池蝶蚌HsPif基因的克隆及表达分析

为了探究池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)酸性基质蛋白Pif基因的基本功能,研究通过RACE-PCR技术首次在池蝶蚌中获得了Pif基因的cDNA全长序列,命名为HsPif,其全长为3457 bp, 5′端非翻译区(5′UTR)为485 bp,3′端非翻译区(3′UTR)为363 bp,开放阅读框(ORF)3072 bp,共编码1023个氨基酸,生物信息学分析结果显示HsPif蛋白含有一个von-Willebrand因子A型结构域和三个几丁质结合结构域;氨基酸组成成分结果表明天冬氨酸含量最高,组氨酸含量最低;HsPif蛋白亲水指数为–0.566,为亲水蛋白。构建系统进化树分析显示Pif基因保守性较高,与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)Pif相似度最高,且与其他贝类在同一个大支上。组织荧光定量PCR结果表明:HsPif基因主要在外套膜中表达;分子原位杂交显示杂交反应主要在外套膜上皮细胞发生。进行植核手术后进行qPCR检测HsPif基因的表达量变化,实验结果表明, HsPif基因可能与珍珠层的分泌有关,有助于进一步了解珍珠形成的机制,为珍珠养殖提供参考。

张元素对阴阳药性认识的多维度阐释

张元素所著《珍珠囊》对中药的阴阳药性进行了标注,由于原著语焉不详,其阴阳药性划分与传统的药性理论存在诸多分歧。本文以中医药文献和文史资料为基础,运用阐释的方法对《珍珠囊》阴阳药性进行研究。结果表明,张元素对阴阳药性的认识包括气味厚薄奠阴阳药性之基、气味一贯定阴阳药性之“纯”、理一分殊释阴阳药性之“微”、研机综微明阴阳药性之异、实事求是解阴阳药性之秘共五个方面的内容。该书对中药阴阳药性的划分具有多层次、多角度、系统性的特点。张元素对阴阳药性的阐释,可丰富中药药性理论的内涵,有利于临床精准用药。

马氏珠母贝珍珠囊发育的组织和组织化学研究

按照常规技术进行马氏珠母贝插核育珠,在手术后第1、3、7、15、20、30和60天解剖剪取珍珠囊,利用H E染色等组织化学方法研究马氏珠母贝珍珠囊形成过程中的组织学和组织化学变化。结果表明：珍珠囊表皮细胞来自于移植细胞小片的表皮细胞;在水温27℃条件下,插核后1~3 d来自育珠贝的游走细胞逐渐将细胞小片包围;插核后7~15 d,珠核表面密集来自育珠贝的游走细胞;插核后15～20 d,细胞小片外表皮细胞增殖形成珍珠囊,珍珠囊表皮细胞和细胞核均呈扁平状;插核后20～30 d,扁平状珍珠囊表皮细胞逐渐转变为高柱型,并分泌形成透明的壳皮层物质;在插核后第60天,已形成具有分泌珍珠质功能的扁平状珍珠囊表皮细胞,细胞核呈椭圆形或近圆形。

pH值对三角帆蚌珍珠形成的影响

观察了不同pH值对三角帆蚌珍珠形成的影响。结果显示,在pH 5、6、7、8、9时,三角帆蚌鳃组织中的钙含量最高,远远高于外套膜和珍珠囊。在pH为5～8时,随着pH值的升高,鳃和外套膜组织中的总钙量逐渐增加。在pH 6时,珍珠囊和珍珠的长、短轴直径最大,分别为(8.027±0.759)mm、(6.817±0.772)mm、(7.187±0.850)mm、(6.157±0.810)mm,质量最大,分别为(0.494±0.153)g、(0.419±0.140)g,与其他pH值水体的三角帆蚌相比,差异显著(P<0.05)。结果表明,pH 6的弱酸性水有利于三角帆蚌的生长发育,所形成的珍珠最大。

珍珠囊发育中马氏珠母贝血清免疫因子的变化规律

马氏珠母贝育珠贝插核手术后的第1、第2、第3、第10、第15、第20、第30和第60天,抽取育珠贝血清,并研究其非特异性免疫因子酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和溶菌酶(LSZ)的活性变化。结果表明:在珍珠囊发育初期(插核后3～10d),育珠贝血清的免疫因子ACP、AKP、CAT、SOD均比对照组(未经插核的马氏珠母贝)显著性增大(P<0.05),LSZ在插核后1～3d比对照组LSZ活性显著性增大(P<0.05);在珍珠囊发育中期(插核后第15～20天),各种免疫酶活性都逐渐降低;珍珠囊发育后期(插核30d后),育珠贝血清中的各种免疫酶活性都已恢复到对照组水平。

