微波辅助酸水解-HPLC测定紫肉甘薯中矢车菊素和芍药素的含量

目的建立微波水解-高效液相色谱(HPLC)法同时测定紫肉甘薯中矢车菊素和芍药素两个花青素成分含量的方法。方法样品经盐酸甲醇(3→10)微波水解后,采用Agilent Eclipse XDB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液(80:20)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长538 nm,柱温25℃,进样量10μl。结果矢车菊素和芍药素进样量分别在0.045~0.225μg(r=0.9998)和0.102~0.510μg(r=0.9997)范围内线性关系良好。两者平均回收率分别为98.6%,RSD=0.88%(n=6)和98.8%,RSD=1.2%(n=6)。结论该方法简便、准确可靠、重复性强,可作为同时测定紫肉甘薯中矢车菊素和芍药素含量的方法。

高效液相色谱法测定紫甘薯花青素含量

本文建立了紫甘薯中花青素的高效液相色谱-紫外定量检测方法。使用盐酸水溶液超声提取紫甘薯花色苷,沸水浴将多种花色苷水解为花青素单体。采用高效液相色谱-紫外可见检测器对紫甘薯中主要花青素矢车菊和芍药素进行定量检测。结果表明:矢车菊素线性范围0.0454～90.8μg/mL,仪器定量限26.7 ng/mL,仪器检出限8.0 ng/mL,方法检出限0.80 mg/kg,日内RSD 1.8%,回收率97.8%～100.7%;芍药素线性范围0.0420～80.4μg/mL,仪器定量限24.7 ng/mL,仪器检出限7.4 ng/mL,方法检出限0.74 mg/kg,日内RSD 2.4%回收率93.7%～95.5%。该方法便捷准确,可将紫甘薯及其他作物中复杂花色苷水解为花青素单体进行定量测定。

双标样高效液相色谱法测定紫玉米花青素的含量

采用分子量校正系数减小由于样品分子量与标样不同造成的偏差;根据紫玉米花青素中矢车菊素-3-葡萄糖苷和芍药色素-3-葡萄糖苷及其衍生物含量为主要组成部分,选择矢车菊素-3-葡萄糖苷和芍药色素-3-葡萄糖苷为标样的双标样高效液相色谱法分别计算相应衍生物含量减小由于样品母环与单一标样不同造成的偏差,最终确定紫玉米花青素含量为93.77mg/g。并证实该方法的精密度、重复性和稳定性均较高。

紫甘薯花色苷水解条件研究

紫甘薯富含花青素,其大多以酰基化花色苷形式存在,种类多达二十种以上,难以直接进行定量检测。本文首次综合紫甘薯花色苷的提取和水解,使用盐酸水溶液超声提取紫甘薯花色苷,直接沸水浴水解将花色苷水解为花青素单体。通过高效液相色谱-紫外可见检测器进行定性分析,使用该方法对四川省13个品种的紫甘薯进行了分析,主要花青素均为矢车菊和芍药素。该法简便稳定,有望用于紫甘薯及其他植物中花青素的常规定量分析。

变异紫斑牡丹红色叶色素与抗氧化活性分析

以紫斑牡丹和变异紫斑牡丹的叶片为试材,采用高效液相色谱、紫外-可见分光光度法、薄层色谱对变异紫斑牡丹红色叶和紫斑牡丹绿色叶的色素进行定性定量分析;采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和2,2’-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐自由基分析2种叶片的体外抗氧化活性。结果表明:变异紫斑牡丹红色叶的颜色发生变化主要是芍药花素-3,5-二葡糖苷和天竺葵素-3,5-二葡糖苷含量上升与叶绿素含量下降的共同作用结果;变异紫斑牡丹红色叶中单体酚含量(绿原酸、芦丁、儿茶素、表二茶素、二氢杨梅酮、对香豆酸和二氢槲皮素)比紫斑牡丹绿色叶中的高;变异紫斑牡丹红色叶较紫斑牡丹的绿色叶相比有较好的抗氧化能力,具有潜在药用价值。

