荚膜甲基球菌蛋白遗传毒性研究和被动皮肤过敏试验

荚膜甲基球菌蛋白(Methylococcus capsulatus bacteria meal,MBM)拟开发为新饲料原料。本研究旨在通过遗传毒性研究和被动过敏试验评价其毒理学安全性,为其未来的应用奠定基础。本研究包括四个试验:鼠伤寒沙门氏菌回复突变(Ames)试验采用平板掺入法,每皿剂量在0.625~10.000 mg范围内,采用TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535五种菌株进行回复突变试验;小鼠骨髓细胞微核试验和精子畸形试验均设2500、5000、10000 mg/kg三个MBM剂量组,微核试验采用30 h两次给药法,精子畸形试验连续染毒5 d,分别在既定的时间采样制片;大鼠被动皮肤过敏试验设250、500、1000 mg/kg三个MBM剂量组,制备抗血清后背部皮内注射致敏,24 h和/或48 h后进行抗原激发,考察蓝色反应斑直径。所有试验均根据要求设置阴性、阳性对照组。结果表明:在有或无代谢活化系统结果(S9)时,MBM的鼠伤寒沙门氏菌回复突变(Ames)试验结果均为阴性;小鼠骨髓细胞微核和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠皮肤被动过敏试验结果为阴性。说明在设置的试验系统和剂量下MBM未显示遗传毒性和潜在的致敏性。

豚鼠被动皮肤过敏试验条件研究

目的探讨豚鼠被动皮肤过敏(PCA)试验的最佳条件(致敏阳性物质、时间)。方法采用卵白蛋白(ova,0.4%)和牛血清白蛋白(BSA,1%)为PCA抗原,分别于不同激发时间(4 h和24 h)对不同生产厂家(潍坊圣诺实验动物养殖有限公司、青岛康大生物科技有限公司、济南金丰实验动物有限公司,简称圣诺、康大、金丰)的豚鼠进行PCA试验,记录蓝斑直径。结果在ova被动致敏4 h后,3个生产厂家的豚鼠产生的蓝斑分界清晰且直径均大于5.0 mm(阳性);在ova被动致敏24 h后,3个生产厂家的豚鼠产生的蓝斑已混在一起、分界不清,无法测量。在BSA被动致敏4 h后,圣诺和康大生产的豚鼠产生的蓝斑分界清晰且直径均大于5.0 mm,金丰生产的豚鼠仅含抗体血清(1∶2、1∶4,V/V)的蓝斑直径大于5.0 mm;在BSA被动致敏24 h后,金丰生产的豚鼠的蓝斑分界清晰且直径大于5.0 mm,圣诺和康大生产的豚鼠产生的蓝斑已混在一起、分界不清,无法测量。结论豚鼠PCA中首选0.4%ova溶液作为试验抗原时致敏时间宜为4 h。

玉屏风颗粒治疗过敏性鼻炎的实验研究

目的观察玉屏风颗粒(黄芪、白术和防风)治疗过敏性鼻炎的药效作用。方法建立卵蛋白致大鼠及豚鼠过敏性鼻炎模型,并观察玉屏风颗粒对过敏性鼻炎症状的改善作用;通过大鼠被动皮肤过敏实验测定IgE效价,并观察药物对大鼠鼻黏膜病理学变化的影响。结果 1.对过敏性鼻炎大鼠连续用药7 d,大鼠IgE抗体水平降低,抗血清样本呈阴性;连续用药14 d,可以明显改善大鼠过敏鼻炎症状,与模型组比较P<0.01。2.对豚鼠过敏性鼻炎模型连续给药10 d后,玉屏风颗粒组症状好转率﹥80%;玉屏风颗粒治疗组鼻黏膜的嗜酸细胞增多,鼻黏膜溃疡、腺体增生以及充血水肿等病理学改变得到明显改善(P<0.05)。结论玉屏风颗粒对过敏性鼻炎大鼠和豚鼠具有良好的抗过敏作用。

