MPTP对C57BL/6小鼠SNpc和VTA脑区多巴胺能神经元的差异性损伤研究

目的:观察MPTP对小鼠黑质致密部(SNpc)和腹侧被盖区(VTA)多巴胺(DA)能神经元损伤的差异。方法:按20 mg/kg的剂量每2 h腹腔注射MPTP 0.1 mL,共注射4次制作小鼠急性损伤模型。(1)行为学测试:通过爬杆实验和悬杆实验,分别检测给药后不同时间点小鼠运动迟缓症状和肢体僵硬症状的程度;(2)免疫荧光:检测小鼠SNpc和VTA脑区的DA能神经元标志物酪氨酸羟化酶(TH)。结果:MPTP急性损伤后小鼠出现运动迟缓和肢体僵硬的表现;SNpc脑区的DA能神经元在各时间点均有减少,其中1 d组减少最显著,达69%(P<0.001),其DA能神经元突起亦变短或消失;VTA脑区的DA能神经元在各时间点亦有所减少,只是其幅度(23%)比SNpc脑区小。结论:小鼠急性损伤模型能选择性损伤SNpc和VTA脑区的DA能神经元,损伤快且严重,并在行为学上也有改变,能较好地模拟人类PD的神经病理学改变。

原位杂交检测pal-1 mRNA在C.elegans野生型和突变体早期胚胎中的分布

Caenorhabditis elegans是发育生物学中的重要模式生物,许多基因参与C.elegans的细胞命运决定和细胞谱系发育.par基因的活性影响C.elegans胚胎前后轴的极性,其功能缺失会使胚胎的第一次分裂丧失前后轴的不对称性,导致一些母体提供的发育调控因子不能在特定的胚胎细胞中准确定位,从而改变胚胎细胞发育命运.pal-1是C.elegans早期胚胎发育中决定细胞命运的重要基因,它决定体细胞的性质,也是转录因子,调控着后续基因的表达,凡含有该基因表达的细胞发育成体细胞.调控PAL-1表达的基因有许多,本文通过原位杂交检测pal-1 mRNA在C.elegans野生型和par-5、par-6、gld-1突变体早期胚胎中的分布,来探讨par-5、par-6和gld-1基因的活性在胚胎发育早期对pal-1 mRNA的影响.实验结果表明,pal-1mRNA在野生型早期胚胎中有明显极性,而pal-1mRNA分布的不对称性在上述基因缺失的情况下被破坏,这些基因与pal-1mRNA的不对称分布直接相关.

大鼠黑质毁损程度的行为学评价

本研究通过观察黑质毁损大鼠的行为学变化及其与毁损程度的相关性,评价开野实验作为毁损程度观察指标的可行性。采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)单侧一点注射毁损大鼠黑质致密区(SNC)多巴胺(DA)能神经元,采用开野实验和阿朴吗啡(APO)诱导旋转实验,观察术后1、3、5、7、14、21 d行为学变化;利用Nissl染色和免疫组织化学方法观察各时间点黑质形态学变化。结果显示:毁损侧黑质DA能神经元逐渐减少;开野实验中旋转、探究、后肢站立和穿梭行为在术后1 d即有显著改变(与对照组比较P<0.05),其中,旋转行为与毁损程度呈正相关(r=0.471,P<0.01),探究、后肢站立和穿梭行为与毁损程度呈负相关(r分别为-0.719、-0.589、-0.594,P<0.01);术后14 d毁损比例超过80%,APO诱导旋转实验阳性。因此开野实验可作为毁损早期反映大鼠脑内DA耗竭程度的敏感的行为学观察指标。

原位杂交检测pal-1mRNA在秀丽小杆线虫野生型和突变体早期胚胎中的分布

pal-1是秀丽小杆线虫(Caenorhabditis elegans)早期胚胎发育中决定体细胞命运的重要基因,也是转录因子,调控后续基因的表达,凡含有该基因表达的细胞发育成体细胞。本文通过整体原位杂交技术检测pal-1mRNA在C·elegans野生型和par-1、par-2、par-3、par-4突变体、spn-4突变体、mex-5/mex-6突变体早期胚胎中的分布,探讨这些基因在胚胎发育早期对pal-1mRNA的影响。实验结果表明:par-1、par-3、par-4突变使4细胞胚胎pal-1mRNA完全丧失了野生型不对称分布模式,pal-1mRNA分布在所有卵裂球中;par-2对pal-1mRNA的分布影响较小,在par-2突变体4细胞胚胎中pal-1mRNA分布与野生型相同。spn-4、mex-5、mex-6也能影响pal-1mRNA的分布,使其分布丧失不对称性。在par-1、par-4突变的情况下,pal-1mRNA广泛存在,但PAL-1蛋白也不表达,显示对pal-1mRNA的翻译调控是PAL-1蛋白空间和时序不对称分布的主要原因[动物学报51(5):884-891,2005]。

去松果体与去势对帕金森病模型大鼠中脑多巴胺神经元的影响

目的探讨去松果体（pinealectomy，Px）与去势（gonadectomy、GDX）对帕金森病（par-kinson＇s disease，PD）模型大鼠中脑多巴胺（dopamine，DA）神经元的影响。方法80只雄性Wistar大鼠按照随机数字表法分为NS组、N＋6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine，6-OHDA）、PX＋6-OHDA、GDX＋6-OHDA、PX＋GDX＋6-OHDA5组，每组16只。术后60d，于大鼠中脑黑质致密部（substantia nigra pars compacta，SNc）、腹侧被盖区（ventral tegumental area，VTA）注入6-OHDA，14d后处死取材。HE染色观察胶质细胞增生情况，胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）染色观察星形胶质细胞数量，Tunel染色观察细胞凋亡数量，免疫组化SP法检测酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）阳性细胞和纤维及凋亡相关蛋白Bax、Bcl2的变化。结果（1）SNc、VTA胶质细胞增生数按照组Ns、N＋6。OHDA、PX＋6．OHDA、GDX＋6．OHDA、PX＋GDX＋6-OHDA顺序依次增加（HE染色：Hc=280．178，P〈0．01；Hc=334．260，P〈0．01）（GFAP染色：Hc=367．081，P〈0．01；Hc=376．049，P〈0．01）；（2）SNc、VTA细胞凋亡数按照组NS、N＋6．OHDA、PX＋6-OHDA、GDX＋6-OHDA、PX＋GDX＋6-OHDA顺序依次增加（Hc=344．401，P〈0．01；Hc=326．198，P〈0．01）；（3）SNc、VTA TH（＋）阳性细胞数按照组NS、N＋6-OHDA、PX＋6-OHDA、GDX＋6-OHDA、PX＋GDX＋6-OHDA顺序依次显著减少（Hc=366．532，P〈0．01；Hc=372．565，P〈0．01）；（4）SNc、VTATH（＋）阳性细胞和纤维灰度值按照组NS、N＋6-OHDA、PX＋6-OHDA、GDX＋6-OHDA、PX＋GDX＋6-OHDA顺序依次增加（F=517．239，P〈0．01；F=526．758，P〈0．01）；（5）Bax表达：NS组弱阳性，N＋6-OHDA组阳性，余三组强阳性；Bcl2表达：各组均弱阳性。结论PX、GDX显著加重6-OHDA神经毒性，GDX作用大于PX，PX＋GDX作用最强。