lncRNA MIR205HG通过调控miR-122-5p促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)MIR205HG对食管鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法:RT-PCR检测食管鳞状细胞癌组织以及癌旁组织中MIR205HG的表达量;CCK-8实验检测MIR205HG对食管鳞状细胞癌细胞Eca-109和TE-10增殖的影响;Western blot实验检测侵袭相关蛋白MMP-1和MMP-9以及血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达水平。结果:结果显示,MIR205HG在食管鳞状细胞癌组织中的表达量显著高于癌旁组织的表达量(P<0.05);与转染对照si-RNA相比,当细胞转染si-MIR205HG时,MIR205HG的表达量显著被抑制(P<0.05);干扰MIR205HG显著抑制食管鳞状细胞癌细胞Eca-109和TE-10的增殖和侵袭(P<0.05);此外,si-MIR205HG促进miR-122-5p的表达,且MIR205HG与miR-122-5p表达量呈负相关(P<0.05);进一步的研究结果表明,抑制miR-122-5p逆转si-MIR205HG对TE-10细胞增殖和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论:MIR205HG能够促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭,其作用机制是通过调控miR-122-5p来实现的,这一结果能够为食管鳞状细胞癌的临床治疗和诊断提供分子基础。

miR122/155在慢性胰腺炎肝损伤中的作用

目的 探讨慢性胰腺炎肝损伤患者血清中miR122/155表达水平及临床意义,并通过动物实验挖掘可能的调节机制。方法 生化分析仪测定血清AST、ALT、DBIL、TBIL、γ-GT、ALP、TBA水平;qPCR法检测血清miR122/155表达;Western Blot法检测小鼠肝组织TLR4/NF-κB表达。结果研究组患者血清AST、ALT、γ-GT、ALP、miR122/155表达水平明显升高(P<0.05),且AST、ALT、ALP与miR122表达呈正相关(P<0.05),AST、γ-GT、ALP和miR155表达呈正相关(P<0.05)。动物实验中,模型组小鼠血清AST、ALP、miR122/155表达升高(P<0.05);同时,模型组肝组织TLR4、NF-κB表达上调(P<0.05)。结论 CP患者可发生肝损伤,这种变化可能与miR122/155调节的TLR4/NF-κB通路激活有关。

乙型肝炎病毒X蛋白通过miR-122调节肝癌细胞增殖及细胞周期的研究

乙型肝炎病毒中的功能蛋白乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)在促进肝细胞恶性改变中起到重要作用,但目前HBx调控肝癌细胞生长的具体机制仍未完全阐明。miR-122是具有抑癌特性的一类miR,在乙肝相关肝癌中表达减少。为了研究HBx通过微小RNA(microRNA,miR)-122调节肝癌细胞增殖及细胞周期的作用,本研究培养肝癌HepG2细胞株并进行分组,NC组转染NC慢病毒载体、HBx组转染HBx慢病毒载体、HBx+NC模拟物组转染HBx慢病毒载体及NC模拟物、HBx+miR-122模拟物组转染HBx慢病毒载体及miR-122模拟物、NC模拟物组转染NC模拟物、miR-122模拟物组:转染miR-122模拟物。通过MTS法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,PCR检测miR-122表达量,western blot检测细胞周期蛋白G1(CyclinG1)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达量。结果显示HBx组细胞的OD值、细胞周期G2/M期比例及细胞中CyclinG1、XIAP、β-catenin的表达量均明显高于NC组(P<0.05),细胞周期G0/G1期、S期比例及细胞中miR-122表达量均明显低于NC组(P<0.05);HBx+miR-122模拟物组细胞的OD值、细胞周期G2/M期比例及细胞中CyclinG1、XIAP、β-catenin的表达量均明显低于HBx+NC模拟物组(P<0.05),细胞周期G0/G1期、S期比例及细胞中miR-122表达量均明显高于HBx+NC模拟物组(P<0.05);miR-122模拟物组CyclinG1、XIAP、β-catenin荧光素酶报告基因的荧光活性明显低于NC模拟物组(P<0.05)。本研究结果充分说明HBx能够增强肝癌细胞的增殖活力及明显加速细胞周期,且该作用部分由miR-122的下调所介导。本研究首次阐明了HBx调节肝癌细胞生长的分子机制,也初步探明了具有抑癌活性的miR-122在肝癌细胞中可能靶向CyclinG1、XIAP、β-catenin等基因。

电脉冲刺激法提高小鼠miR-122表达的研究

目的:电脉冲能够改变细胞膜的通透性,促进外源DNA进入细胞内。通过基因导入仪电脉冲刺激已注入质粒pcDNA3.0-miR-122的小鼠肌肉细胞,检测对小鼠miR-122表达的影响。方法:将扩增得到的pre-miR-122克隆到真核表达载体pcDNA3.0上,构建pcDNA3.0-miR-122表达质粒。利用基因导入仪分别将生理盐水、pcDNA3.0、pcDNA3.0-miR-122质粒DNA导入小鼠腿部肌肉,然后进行电脉冲刺激。qRT-PCR测定各组小鼠血清及肝脏中的miR-122水平,同时检测肝癌组织和经Cecropin XJ处理的肝癌组织中的miR-122水平。结果:基因导入仪电脉冲刺激已注入pcDNA3.0-miR-122的腿部肌肉组织后,小鼠血清和肝脏中miR-122的表达分别提高了23和11倍,经Cecropin XJ处理的小鼠肝癌组织中miR-122的表达比对照高1.6倍。结论:电脉冲刺激能够显著提高小鼠体内miR-122的表达,为探讨miR-122表达对肝癌生长影响的调控作用奠定基础。