多重耐药鲍曼不动杆菌中ponA表达及其对碳青霉烯类抗生素诱导反应观察

目的观察多重耐药鲍曼不动杆菌(MDR-AB)中青霉素结合蛋白1a(PBP1a)基因ponA表达情况,以及ponA对碳青霉烯类抗生素诱导的反应。方法收集MDR-AB菌株19株,采用PCR法检测ponA基因表达情况并进行测序。将MDR-AB与SDF ponA基因翻译的氨基酸序列进行同源建模,用分子可视化工具软件作结构相似性分析,并与鲍曼不动杆菌抗生素敏感株(SDF)进行比较。分别用三种碳青霉烯类抗生素(亚胺培南、美罗培南、多尼培南)对MDR-AB进行诱导,qRT-PCR检测ponA表达情况并进行测序。结果19株MDR-AB均表达ponA基因,测序结果与Genbank中ATCC 17978标准菌株ponA序列显示98%同源。MDR-AB株与SDF株的ponA基因翻译氨基酸序列存在4处氨基酸变异,为第23位丝氨酸>丙氨酸、第47位丙氨酸>天冬氨酸、第110位异亮氨酸>亮氨酸、第128位谷氨酸>天冬氨酸;MDR-AB株与SDF株的ponA基因编码蛋白构象存在明显差异。亚胺培南组、美罗培南组、多尼培南组ponA基因相对表达量均低于未处理组(P均<0.05);抗生素诱导后的菌株未发现ponA基因突变。结论MDR-AB中存在ponA基因表达,其翻译氨基酸序列及编码PBP1a蛋白构象均不同于SDF;碳青霉烯类抗生素诱导可导致MDR-AB中ponA基因表达下调。

肺炎链球菌pbp2b和pbp1a基因突变与青霉素耐药的相关性研究

目的探讨耐青霉素肺炎链球菌pbp2b和pbp1 a基因的突变与青霉素耐药的关系,为明了肺炎链球菌的耐药性变异机制,防治其感染提供实验依据。方法从呼吸道感染患儿痰标本中分离肺炎链球菌163株,液体培养基连续稀释法测定其对青霉素的最小抑菌浓度(M IC),套式聚合酶链反应(nPCR)扩增pbp2b和pbp1 a基因,扩增产物直接DNA测序,所测序列与青霉素敏感株(SPN R6)的基因序列进行比较,并分析其氨基酸结构的改变。结果 163株肺炎链球菌中检出青霉素敏感菌75株,中度敏感17株,青霉素耐药菌71株(44%)。耐药菌中58株存在pbp2b突变(81.7%),其中,56株为点突变,2株为CCT插入突变;在27株有pbp2b基因突变的B型和C型耐药菌中,21株出现了不同程度的pbp1 a基因突变。PBP2B氨基酸结构改变以苏氨酸变为丙氨酸、精氨酸变为赖氨酸为主,PBP1A以丙氨酸变为苏氨酸、谷氨酸变为天门冬氨酸为主。结论肺炎链球菌的pbp2b和pbp1 a基因突变与对青霉素的耐药性密切相关,PBP2b突变导致低水平耐药;PBP2b和PBP1A突变导致高水平耐药。

泛耐药鲍曼不动杆菌PBP1A、CarO及β-内酰胺酶的编码基因分析

目的了解一株泛耐药鲍曼不动杆菌（js01株）可能存在的β-内酰胺类药物耐药机制。方法对自2011年12月宁波市第一医院住院患者的痰样本js01株分离，用gyrA和parC基因PCR扩增、测序和BLASTn比对确认菌种。用PCR法分析33种β-内酰胺酶基因（13种A类酶基因、10种B类酶基因、2种C类酶基因、8种D类酶基因）和插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测以及CarO膜孔蛋白编码基因。再用分段PCR法扩增PBP1A编码基因，双向测序后拼接成全长序列。结果js01株检出β-内酰胺酶TEM-1、ADC-30、OXA-23和OXA-66编码基因。插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测显示ISabal-ADC-30和ISabal—OXA-23为阳性。js01株carO基因序列与鲍曼不动杆菌敏感株（SDF）相比存在有义突变，氨基酸序列一致率为76．0％（189／249），存在3个氨基酸缺失。is01株PBP1A编码基因序列与SDF株相比存在有义突变，氨基酸序列的一致率为99．6％（848／851），存在3个氨基酸变异，但js01株PBP1A蛋白分子立体结构比SDF株丢失2个螺旋结构。结论本株鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药主要与该菌株管家基因（PBP1A、CarO编码基因）突变与可移动遗传元件介异的β-内酰胺酶编码基因有关。

肺炎链球菌青霉素耐药相关基因研究

目的 了解我国肺炎链球菌 (Streptococcuspneumoniae,Sp)青霉素耐药相关基因的存在与突变状况。方法 设计、优化pbp1a、TEM基因PCR检测体系及扩增产物全自动DNA序列测定体系 ,对 3株分离自苏州地区患儿呼吸道的Sp(青霉素低耐株SR0 17、SR0 19;青霉素敏感株SR0 2 8,3株均苯唑青耐药 ,且SHV基因均为阴性 )进行检测 ,测得的pbp1aDNA序列与SpR6株 (青霉素敏感株 )DNA序列相比较 ;测得的TEM基因DNA序列与同院原分离的产超广谱 β内酰胺酶大肠埃希菌中检出的TEM 1DNA序列及已在GenBank登录的TEM基因序列相比较。结果 SR0 17、SR0 19、SR0 2 8之pbp1a基因均有突变 ,突变率为 2 1%、2 1%、0 .4 %。SR0 19株TEM基因阴性 ,SR0 17和SR0 2 8TEM基因阳性 ,测得DNA序列分别被证实为TEM 12 9和TEM 1,前者且是新型TEM ,作为新发现的菌种耐药基因均已登录美国国立生物信息中心GenBank ,登录号AY4 5 2 6 6 2、AY392 5 31;二者DNA序列与产超广谱 β内酰胺酶大肠埃希菌中检出的TEM高度同源 (99.7%、99.8% )。结论 我国Sp青霉素耐药可能存在产 β内酰胺酶 (获得TEM基因 )和pbp基因突变两种机制 ,TEM耐药质粒可能在不同种菌株间传播。