50株肺炎链球菌pbp2B基因突变与苯唑西林药敏相关性分析

目的 探讨我国耐青霉素肺炎链球菌 (Streptococcuspneumoniae,SPN)pbp2B基因的突变与苯唑西林药敏表型相关性。方法 对呼吸道感染患儿痰标本中分离到的 5 0株肺炎链球菌 ,用K B法进行苯唑西林药物敏感试验 ,用套式聚合酶链反应 (nPCR)扩增pbp2B基因 ,对PCR产物直接进行DNA测序 ,测得序列与SPNR6株 (青霉素敏感株 )序列 [GenBank登录号 :NC 0 0 30 98]相比较。结果 2 9株无突变 ,2 1株有突变 ;突变的 2 1株中 2 0株为点突变 ,可分A、B、C、D 4个类型 ,分别占 71 4 %、14 3%、4 8%、4 8% ;另 1株为E型 ,除有点突变外 ,并有CCT碱基插入 ;无突变的 2 9株SPN菌中苯唑西林敏感率为 86 2 % ;有突变的 2 1株中苯唑西林敏感率为 9 5 % ,二者相比较差异有显著性 (P <0 0 0 1) ;5种突变类型均存在SPN菌对苯唑西林耐药。结论 SPN分离株pbp2B基因突变与其苯唑西林耐药性相关 。

新生儿肺炎链球菌苯唑西林耐药与pbp2B基因突变分析

目的了解新生儿肺炎链球菌(streptococcuspneumoniae,SP)青霉素耐药基因突变及体外苯唑西林耐药状况。方法对分离自新生儿呼吸道的20株肺炎链球菌用纸片扩散法(K-B法)进行青霉素耐药性试验,用套式聚合酶链反应(nPCR)扩增PbP2B基因,对PCR产物进行DNA测序。结果20株肺炎链球菌体外苯唑西林耐药,耐青霉素PbP2B基因突变为点突变,分A、B两类各占95%和5%。结论新生儿肺炎链球菌耐青霉素株pbp2B基因突变类型与DUPLESSIS等报道的不完全相同应引起高度重视。

肺炎链球菌pbp2b和pbp1a基因突变与青霉素耐药的相关性研究

目的探讨耐青霉素肺炎链球菌pbp2b和pbp1 a基因的突变与青霉素耐药的关系,为明了肺炎链球菌的耐药性变异机制,防治其感染提供实验依据。方法从呼吸道感染患儿痰标本中分离肺炎链球菌163株,液体培养基连续稀释法测定其对青霉素的最小抑菌浓度(M IC),套式聚合酶链反应(nPCR)扩增pbp2b和pbp1 a基因,扩增产物直接DNA测序,所测序列与青霉素敏感株(SPN R6)的基因序列进行比较,并分析其氨基酸结构的改变。结果 163株肺炎链球菌中检出青霉素敏感菌75株,中度敏感17株,青霉素耐药菌71株(44%)。耐药菌中58株存在pbp2b突变(81.7%),其中,56株为点突变,2株为CCT插入突变;在27株有pbp2b基因突变的B型和C型耐药菌中,21株出现了不同程度的pbp1 a基因突变。PBP2B氨基酸结构改变以苏氨酸变为丙氨酸、精氨酸变为赖氨酸为主,PBP1A以丙氨酸变为苏氨酸、谷氨酸变为天门冬氨酸为主。结论肺炎链球菌的pbp2b和pbp1 a基因突变与对青霉素的耐药性密切相关,PBP2b突变导致低水平耐药;PBP2b和PBP1A突变导致高水平耐药。

基因检测pbp2b ply和lytA诊断儿童肺炎链球菌脑膜炎应用价值研究

目的比较青霉素结合蛋白2b(pbp2b)与自溶素(ply)、溶血素(lyt A)基因和脑脊液细菌培养在诊断国内儿童化脓性脑膜炎中肺炎链球菌感染及青霉素耐药性方面的情况,并了解肺炎链球菌青霉素结合蛋白基因型特征。方法 2006年1月至2009年9月在北京儿童医院感染内科临床严格诊断为细菌性脑膜炎患儿161例,用pbp2b及其他2个肺炎链球菌种特异的基因(ply、lyt A)巢式PCR法来检测细菌性脑膜炎患儿脑脊液中的肺炎链球菌,对不同方法结果进行比较。对其中pbp2b阳性的标本进行青霉素敏感性PCR(分别用耐药、敏感的引物进行PCR检测)、测序,并与青霉素耐药表型进行比较和评估。结果 161例中不同方法确诊的肺炎链球菌共有25例,3种基因检测均阳性的共有11例。pbp2b检测阳性16例,lyt A检测阳性16例,ply检测阳性14例。脑脊液培养阳性9例。pbp2b阳性的16例标本中,青霉素敏感和青霉素耐药基因型各占一半。16例中4例有培养结果,其中3例基因型和耐药型相符合。敏感性测定PCR和测序结果相一致。测序结果与NCBI基因库(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)相比,有2例为新的氨基酸序列型,但是无新的氨基酸点突变发生。由培养结果检测的肺炎链球菌脑膜炎的青霉素耐药率为66.67%(6/9),敏感性PCR检测的肺炎链球菌脑膜炎的青霉素耐药率为50%(8/16),包括脑脊液培养阴性的病例。结论 3种基因检测的敏感度均高于传统的脑脊液培养,其中pbp2b可以作为一个推荐的基因位点筛查肺炎链球菌感染,并在一定程度上预测青霉素耐药性情况。

肺炎链球菌pbp2B基因突变与β-内酰胺类抗生素耐药相关性的研究

目的:探讨肺炎链球菌临床菌株pbp2B基因突变与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性。方法:采用二倍微量稀释法检测23株肺炎链球菌临床菌株对5种β-内酰胺类抗生素的最低抑菌浓度(MIC)。采用PCR扩增pbp2B基因片段,T-A克隆后测序。根据药敏试验及测序结果,分析pbp2B基因片段突变与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性。结果:43.5%(10/23)肺炎链球菌临床菌株对5种β-内酰胺类抗生素敏感,其余56.5%(13/23)菌株耐药,其中有两株高度耐药。β-内酰胺类抗生素敏感菌株pbp2B基因片段仅有2个氨基酸发生变异,且不位于162～206和215～265区域。对β-内酰胺类抗生素低、中水平耐药菌株仅在pbp2B基因片段162～206区域出现氨基酸突变,162～206和215～265区域均有氨基酸突变的菌株对β-内酰胺类抗生素高度耐药。结论:本地区肺炎链球菌临床菌株对β-内酰胺类抗生素有很高的耐药率。肺炎链球菌pbp2B基因片段162～206区域突变仅引起低、中水平β-内酰胺类抗生素耐药性,高度耐药性则与215～265区域突变密切相关。