恶性疟原虫FCC-1/HN株pcDNA3-EBA175/HRPⅡ重组质粒直接注射小鼠骨骼肌的体内表达

为观察恶性疟原虫 FCC- 1/ HN株 pc DNA3- EBA175 / HRP 重组质粒经肌肉途径接种后在宿主体内的表达。BAL B/ c小鼠分为 3组 ,1组 (实验组 )经后腿股四头肌注射重组质粒 pc DNA3- EBA175 / HRP 10 0 μg;2组 (实验对照组 )注射空白质粒 pc DNA3 10 0 μg;3组 (正常对照组 )注射 PBS(p H7.4) 10 0 μl。每隔 2 0 d加强注射 ,于第 1次接种后 2 0 d和第 2次接种后 10 d取小鼠双侧股四头肌免疫组化染色 ,于第 3次接种后 40 d取小鼠各组织作聚合酶链反应 (PCR)检测目的基因。结果显示 ,(1) 1组经重组质粒免疫小鼠血清、恶性疟原虫抗原免疫小鼠血清、恶性疟原虫人工合成九肽 HRP 单克隆抗体及抗恶性疟原虫全虫抗原单克隆抗体作用 ,免疫组化染色后 ,在注射部位肌肉组织的肌膜、肌间隙处见到褐色分泌颗粒 ;1组未注射侧肌肉组织、2组及 3组均未见褐色颗粒。 (2 )采用PCR从 1组肌肉、心脏、肝脏、肺脏和肾脏组织扩增出目的基因 EBA175和 HRP ,2组及 3组相应组织均未扩增出目的基因片段。本研究为疟疾多基因

恶性疟原虫FCC—1/HN株EBA—175和HRP─Ⅱ基因片段的体外扩增与克隆

目的构建恶性疟原虫FCC—1／HN株红细胞结合抗原（EBA—175）和富组氨酸蛋白Ⅱ（HRP─Ⅱ）抗原的重组质粒并进行初步鉴定。方法通过聚合酶链反应（PCR）对恶性疟原虫FCC—1／HN株的EBA─175和HRP─Ⅱ基因进行体外扩增，用HindⅢ／BamHI和BamHI／EcoRI分别消化扩增产物，定向克隆pcDNA3载体，转化至感受态大肠杆菌TG1，经抗性筛选和快速凝胶电泳鉴定，再经PCR和酶切鉴定。结果从恶性疟原虫FCC—1／HN株基因组DNA中扩增出EBA—175和HRP─Ⅱ两基因片段并定向插入PCDNA3载体构建重组质粒。结论所获重组克隆含有编码恶性疟原虫FCC—1／HN株EBA—175和HRP—Ⅱ的基因片断。

恶性疟原虫FCC-1/HN株不同期基因重组质粒混合接种小鼠后的免疫反应

寻找有效的抗恶性疟原虫混合基因疫苗 ,探讨其在宿主体内的免疫反应。将恶性疟原虫重组质粒 pc DNA 3-EBA175 / HRP 经骨骼肌途径单独注射或与有性期阶段的重组质粒 pc DNA3- Pfs2 5混合注射免疫 Balb/ c小鼠。对小鼠的骨骼肌进行预处理 ,即于注射前 7d在左后肢股四头肌注射 0 .5 %盐酸布比卡因 5 0μl,注射深度为 2 m m。观察免疫后不同时间点小鼠血清 Ig G抗体滴度、脾淋巴细胞增殖反应、CD4+ / CD8+ T细胞亚群比率和 NK细胞杀伤活性的变化。结果显示 ,pc DNA3- EBA 175 / HRP 单独肌肉注射或与 pc DNA3- Pfs2 5混合肌肉注射免疫小鼠 ,均可见血清 Ig G抗体滴度增高、经恶性疟原虫抗原刺激后的特异性 T淋巴细胞增殖反应增强、CD4+ / CD8+ T细胞比率下降以及 NK细胞杀伤活性增强 ;加强免疫注射机体的免疫反应能增强。提示肌肉注射 DNA疫苗为一有效的免疫途径 ,采用编码恶性疟原虫两个基因的重组质粒单独免疫或与编码不同阶段基因的重组质粒混合免疫小鼠 ,均能诱导明显的体液免疫反应、细胞免疫和