Synthesis of CCK-8 Tetrapeptide Fragment by Enzymatic Method

The enzymatic synthesis of a tetrapeptide Phac-Met-Gly-Trp-Met-OEt, a fragment of the cholecystokinin C-terminal octapeptide CCK-8, was reported This fragment was synthesized by coupling Phac-Met-OEt with Gly-OMe, Trp-OMe and Met-OEt successively These three steps were catalyzed by α-chymotrpsin, Papain and α-chymotrpsin respectively The results of FAB-MS showed that all the products had the correct molecular mass

响应面法优化长茎葡萄蕨藻多糖提取工艺及抗氧化活性

为了探究提取长茎葡萄蕨藻多糖的最优工艺及抗氧化活性,对目前已有的多糖提取方法进行筛选,并采用单因素实验和响应面实验的方法,对料液比、提取温度、提取时间、木瓜蛋白酶添加量和提取次数这5个因素进行优化。结果显示,添加木瓜蛋白酶提取长茎葡萄蕨藻多糖的方法最高效便捷,且当料液比1∶40,提取温度50℃,提取时间3 h,提取次数2次,以及木瓜蛋白酶添加量为2.0%时,长茎葡萄蕨藻多糖提取率相对较高,可达到41.24%±0.09%。进一步的实验结果显示,长茎葡萄蕨藻多糖对DPPH和ABTS自由基均具有良好的清除活性,其IC50值分别为2.32和0.67 mg/mL。研究表明,使用优化后的木瓜蛋白酶酶解法能有效提高长茎葡萄蕨藻多糖的提取率,且长茎葡萄蕨藻多糖具有良好的抗氧化活性。本研究可为长茎葡萄蕨藻多糖的开发利用提供理论基础和参考依据。

多级双水相萃取木瓜蛋白酶的研究

使用双水相萃取大规模生产木瓜蛋白酶时,为获得较高的回收率,通常需要较高的萃取剂浓度和体积比,但这会导致目标物的纯度和浓度降低。该研究采用聚乙二醇和柠檬酸钠组成的双水相体系在多个离心管之间的转移来模拟工业上常用的多级错流萃取和多级逆流萃取过程,以分配系数、酶活性回收率为指标,采用McCabe Thiele图解法得到多级逆流双水相萃取的理论级数,结果表明,当相比为0.5,原料液下相的木瓜蛋白酶的初始质量浓度为0.20 mg/mL时,使用3级逆流双水相萃取木瓜蛋白酶的酶活性回收率达到了96.75%,同时设计出多级逆流双水相萃取木瓜蛋白酶的优化方案。

酶法提取鲍鱼多糖的研究

选用木瓜蛋白酶酶解鲍鱼肉,提取多糖,确定了温度、时间、pH值、料液比、加酶量对鲍鱼多糖得率的影响。结果表明,木瓜蛋白酶的适宜反应条件为温度55℃,时间2h,pH8.0,料液比1∶40,加酶量2.0%,在此条件下,鲍鱼多糖的得率为19.60%。

上海地区无偿献血者血液中不规则抗体的调查

目的对上海地区无偿献血者血液中不规则抗体进行常规筛查,在进一步提高血液安全同时,也为寻找一个适合于血站大规模常规开展不规则抗体的筛查方法,提供参考依据。方法采用盐水介质与微量板木瓜酶法相结合的方法,对824 072例献血者进行不规则抗体筛查。结果 824 072例献血者血液样本中共检测出不规则抗体阳性1 246例,阳性率1.51‰。结论筛查无偿献血者血液中不规则抗体,可有效降低或避免溶血性输血反应;盐水介质与微量板木瓜酶法相结合的方法是适合血站大规模常规开展不规则抗体筛查的有效方法。