蝉蜕的免疫抑制和抗过敏作用

蝉蜕可减轻小鼠免疫器官重量,明显降低单核巨噬细胞系统的吞噬能力,显著抑制小鼠耳异种PCA和大鼠颅骨骨膜肥大细胞税颗粒.对DNCB所致小鼠耳迟发型超敏反应亦具有明显抑制作用。

不同品系大鼠对天花粉蛋白诱导被动皮肤过敏差异性的比较研究

目的比较SD、Wistar和F344三种品系大鼠对天花粉蛋白诱导的被动皮肤过敏(Passive cutaneous ana-phylaxis,PCA)反应的差异性。方法选用SD、Wistar和F344三种品系大鼠,用天花粉蛋白为致敏原,以PCA反应时出现蓝斑的直径及蓝斑OD值变化率作为判别标准,进行大鼠同种或小鼠异种PCA试验。结果大鼠同种PCA试验显示,每只大鼠注射天花粉蛋白0.9 mg后,三种品系大鼠PCA反应均为阳性,蓝斑直径大小及蓝斑OD值变化率从大到小依次为:SD、F344大鼠>Wistar大鼠;小鼠异种PCA试验显示,耳廓皮内分别注射三种品系大鼠天花粉蛋白抗血清后,小鼠异种PCA反应均为阳性,耳廓蓝染OD值变化率从大到小依次为:SD大鼠抗血清组>F344大鼠抗血清组>Wistar大鼠抗血清组。结论三种品系大鼠对天花粉蛋白的敏感性存在差异,其中以SD大鼠最为敏感。

大鼠被动皮肤过敏反应实验条件的优化

目的通过卵白蛋白（OVA）致敏大鼠优化被动皮肤过敏反应（PCA）的实验条件。方法 1-2月龄SD大鼠ip给予OVA（每只0.2,1.0和5.0 mg）与弗氏完全佐剂的混合乳液,隔日1次,共3次,进行致敏。分别于末次致敏后1,3,5,7,10,12,14,16和18 d用ELISA检测血清总Ig E（T-Ig E）水平和OVA特异性Ig E（OVA-s Ig E）水平。大鼠致敏后12-16 d制备致敏血清。大鼠皮内注射致敏血清被动皮肤致敏后,于0.5,1.5,3,6,12,24,36,48和60 h后iv给予同等剂量OVA和伊文思蓝激发,于激发后10,30和60 min测量大鼠皮肤蓝斑直径。结果 OVA致敏大鼠血清T-Ig E和OVA-s Ig E水平分别于末次致敏后3-7 d和12-16 d达高峰;在OVA 0.2-5.0 mg剂量范围内,OVA-s Ig E与T-Ig E水平无明显关联性;OVA 1.0和5.0 mg致敏大鼠血清能诱发大鼠PCA;皮内注射致敏血清0.5-3 h后激发的皮肤蓝斑形态规则,范围最大;激发后30-60 min检测的皮肤蓝斑范围大,界线清晰,形状规则,且着色较深。结论 PCA优化条件为1-2月龄大鼠隔日每只ip给予OVA 1.0-5.0 mg,共致敏3次,致敏后12-16 d制备致敏血清。在被动皮肤致敏0.5-3 h后,进行激发,30-60 min后检测皮肤内层蓝斑直径。

杨梅素对小鼠被动皮肤过敏反应的影响

目的研究杨梅素的抗过敏作用。方法采用小鼠同种、异种被动皮肤过敏反应(PCA)、右旋糖酐致小鼠全身瘙痒反应和2,4-二硝基氯苯(DNCB)所致小鼠耳廓皮肤迟发型超敏反应(DTH)实验,探讨杨梅素的抗过敏作用。结果杨梅素显著抑制小鼠同种、异种被动皮肤过敏反应和右旋糖酐引起的小鼠瘙痒反应,并能抑制DNCB诱导的DTH。结论杨梅素具有抗过敏作用,机制可能与抑制Ⅰ、Ⅳ型变态反应有关。