三角帆蚌珍珠囊的超微结构研究

对三角帆蚌珍珠囊细胞进行了亚显微结构水平的研究 ,结果发现珍珠囊表皮主要由两种细胞组成———珍珠囊表皮细胞和腺细胞 ,这两种细胞共同参与了珍珠的分泌形成 .珍珠囊表皮细胞为整个表皮的基本细胞、细胞内有发达的糙面内质网、多聚游离核糖体、线粒体、能积极地进行物质合成和多种形式的分泌 ,其中微绒毛分泌物和易变形的大颗粒分泌物与珍珠Ca CO3霰石结晶的起始、生长和结晶型决定有关 ,块状物和细胞间隙与钙的运输有关 ;腺细胞来源于外套膜结缔组织 ,经游走嵌入到珍珠囊表皮细胞之间 ,其细胞内含有大量的分泌泡 ,并通过开口式分泌的方式释放其内容物到珍珠囊腔 ,其分泌物与珍珠CaCO3霰石结晶形状的决定有关 ;珍珠囊细胞的分泌活动具有节律性和区段性的特点 ,这种区段性和节律性的分泌与珍珠多层结晶纤层的形成相适应 .

马氏珠母贝珍珠囊体外培养及插囊育珠

为建立马氏珠母贝 (Pinctada martensii) 珍珠囊体外培育和插囊育珠技术 ,一用 0 .3%胰蛋白酶消化液在p H值 7.2～ 7.4和温度 2 5℃条件下对马氏珠母贝外套膜组织进行解离 ,收集消化 15 m in的细胞悬液于珠核上培养珍珠囊 ;二直接用外套膜组织块在珠核上形成珍珠囊。方法一所产生的珍珠囊未培育出珍珠 ;方法二所产生的珍珠囊培育出少量的珍珠。为促进细胞在珠核上的粘附和珍珠囊的形成 ,研究了各种贴壁因子的作用 ;其中多聚赖氨酸和

不同PH值对三角帆蚌珍珠质分泌的影响

运用多种组织化学方法和透射电镜技术，研究了5种PH水环境（PH5、6、7、8、9）对三角帆蚌外套膜珍珠质分泌的影响机制。结果表明：在中性水环境中，贝体能积极地从外界水环境中吸收钙，并能旺盛地合成和分泌贝壳珍珠层及珍珠有机基质前体物质；持续的酸性水环境导致贝体的钙严重丢失，并引起珍珠质分泌细胞对有机基质前体物质的合成和分泌能力减弱；持续的碱性水环境虽能导致贝体对钙的积累，但珍珠质分泌细胞合成和分泌珍珠质有机基质前体物质的能力减弱；水环境的酸性或碱性程度越高，对珍珠质分泌细胞的合成和分泌活动的影响越大。

三角帆蚌珍珠囊细胞的分泌活动

本文对三角帆蚌珍珠囊细胞的分泌活动进行了亚显微结构的研究。发现珍珠囊表皮细胞能积极地进行物质合成 ,这些物质主要是蛋白质、硫酸化粘多糖和中性粘多糖 ,并将这些物质以微绒毛分泌、块状物分泌、细胞间隙分泌和大颗粒分泌等多种方式分泌到珍珠囊腔 ;而位于珍珠囊表皮细胞之间的、来源于外套膜结缔组织的腺细胞则含有丰富的中性粘多糖 ,并通过开口式分泌的方式释放到珍珠囊腔 ,同珍珠囊表皮细胞分泌的物质一起 ,共同参与珍珠结晶层的形成 ;珍珠囊细胞分泌的多样性与珍珠组成的复杂有关 ;珍珠囊细胞的分泌活动具有节律性和区段性的特点 ,这种区段性和节律性的分泌与珍珠多层结晶纤层的形成相适应。