3种不同膝骨关节炎造模方法比较

目的比较卵巢切除法、木瓜蛋白酶法、改良Hulth法3种方法在不同时间节点血清炎症因子、病理表现及关节软骨胶原蛋白(Collagen)Ⅱ的表达,了解膝骨关节炎不同造模方法的造模效果及特点。方法选取清洁级雌性SD大鼠80只,采用随机数字表法分别设立空白对照组(6 w组、10 w组)、卵巢切除法组(6 w组、10 w组)、木瓜蛋白酶法组(6 w组、10 w组)、改良Hulth法组(6 w组、10 w组),每组10只。除空白对照组外,其余组按照相应方法建立膝骨关节炎模型。分别于建模后第6周、第10周处死相应组别大鼠,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、基质金属蛋白酶(MMP)-3含量,镜下观察大鼠膝关节形态并用改良Mankin标准进行病理评分,免疫组化法检测膝关节软骨CollagenⅡ型胶原表达。结果造模6 w时,与空白对照组对比,卵巢切除法组TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分及膝关节软骨CollagenⅡ表达未见明显差异(P>0.05)。与空白对照组、卵巢切除法组对比,木瓜蛋白酶法组、改良Hulth法组血清IL-6、TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分明显增高,关节软骨CollagenⅡ表达明显降低(P<0.05)。造模10 w时,与空白对照组对比,卵巢切除法组血清IL-6、TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分及关节软骨CollagenⅡ表达未见明显差异(P>0.05)。与空白对照组及卵巢切除法组对比,木瓜蛋白酶法组、改良Hulth法组血清IL-6、TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分明显增高,关节软骨CollagenⅡ表达明显降低(P<0.05)。与木瓜蛋白酶法组对比,改良Hulth法组血清TNF-α、MMP-3含量、改良Mankin评分明显更高,关节软骨CollagenⅡ表达明显更低(P<0.05)。结论在第10周时,卵巢切除法未能成功建立膝骨关节炎模型。木瓜蛋白酶法和改良Hulth法均可在第6周时快速、有效地建立膝骨关节炎模型。而改良Hulth法随着造模时间增加,在炎症反应表现更加持久和膝关节病理改变严重程度更高。

酶-Sevag法除酸浆果实多糖蛋白工艺的研究

[目的]优化木瓜蛋白酶-Sevag法去除酸浆(Physalis alkekengi L.)果实多糖中蛋白质的工艺条件。[方法]以蛋白脱除率和多糖保留率为指标,通过对酶解温度、时间、p H及酶添加量进行单因素试验及L9(34)正交试验确定酶解条件,并结合Sevag试剂除蛋白。[结果]各因素对酶解法脱酸浆果多糖液蛋白的影响程度大小依次为:酶解温度、酶解时间、p H、酶添加量。在酶解温度60℃、酶解时间2.0 h、p H 6.0、酶添加量2.5%条件下,粗多糖液蛋白脱除率为62.07%,多糖保留率为93.16%。原料经酶处理后,可使游离蛋白和部分与多糖结合的蛋白质被水解,再经Sevag试剂(氯仿∶正丁醇为4∶1)处理2次,蛋白质脱除率为81.65%,多糖保留率为89.43%,可达到较理想的脱蛋白质效果和较高的粗多糖保留率。[结论]采用酶和Sevag试剂相结合的方法除酸浆果多糖中的蛋白质,效果良好,操作简单,可为酸浆果多糖的纯化提供理论依据,但其对多糖结构和生物活性的影响还有待于进一步研究。

酶催化法合成CCK-8的一个四肽片段

用酶催化法合成了缩胆囊素 ( CCK-8)的 1个四肽片段 ( Phac-Met-Gly-Trp-Met-OEt) .该四肽片段是依次通过 Phac-Met-OEt与 Gly-OMe· HCl,Trp-OMe和 Met-OEt偶合得到的 ,这 3步偶合反应分别用α-糜蛋白酶、木瓜蛋白酶和α-糜蛋白酶作为催化剂 ,并对影响反应的因素进行了研究 ,反应中间体和产物均经质谱 ( FAB-MS)

响应面法优化咸蛋清酶解工艺的研究

以咸鸭蛋蛋清为原料,在五种酶中选择出最合适的一种酶对其进行酶解,本研究中以水解度和多肽质量浓度为指标,首先通过单因素实验研究了酶的添加量、初始pH、酶解的温度和酶解的时间对咸蛋清水解效果的影响,其次采用响应面法优化了咸蛋清的酶解工艺,最后验证了最佳工艺条件下获得的咸蛋清酶解液的水解度。研究结果表明:咸蛋清稀释液利用木瓜蛋白酶酶解的最佳工艺条件是:加酶量为底物质量分数4%,初始pH 7.0,酶解温度60℃,此条件下测得水解度为18.41%,可验证响应面优化的数学模型的正确性。