聚乙二醇化天花粉蛋白抗生育活性及其过敏反应试验

目的:分析聚乙二醇修饰对天花粉蛋白抗生育活性和引起过敏反应的影响。方法:妊娠11-12d小鼠静脉给药,48h后解剖,计算引产率;豚鼠药物致敏5次,末次致敏14d、21d攻击,观察0．5h内过敏反应情况;大鼠皮内接种抗血清,24h后抗原加染料攻击,观察染料渗出情况。结果:与天花粉蛋白相比,聚乙二醇化天花粉蛋白在较低浓度(0．5mg/kg)就可达到引产目的(引产率>85％),且引起豚鼠和大鼠过敏反应的程度较低。结论:聚乙二醇化修饰能提高天花粉蛋白的体内活性,降低其免疫原性,在临床中有广阔的应用前景。

氧化苦参碱对Ⅰ～Ⅳ型过敏反应的抑制作用

氧化苦参碱腹腔注射可明显抑制大鼠被动皮肤过敏反应(PCA),管内给药可显著抑制亲同种细胞抗体介导的肥大细胞脱颗粒;对反相皮肤过敏反应(RCA),Arthus反应及绵羊红细胞(SRB C)诱导的迟发型过敏反应(DTH)亦有显著抑制作用。

银杏甲素的抗过敏药理作用

对银杏甲素进行了抗过敏药理实验研究,结果表明,银杏甲素20mg/kg和40mg/kg能阻止过敏介质释放及肥大细胞的脱颗粒作用,并能直接拮抗过敏介质引起的豚鼠回肠平滑肌的收缩反应。

藜子70%醇提物对变态反应的抑制作用

目的 :观察藜子醇提物对速发型及迟发型变态反应的作用 ,探讨其止痒作用机制及其作为地肤子代用品使用的合理性。方法 :大鼠或小鼠皮内注射大鼠抗卵白蛋白抗血清诱导被动皮肤过敏反应 ,以SRBC或PC诱导小鼠迟发型变态反应。体外试验以3H TdR掺入法观察小鼠淋巴细胞增殖反应。结果 :藜子 70 %醇提物 40 0mg/kgig可明显抑制大鼠同种被动皮肤过敏反应及颅骨膜肥大细胞脱颗粒 ;2 0 0、40 0mg/kgig可减轻小鼠异种耳被动皮肤过敏反应及组胺所致足肿胀。藜子醇提物 40 0mg/kg于抗原攻击后给药可抑制SRBC或PC诱导的小鼠迟发型变态反应 ,而在抗原攻击前给药则无明显影响。体外试验藜子醇提物 1 2 5、2 5 0 μg/ml对小鼠脾淋巴细胞增殖无明显影响 ,当浓度升至 5 0 0 μg/ml时则呈明显的抑制作用。 结论 :藜子的止痒功效可能与其对速发型变态反应的抑制作用有关 ;藜子抑制Ⅰ、Ⅳ型变态反应的作用特征与地肤子十分相似 ,提示其可作为后者的代用品用于治疗变态反应性疾病。

热毒宁注射液及其降解产物的安全性研究

目的评价热毒宁注射液(金银花、栀子及青蒿)及其降解产物的过敏性和溶血反应。方法选用豚鼠、大鼠和新西兰兔静脉注射热毒宁注射液及其降解产物后观察豚鼠主动全身过敏反应、大鼠被动皮肤过敏反应和新西兰兔溶血反应的影响。结果在实验剂量下,热毒宁注射液及其降解产物对豚鼠的主动全身过敏反应、大鼠的皮肤过敏反应及溶血试验均为阴性。结论热毒宁注射液及其降解产物的动物实验表明临床用药安全。

