鸡大肠杆菌P型菌毛结构基因(papA)的克隆与序列测定

根据国外发表的 4种来源不同的人尿道致病性大肠杆菌 pap A基因序列 ,在其保守区设计了带有 Sac /Bam H 酶切位点及保护碱基的 1对引物 ,应用 PCR从 1株带有 MRHA特性的鸡大肠杆菌染色体上扩增到 1个阳性产物 ,经酶切、连接、转化和筛选 ,得到 PCR产物的阳性克隆。通过对 PCR产物核酸序列测定 ,确证所扩增和克隆的 DNA片段为 pap

禽致病性大肠杆菌P型菌毛papA基因克隆与基因分型分析

为克隆禽致病性大肠杆菌P型菌毛papA基因,确定其基因分型并分析其变异性,从GenBank数据库中查找大肠杆菌P型菌毛papA基因,并运用Snap Gene 3.2.1软件设计合成3对引物。其中,第1对引物为扩增不同基因分型通用引物,预计扩增片段大小为281 bp;第2对和第3对引物是为了扩增完整papA基因并分析有无变异而设计的,预计扩增片段大小分别为522 bp和943 bp。以禽大肠杆菌HJ2、TK3菌株的基因组为模板进行PCR扩增;将所有扩增片段回收、酶切,并分别与pTG19-T载体进行连接,转化进入DH5α受体菌,提取获得含扩增片段的重组质粒,测序并进行序列分析。结果表明,用引物1从HJ2、TK3菌株的基因组中均扩增获得接近281 bp大小的片段,用引物2则只从HJ2菌株基因组中扩增获得接近522 bp大小的片段,而未能从TK3菌株基因组中扩增出片段;用引物3从TK3菌株基因组中扩增出接近943 bp大小的片段,而未能从HJ2菌株基因组中扩增出产物。经过基因碱基序列分析比对,完整的papA基因则位于943 bp的片段之中,确定HJ2和TK3两个菌株P型菌毛papA基因均属基因11型,但发现二者papA基因存在一定的碱基差异。PapA蛋白氨基酸序列比对发现,同属于基因11型的papA基因编码的PapA蛋白氨基酸序列也存在位点差异。

鸡大肠杆菌(HJ20株)与人大肠杆菌(RHU845)P型菌毛同源性分析

运用Goldkey电脑软件对鸡源大肠杆菌与人源大肠杆菌P型菌毛蛋白结构基因序列、氨基酸序列、二级结构进行了比较分析,二者结构基因序列相似性82.5%。二者P型菌毛的信号肽序列基本相同,氨基酸序列相似性83.7%,并且菌毛蛋白在二级结构上存在较多的相似性。