响应面分析法优化酶提取土茯苓多糖工艺

目的优化酶法提取土茯苓多糖的工艺。方法通过单因素试验法和响应面分析法,考察最佳酶的酶解时间、酶解p H、酶用量对提取土茯苓多糖的影响。结果木瓜蛋白酶提取多糖效率最高,其最佳工艺为酶用量0.6%,酶解p H为8,酶解时间150 min,在此条件下得到的实际多糖提取率为26.31%,与预测值25.71%的相对误差为2.33%。说明采用响应面分析法优化木瓜蛋白酶提取土茯苓多糖的方法可靠。结论此设计法用于酶法提取土茯苓多糖可行。

溶胶—凝胶法固定木瓜蛋白酶条件的优化

[目的]探索正硅酸乙酯包埋木瓜蛋白酶的过程。[方法]以正硅酸乙酯为前驱体,采用溶胶-凝胶法制备固定化木瓜蛋白酶并优化试验条件。[结果]在固定化木瓜蛋白酶的制备过程中,卵胆比、酶原溶液含水量、酶原溶液加入量、胆固醇含量、木糖含量的极差分别为39.318、13.280、15.350、9.810和2.210。卵胆比对木瓜蛋白酶固定化的影响最大,酶原溶液加入量次之。制备固定化木瓜蛋白酶的最佳条件为:酶原溶液含水量为90μlH2O/mg木瓜蛋白酶,木糖加入量为15 mg木糖/mg木瓜蛋白酶,正癸烷溶液中胆固醇含量为1.5%,卵磷脂与胆固醇的比值为4.5∶1.0(w/w),固定化过程中酶原溶液、正癸烷溶液和前驱体溶液的加入量分别为80、500和600μ。l[结论]该研究为固定化木瓜蛋白酶的制备奠定了试验基础。

双酶水解脱脂麦胚制备抗氧化肽工艺的研究

以脱脂麦胚为原料,利用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶双酶水解制备具有抗氧化活性的麦胚肽。以水解度为考察指标,采用响应面法,对酶解工艺进行优化。实验结果表明双酶水解最佳条件是:[E]/[S]为0.03,温度在52℃,酶解2.2 h时,麦胚蛋白水解度达到最大值为17.26%。

响应面法优化芡茎多糖脱蛋白工艺

目的:研究芡茎多糖脱蛋白最优工艺。方法:以芡茎多糖蛋白脱除率和多糖损失率为指标,考察沙维积(Sevag)法、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)法、木瓜蛋白酶法、木瓜蛋白酶-TCA法4种方法对芡茎多糖脱蛋白的效果,从而筛选得木瓜蛋白酶-TCA法为较优方法。利用响应面法对木瓜蛋白酶法脱蛋白工艺进行优化,并将最优工艺与TCA法结合处理1次。结果:木瓜蛋白酶-TCA法最优工艺为加酶量580 U·m L-1,酶解温度30℃,酶解时间2.0 h,p H7.0,TCA体积分数8.0%,在此条件下,芡茎多糖蛋白脱除率为85.1%,多糖损失率为16.3%。结论:木瓜蛋白酶-TCA法是一种较优的芡茎多糖脱蛋白方法。

具有铁螯合能力的驴骨胶原肽酶解条件优化及微观形态

为充分开发利用驴骨资源,开发一种酶解驴骨蛋白从而得到驴骨胶原蛋白肽的方法,考察该酶解肽与亚铁离子的螯合能力,并将其产物进行表征。以亚铁离子螯合率为考察指标,筛选最优酶种类,通过单因素实验和考虑交互作用的正交实验优化确定驴骨的最佳酶解条件。结果表明,驴骨的最佳预处理条件为121℃蒸煮30 min,木瓜蛋白酶为最佳酶,优化过后的酶水解工艺参数为温度50℃、pH 7.0、酶底比1000 U/mL、时间3 h,此时驴骨胶原肽和亚铁离子的螯合率为38.40%,可得到微观结构为片状的螯合产物。木瓜蛋白酶酶解驴骨蛋白可以制备有螯合亚铁离子能力的驴骨胶原肽,具有促铁吸收的潜力,对开发驴骨胶原肽相关产品具有科学参考作用。

