂苷及其单体在心血管疾病方面的药理作用进行总结。