环境钙浓度对淡水育珠蚌外套膜及珍珠囊钙代谢的影响

作者采用多种组织化学方法及等离子光谱技术 ,研究了不同环境钙浓度对淡水育珠蚌钙代谢的影响 .发现与对照组 (钙浓度约 10 g/m3)相比 ,较高钙浓度 (2 0～ 30 g/m3)条件下三角帆蚌外套膜组织钙含量增加 ,外套膜内外表皮和珍珠囊上皮细胞的分泌活动旺盛 ;与之相反 ,高钙浓度条件下 (30 g/m3以上 ) ,蚌外套膜组织钙含量降低 ,外套膜内外表皮和珍珠囊上皮细胞的分泌活动下降 .这表明环境中适宜的钙浓度可促进蚌对钙质的吸收、贮藏以及细胞旺盛的分泌活动 ,而过高和过低的钙浓度会对蚌外套膜的钙代谢活动产生抑制作用 ,从而影响到珍珠和贝壳的正常生长 .作者探讨了育珠蚌外套膜和珍珠囊钙的代谢机制 ,期望能进一步阐明影响珍珠和贝壳形成的因素 。

褶纹冠蚌珍珠囊发育的研究

以褶纹冠蚌(Cristaria plicata Leach)为实验对象,应用光学显微技术和扫描电子显微技术研究珍珠囊的发育,结果表明在水温16℃左右时约需30d形成具有单层上皮细胞的珍珠囊,6个月后稳定分泌珍珠质。构成珍珠囊的上皮细胞从高柱状逐渐变成扁平状或立方形,细胞的碳酸酐酶污性也日益增强。大部分移植细胞小片的结缔组织与母蚌的结缔组织共同成层排列在珍珠囊腔外围。游走细胞在珍珠囊的早期发育阶段十分活跃。本文还阐明了珍珠囊液是存在于上皮细胞与珍珠表面之间的一薄层流体状物质。碳酸钙结晶的核化(nucleation)和初期生长都发生在珍珠囊液中。

注射法培育三角帆蚌有核珍珠的研究

对三角帆蚌有核珍珠培育方法作了研究。珍珠囊体外培育采用胰蛋白酶对外套膜组织块进行解离 ,收集细胞悬液于珠核上培养珍珠囊 ,然后将体外形成的有核珍珠囊再进行插核 ,并将酶解处理后的细胞悬液注射到所插核部位。结果表明 ,外套膜组织细胞悬液贴核生长正常 ,并且能够培育出体外珍珠囊 ;将体外珍珠囊插到母蚌外套膜内 ,同时注射外套膜组织细胞悬液 ,经 6 0天养殖后 。

褶纹冠蚌光珠与骨珠珍珠囊差异的研究

运用多种组织化学方法和电镜技术研究了褶纹冠蚌光珠和骨珠珍珠囊表皮细胞的形态结构、分泌物性质和功能等方面的差异。结果表明：骨珠珍珠囊表皮细胞合成和分泌珍珠前体物质的能力较光珠的强，故骨珠的形成速度比光珠快；光珠和骨珠珍珠囊表皮细胞合成和分泌的蛋白质的差异决定了光珠和骨珠的形成；光珠和骨珠珍珠囊表皮细胞的形态结构特征差异可作为检验和预测人工培育珍珠质量的细胞学标准。

三角帆蚌内脏团不同部位插核育珠对珍珠囊形成的影响

对三角帆蚌(Hyriopsis comingii)内脏团不同部位进行插核,研究各组珍珠囊形成、结构以及珍珠质沉积的差异,从而确定出有利于珍珠形成的插核核位。实验选取内脏团5个部位(I:斧足内脏团前端;II:斧足内脏团中部;III:近生殖腺部;IV:近胃部;V:近肾部)进行插核,并分别在插核后第20、50、90、150天(thd)采集内脏团插核部位进行组织固定,利用石蜡切片、HE染色研究不同插核部位珍珠囊结构及珍珠质沉积情况。结果表明:(1)插核施术后20 d,II组插核位点最早形成单层低柱状上皮细胞,为次生珍珠囊;(2)插核施术后50 d,I、II、III组均形成了珍珠囊上皮细胞,而IV、V组插核位点未出现类似的柱状细胞。其中II、III组珍珠囊上皮细胞前端含有大量体积较大的颗粒物;(3)插核施术后90 d,I、III组珍珠囊细胞间出现大量细胞间隙,I、II组珍珠囊表皮细胞具有多核现象的细胞数量增多,且II、III组上皮细胞中颗粒物数量增多,而IV、V组插核位点形成了复层扁平上皮细胞;(4)插核施术后150 d,I、III组珍珠囊内表皮细胞间隙变少。II组珍珠囊上皮细胞游离端存在大量的微绒毛,其与III组相似,珍珠囊上皮细胞细胞核明显增多,颗粒物减少。该时期,IV组在插核位点上形成了不连续的低柱细胞、V组插核位点仍未出现珍珠囊细胞。(5)三角帆蚌在插核术后养殖150 d后,I、II、III组珠核表面出现明显的珍珠质沉积,II、III组珍珠质沉积均匀,I组不均匀,并且II组沉积的珍珠层厚度(0.85 mm±0.06 mm)显著大于I、III组(P<0.05;0.62mm±0.07 mm,0.56 mm±0.03 mm),而IV、V组珠核表面没有珍珠质沉积。研究结果表明,三角帆蚌内脏团不同插核部位珍珠囊上皮细胞的形成存在明显差异,斧足–内脏团前端、斧足–内脏团中部以及近生殖腺部插核能形成完整的珍珠囊结构并沉积珍珠质,其中斧足–内脏团中部插核更有利于珍珠的生长。本研究旨为淡水珍珠贝的内脏团育珠研究工作提供实践基础和理论依据。