大鼠脑海马神经元原代培养方法的建立及其纯度的鉴定

目的:为建立一种稳定的大鼠胎鼠海马神经元培养方法并能够有效的鉴定其纯度。方法:分离Wista大鼠胚胎并取海马组织,比较两种常用酶,胰酶和木瓜酶消化效果对海马神经元产量的影响及两种不同培养方法对海马神经元纯度的影响。结果:培养的神经元胞体清晰晕光明显,应用两种不同的酶消化对神经元的产量影响无明显统计学意义,而应用无血清方法培养神经元在纯度上要优于应用阿糖胞苷去除神经胶质细胞的培养方法。结论:采用木瓜酶消化并用无血清培养的方法培养大鼠胎鼠海马神经元,稳定可靠,提高了原代神经元培养的产量和纯度。

爱滋病病毒中肽段的酶促合成

1937年,Bergmann和Fraenkel-Conrat首次用酶促法合成了羧酰苯胺键以来,由于该法对氨基酸的侧链无需保护,不会发生消旋等独特优点,酶促合成已经有了很大的发展。

工业生产中木瓜蛋白酶的活性检测方法比较

对不同来源的木瓜蛋白酶用三种不同方法测定其活性 ,结果表明从酪蛋白为底物的紫外分光光度法操作简便、成本低廉 ,适于酶纯化过程中的活性比较和木瓜蛋白酶系列产品及国内商品酶的活性测定 ;以BAEE为底物的光学法反应稳定 ,重复性好 ,适于酶学性质的理论研究和出口商品酶的活性测定 ;以酪蛋白为底物的茚三酮显色法 ,虽然操作烦琐 ,但所需仪器简单 ,测定结果误差较小 ,因此在条件简陋的地区也可以来用此法测定木瓜蛋白酶的活性。

不同酶解方式对豆粕大豆蛋白组分和抗原活性的影响

以低温脱脂豆粕提取的大豆蛋白为原料,分别采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和双酶联合方法水解大豆蛋白,分别采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳和竞争法酶联免疫吸附试验分析水解过程中蛋白质组分和抗原活性的变化。结果表明:碱性蛋白酶水解30 min即可基本去除大豆蛋白7S组分中的α-亚基和α'-亚基,木瓜蛋白酶水解10 min即可水解所有的亚基,但新产生的多条分子量小于30 kDa的谱带表现出较强的抗酶解特性;双酶联合水解既可消除碱性蛋白酶不能水解的亚基,也不会使木瓜蛋白酶水解生成新肽段。采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及双酶联合水解120 min后,大豆蛋白7S组分的抗原活性分别下降为原蛋白的64.25%、48.79%、28.57%,大豆蛋白11S组分的抗原活性分别下降为原蛋白的78.43%、62.35%、33.93%。上述结果表明,与单酶水解相比,两种酶联合水解具有明显的加成效果。

枸杞多糖改良差示酚硫法测定及其木瓜蛋白酶辅助提取工艺研究

目的:通过改良差示酚硫法测定枸杞多糖含量,优化木瓜蛋白酶辅助提取枸杞多糖的工艺。方法:在改良差示酚硫法测定枸杞多糖含量基础上,采用均匀设计法,以枸杞多糖提取率为指标,木瓜蛋白酶用量、pH、酶解时间和酶解温度为考察因素,每个因素7个水平,建立4因素7水平的均匀设计试验,应用SPSS19. 0软件对数据进行多元回归分析,并通过相对黏度和体外抗氧化性对优化工艺下的枸杞提取物与传统提取比较。结果:改良差示酚硫法测定枸杞多糖条件为:测定波长λmax=484 nm,相关系数R^2=0. 9994,重复性RSD=2. 45%,回收率为98. 76%;木瓜蛋白酶辅助提取枸杞多糖的最佳工艺条件为:酶用量为0. 2%,pH为4. 2,温度为40℃,酶解时间为1. 0小时。木瓜蛋白酶辅助提取后,相同条件下枸杞提取物相对黏度,体外抗氧化性高于传统提取方法。结论:改良差示酚硫法可用于枸杞多糖含量测定,木瓜蛋白酶辅助提取枸杞多糖可提高其中多糖的利用率。

Enzymatic Synthesis of a CCK-8 Tetrapeptide Fragment

The enzymatic synthesis of a tetrapeptide Phac-Met-Gly-Trp-Met-OEt is reported. It was synthesized by coupling Phac-Met-OEt with Gly-OMe ·HC1, Trp-OMe and Met-OEt successively, catalyzed by α-chymotrypsin, papain and α-chymotrypsin respectively. The results of FAB-MS showed that the products had the correct molecular mass.