莲必治注射液的过敏性研究

目的:研究两种不同纯度的莲必治注射液在被动皮肤过敏试脸(passive cutaneous anaphylaxis,PCA)和全身主动过敏试验(active systemic anaphylaxis,ASA)中是否有过敏反应。方法:按照《中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光变态反应)研究的技术指导原则》的试验方法对两种不同纯度的莲必治注射液进行被动皮肤过敏试验和全身主动过敏试验研究。结果:被动皮肤过敏试验中两种莲必治液均有过敏反应。在全身主动过敏试验中,莲必治A高剂量组有2只动物出现弱阳性,而莲必治B高剂量组1只出现弱阳性,5只出现阳性反应,2只出现过敏反应的极强阳性反应,其他未见过敏反应。结论:莲必治注射液所引发的过敏反应可能与其所含的杂质有关。

胸腺免疫抑制提取物对Ⅰ型变态反应的影响

观察了胸腺免疫抑制提取物（１）对Ⅰ型变态反应的影响。结果表明，１用量８ｍｇ／ｋｇ以上能明显缩短大鼠被动皮肤过敏反应的蓝斑直径。还能抑制致敏豚鼠离体回肠平滑肌的过敏性收缩，其半数抑制浓度（ＩＣ５０）为４４６．７ｍｇ／Ｌ。

当归饮子对小白鼠被动皮肤过敏反应及血清白三烯B4水平的抑制作用研究

目的:观察当归饮子对小白鼠被动皮肤过敏反应(PCA)及血清白三烯B4(LTB4)水平的抑制作用。方法:采用随机对照法,将NIH小鼠致敏后,分为致敏对照组、当归饮子高剂量组、当归饮子低剂量组、咪唑斯汀组、孟鲁司特组、氯雷他定组、地塞米松组。检测各组对小白鼠被动皮肤过敏反应的抑制率、血清中白三烯B4的水平及二者的相关性。结果:当归饮子高剂量组、当归饮子低剂量组、咪唑斯汀组、孟鲁司特组、氯雷他定组、地塞米松组对小鼠PCA均有明显的抑制作用(P<0.01);地塞米松组对小白鼠PCA的抑制作用强于其他各组(P<0.01);当归饮子高剂量组、咪唑斯汀组、氯雷他定组对小鼠PCA的抑制作用强于当归饮子低剂量组和孟鲁司特组(P<0.01)。当归饮子高剂量组、当归饮子低剂量组、咪唑斯汀组、孟鲁司特组、地塞米松组血清LTB4水平明显低于致敏对照组、氯雷他定组(P<0.05);当归饮子低剂量组、咪唑斯汀组、地塞米松组对小鼠PCA的抑制率与小鼠血清中LTB4水平均呈直线负相关(P<0.05)。结论:当归饮子对小白鼠被动皮肤过敏反应及血清白三烯B4水平均有明显的抑制作用,二者具有相关性。对LTB4的抑制证明当归饮子对慢性荨麻疹迟发相过敏反应具有抑制作用。

IgG型抗登革病毒NS1抗体介导被动系统性过敏反应的研究

目的:明确登革病毒Ⅰ型(Dengue virus serotype 1,DENV1)非结构蛋白1(Non-structure protein 1,NS1)与其Ig G型抗体的免疫复合物(Immune complexes,ICs)能否诱导机体产生被动系统性过敏反应(Passive systmic anaphylaxis,PSA),为阐明登革出血热与登革休克综合征(DHF/DSS)的发病机制提供依据。方法:从本课题组现有的多株抗NS1单克隆抗体中,筛选能够与纯化NS1结合并形成免疫复合物进而诱导小鼠产生被动系统性过敏反应(PSA)和被动皮肤过敏反应(Passive cutaneous anaphylaxis,PCA)的单抗或单抗组合;并观察体内氯化钆(Gd Cl_3)和血小板活化因子受体(PAFR)拮抗剂CV-3988处理对PSA的影响。结果:用亲和层析纯化的DENV1 NS1,从本室制备的20株Ig G型抗DENV1 NS1单抗中仅筛选出2组单抗组合制备免疫复合物(NS1-Ig G ICs)能成功诱导小鼠的PCA和PSA反应,而其他抗体或抗体组合并无此反应;用Gd Cl_3抑制单核巨噬细胞或CV-3988阻断PAFR处理可抑制或减轻小鼠PSA反应。结论:DENV1 NS1结合两个Ig G型单抗组合的免疫复合物可诱发PSA与PCA,但并非所有的抗NS1单抗或抗体组合与NS1结合都能诱发PSA,推测与识别表位不同有关;初步证明DENV1 NS1-Ig G ICs诱发PSA的主要效应细胞是巨噬细胞,主要效应分子是PAF。