三角帆蚌外套膜细胞培养与组织培养的比较

通过对三角帆蚌外套膜外表皮进行组织培养和细胞培养的比较研究 ,表明组织培养比细胞培养更易获得大量游离细胞。并且通过原子吸收光谱分析 ,证明体外培养的三角帆蚌组织和细胞皆能正常分泌珍珠质 。

合浦珠母贝(Pinctada martensii,Dunker)珍珠囊体外预培育的初步研究

０．３％胰蛋白酶液（２５℃）消化外套膜组织的第５～１５ｍｉｎ时间段所收获的细胞产物中，表皮细胞具有最高的纯度和贴壁活性；细胞悬液的体外短期培养过程中小牛血清和珠母贝组织提取物对于细胞在体外的生长和在珠核表面的贴附具有促进作用．

硫酸铜对三角帆蚌的珍珠质量及外套膜与珍珠囊细胞的影响

不同浓度的硫酸铜采用不同时间处理三角帆蚌，发现硫酸铜对珍珠的光泽影响很大，使骨珠的百分率上升，其上升幅度与硫酸铜的浓度大小及处理时间的长短有相关性。外套膜与珍珠囊细胞也受到损伤，并显示出一定的浓度梯度差异，硫酸铜处理35d，珍珠囊表皮细胞萎缩、高度参差不齐、甚至溃烂；外套膜内表皮细胞形态破坏较外表皮严重，其大颗粒细胞数目以及酸性粘多糖减少；外表皮细胞的中性粘多糖减少，而酸性粘多糖的比例有所上升；外套膜内、外表皮及珍珠囊细胞的超微结构均受到了相应程度的损伤；外套膜褶上的棕色颗粒由外褶扩展到色线以内的外表皮，乃至中、内褶。当硫酸铜浓度达到1．0mg／L及以上时各种损伤及变化程度显著加深。

漂白粉对三角帆蚌外套膜粘液细胞及珍珠囊细胞的影响

研究了不同浓度的漂白粉 ( 0 .5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L)处理后对三角帆蚌的影响 ,结果表明各浓度漂白粉对外套膜和珍珠囊细胞的超微结构均有不同程度损害 ,表现为粗面内质网脱颗粒、网腔扩张 ,线粒体基质电子密度改变等 .其中 1.5mg/L漂白粉的影响最为严重 ,除发生上述变化外 ,外套膜内表皮粘液细胞中硫酸化粘液减少 ,酸性粘液增加 ,外表皮细胞中性粘液几乎消失 .

圆背角无齿蚌血细胞在体内和体外损伤修复过程中的功能

以圆背角无齿蚌为材料，采用外套膜小片的异体移植与加入血细胞的体外培养，研究了血细胞在体内、外损伤的修复及珍珠囊构建中的功能。结果表明人工育珠手术后的损伤修复中，血细胞有形成无颗粒细胞层修复伤口、诱导表皮细胞迁移和再生并形成珍珠囊的功能。而在体外的组织培养中加入血细胞比不加入血细胞的对照组，能更快地诱导上皮细胞迁移和再生，在整个伤面形成覆盖层，即形成类似珍珠囊结构。本文首次在国内、外报道了用组织培养技术培养珍珠囊成功。