抗血吸虫DNA疫苗pcDNA3／SjHGPRT局部肌肉刺激与全身过敏实验

目的评价日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/Sj HGPRT的安全性。方法同体左右侧自身对比法对3只家兔进行局部肌肉刺激实验,22只豚鼠随机分为4组:无菌生理盐水阴性对照组、牛血清白蛋白阳性对照组、pcDNA3/Sj HGPRT低剂量组、pcDNA3/Sj HGPRT高剂量组,进行全身过敏试验。结果日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/Sj HGPRT对家兔局部肌肉刺激反应轻微,对豚鼠无全身过敏反应。结论日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/Sj HGPRT在该实验条件下安全。

日本血吸虫真核表达质粒pcDNA3/HGPRT的构建及序列测定

目的应用基因工程技术,对日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine-guaninephosphoribosyltransferase,HGPRT)进行亚克隆,试图构建真核重组DNA质粒pcDNA3-HGPRT。方法通过筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,克隆HGPRT基因片段,然后将目的片段亚克隆入真核表达载体pcDNA3。结果成功构建了真核重组DNA质粒pcDNA3-HGPRT,为进一步研究HGPRT的功能奠定了基础。

血吸虫生殖产卵相关基因pcDNA3/Sj SDISP DNA在小鼠体内的组织分布及整合的观察

目的探讨日本血吸虫生殖产卵相关基因DNA在小鼠体内组织分布以及整合到宿主基因组上的可能性。方法将生殖产卵相关基因重组质粒pcDNA3/Sj SDISP经肌注免疫小鼠后,在注射后12h、1w、3w和6w取小鼠各组织,抽提其基因组DNA进行PCR扩增,然后纯化基因组DNA进行PCR扩增,结果经琼脂糖凝胶电泳分析。结果注射后12h,在血液、心、肝、脾、肺、肾及注射部位肌肉中可检测到pcDNA3/Sj SDISP,至第1w,仍可在部分小鼠中检测到,至第3w不再检出。未发现生殖产卵相关基因pcDNA3/Sj SDISP整合入小鼠基因组中。结论肌注pcDNA3/Sj SDISP后,可在组织中广泛分布,但并未持续存在体内。未发现与宿主细胞基因组整合的直接证据。