牙鲆变态早期cDNA文库的构建和parvalbumin基因的克隆

在前期的研究中,克隆到牙鲆变态早期和变态前差异表达的parvalbumin基因片断cDNA。为了克隆parvalbumin基因的全长cDNA,构建了变态早期(孵化后23d仔鱼)牙鲆头部的全长cDNA文库,并对文库的滴度和插入片段大小进行了评估。同时采用锚定PCR法从cDNA文库筛选出parvalbumin基因的全长cDNA。结果表明,所构建的牙鲆变态早期头部cDNA文库的滴度为1.2×106PFU·mL-1,插入片段的平均长度为1000bp左右。parvalbumin基因的全长cDNA的长度为603bp,编码109个氨基酸,含有两个EF手型钙离子结合域:DQDGSGFIEEEEL(52～64)和DSDGDGKIGVEEF(91～103),以及一个ATP/GTP结合位点模序:ACGLAGKS(33～40),是一种典型的钙离子结合蛋白。通过parvalbumin基因氨基酸序列的同源比较分析表明,牙鲆parvalbumin基因是比较保守的蛋白,与其它鱼类享有61.5%～68.8%序列同源。系统分析表明,牙鲆的parvalbumin基因与狭鳕(Theragrachalcogramma)最为接近。

Calbindin和Parvalbumin在C57BL/6J kit基因突变小鼠听觉传导通路中的表达

目的：观察钙结合蛋白（CB）和小清蛋白（PV）在C57BL/6J野生型小鼠与kit基因突变型小鼠（kit＋/kitW-2Bao）听觉传导通路上的表达。方法：取kit突变型小鼠和野生型小鼠各6只,水合氯醛腹腔注射麻醉,经心脏灌流固定,取大脑进行冠状位冰冻切片。经免疫组织化学染色,观察CB和PV两种蛋白在小鼠听觉传导通路上的表达差异。结果：PV在野生型小鼠的腹侧耳蜗前核（AVCN）、腹侧耳蜗后核（PVCN）、下丘（IC）以及听皮层（AC）均有明显表达。CB在野生型小鼠的PVCN和斜方体核（Tz）有明显表达,在AC仅在2-3层有极少量表达。kit基因突变引起PV在PVCN、IC和AC的表达减少（P〈0.01）,而Tz的表达增加（P〈0.01）。CB在基因突变小鼠PVCN表达消失,AC的表达增加（P〈0.01）。结论：PV和CB在野生型和突变型小鼠的听觉传导通路的表达存在明显差异。kit基因突变可引起PVCN、IC、Tz和皮层的PV表达变化,PVCN、AC的CB表达变化,表明kit基因突变对听觉通路高级中枢功能活动有一定的影响。

紫红笛鲷过敏原小清蛋白基因克隆及序列分析

目的克隆紫红笛鲷(Lutianus argentimaculatus)过敏原小清蛋白(parvalbumin)基因。方法采用生物信息学方法对多种鱼的小清蛋白基因进行序列性比对,根据序列保守区域设计并合成简并性引物,通过实时(RT)-PCR和3′cDNA末端快速扩增RACE技术克隆紫红笛鲷小清蛋白的全长基因,并进行序列分析。结果获得紫红笛鲷全长608 bp的新基因,开放阅读框为330个碱基,编码109个氨基酸,经分析该蛋白分子量约为11.5kD,等电点为4.35。序列分析结果显示所克隆的基因与其他鱼类过敏原小清蛋白基因有很高的同源性。结论成功克隆出紫红笛鲷过敏原小清蛋白基因(登录号为:EF591789)。

痛温觉和本体觉传入纤维在小鼠脊髓内的不同发育特点(英文)

本研究通过采用钙基因相关肽(CGRP)和小牛白蛋白(PV)分别标记胚胎15d(E15)到生后3d(P3)小鼠脊髓的痛温觉和本体觉两种初级传入纤维,观察了这两种纤维在小鼠脊髓内投射和终止的发育变化。结果显示:CGRP样免疫阳性(LI)纤维最早于E16出现在脊髓背角浅层,并在E17和E18时逐渐向背角外侧和深层终止。在出生后,CGRPLI纤维在背角的分布特点无明显变化,但是在背角浅层的纤维数量进一步增加,分支状态更为复杂。另外,还在E16时开始出现向对侧脊髓背角发出侧支投射的CGRP-LI纤维,至生后早期,向对侧投射的纤维数量增多。PVLI纤维最早于E15进入脊髓灰质。E16时,已有较多的PVLI纤维到达中间带灰质和腹角。随着发育阶段的增长,脊髓腹角内PVLI本体觉纤维和终末的数量和密度逐渐增加,并于生后早期(P0P3)时达到最高水平。本体觉传入纤维的终末在E17时开始与脊髓腹角内的运动神经元形成密切的接触。本实验结果表明痛温觉和本体觉传入纤维在脊髓内的终止形成于小鼠胚胎晚期和生后早期,并具有时空特异性。这为深入理解感觉信息在脊髓传递和调节的形成过程提供了依据。