古尼拟青霉药理作用研究 2.抗炎作用及对免疫过程的影响

本文报道古尼拟青霉(paecilomyces gunnii)的抗炎作用及对免疫过程的作用。结果表明:古尼拟青霉能明显地抑制小鼠背部皮肤、耳廓及腹腔毛细血管通透性,对大鼠后足(左右)蛋清性肿胀及大鼠肉芽组织增生均有抑制作用;对大鼠、小鼠被动皮肤过敏反应(PCA)及小鼠主动皮肤过敏反应(ACA)均有抑制作用。

苍耳子对速发型过敏反应的抑制作用

苍耳子 70 %醇提物 (5 0 0 ,10 0 0mg kg)剂量依赖性抑制compound 4 8 80引起的小鼠过敏性休克、卵白蛋白所致大鼠被动皮肤过敏反应 ;在体外 ,苍耳子 (2 0 ,5 0 μg ml)浓度依赖性减少大鼠肥大细胞释放组胺和 β -氨基己糖酶 ;苍耳子 (5 0 0 ,10 0 0mg kg)对组胺或 5 -羟色胺所致大鼠皮肤反应无明显作用。上述结果表明苍耳子通过稳定肥大细胞膜 ,减少组胺等过敏介质的释放 。

变应性鼻炎变应原皮肤点刺试验结果与症状和体征相关性分析

目的探讨变应性鼻炎(AR)变应原皮肤点刺试验(skin prick test,SPT)结果与症状和体征的关系。方法对188例SPT阳性AR患者,采用视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分和症状评分对鼻部、眼部及胸部症状共12项进行评分,并对鼻腔及眼部检查进行体征评分,分析上述指标间的相关性和差异性。结果①188例AR患者中,最常见阳性变应原为屋尘螨104例次(21.2%)和粉尘螨101例次(20.6%),最常见变应原阳性强度等级为"+++"107例(56.9%);②体征评分与症状总评分、体征评分与VAS总评分均无显著相关性(r=0.034,P>0.05;r=0.088,P>0.05);③变应原阳性等级"++"、"+++"、"++++"3组之间症状评分、VAS评分及体征评分均无显著性差异。结论临床上对AR患者进行病情评估和治疗方式选择时应结合症状、体征及SPT结果三者进行分析。

常用中药注射剂致敏性研究

目的:研究中药注射剂的过敏反应,测定致敏动物血清免疫球蛋白(IgE)抗体含量,观察其与过敏反应是否具有相关性,为提高过敏反应实验预测的准确性提供实验依据。方法:选用多种中药注射剂进行被动皮肤过敏实验(PCA)实验和类过敏反应研究,用ELISA法对致敏动物血清进行血清IgE水平检测。结果:双黄连注射液(SHL)、清开灵注射液(QKL)、鱼腥草注射液(YXC)、血塞通注射液(XST)、葛根素注射液(GGS)、穿琥宁注射液(CHN)的PCA实验结果均为阴性,刺五加注射液(CWJ)的PCA实验结果为阳性。SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ注射液组血清总IgE水平与生理盐水组无明显差异;SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ注射液均引起了豚鼠的类过敏症状。结论 :SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ均能引起豚鼠的类过敏反应,其过敏反应的发生与血清IgE抗体水平无相关性。