排石止痛合剂质量标准的研究

目的 制定排石止痛合剂的质量标准。方法 用TLC法鉴别制剂中延胡索、木香、大黄;用HPLC法测定芍药苷的含量。结果 TLC色谱中能明显地检出延胡索、木香、大黄;HPLC法测定,芍药苷在0.8～26.0μg·mL-1线性良好,r=0.999 6(n=6),平均回收率为99.64％,RSD为0.29％。结论 定性、定量方法简便、准确,专属性强,能有效控制排石合剂的质量。

68份紫肉甘薯品种资源花青苷组分分析与评价

为了解紫肉甘薯中花青苷的组分构成及多样性分布,以来自国内外多家培育单位的68份紫肉甘薯品种资源为试验材料,利用液质联用技术测定了6类共计68种花青苷的含量。结果表明,6类花青苷中,矢车菊类和芍药类花青苷的含量较高,分布范围较广,天竺葵类花青苷的含量整体最低,分布范围最狭窄。相关性分析结果表明,检测到花青苷的总含量和矢车菊类、芍药类及矮牵牛类花青苷的含量均呈极显著正相关。系统聚类分析结果表明,68份紫肉甘薯品种资源被聚为6个类群,其中第Ⅱ类群6类花青苷的含量均较高,第IV类群各类花青苷的含量均较低。68种花青苷在68份紫肉甘薯品种中的检出情况表明,有7种花青苷能够在全部的紫肉甘薯品种中检出,10种只能在少于50份的材料中检出。68种花青苷含量的相关性分析结果表明,每类花青苷中均有几种花青苷的含量相等或呈极显著正相关。本研究通过对紫肉甘薯品种资源花青苷组分构成及多样性的分析与评价,筛选出6类花青苷含量较高的紫肉甘薯品种3份,单类花青苷含量较高的品种7份,为优质甘薯的推广和后续优质品种的选育提供了材料基础。

芍药色素对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝小鼠的保护作用

目的研究芍药色素对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝小鼠的保护作用,并探讨其作用机制。方法C57BL/6型雄性小鼠48只,分为正常对照组、模型对照组、芍药色素大剂量组、中剂量组、小剂量组。使用链脲佐菌素腹腔注射加高脂饮食建立小鼠2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝模型。检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血糖、胰岛素水平,检测血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)炎症因子水平,检测肝组织中丙二醛(MDA)、超氧歧化酶(SOD)水平,HE染色法观察肝组织病理学改变,Western blotting方法检测肝组织NF-κB蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型对照组小鼠血清中ALT、AST、TC、TG、血糖、胰岛素水平上升;血清中TNF-α、IL-6水平、肝组织中MDA水平明显升高,肝组织SOD水平明显下降;肝组织NF-KB蛋白表达上调。使用芍药色素后ALT、AST、TC、TG、血糖、胰岛素、TNF-α、IL-6、MDA水平下降,SOD水平上升、NF-κB表达下调。HE染色发现肝组织病变明显减轻。结论芍药色素对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝小鼠有保护作用,可以抑制炎症和氧化应激反应,其机制可能与调节NF-κB蛋白表达有关。

外源性红米红色素掺伪葡萄酒鉴别检测方法的研究

研究确定了葡萄酒中添加的天然色素红米红色素的检测方法,样品经固相萃取小柱处理后高效液相色谱法进行定性、定量分析。以红米红色素中显色物质矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和芍药素-3-O-葡萄糖苷为主要检测指标,研究二者的检测方法,确定了不同产区、不同品种的二者间含量比例关系,结果发现二者间有相对固定的比例关系,添加外源性红米红色素后破坏原有比例,当达到1∶2时就可以判定葡萄酒中是否添加了外源性天然色素红米红,解决了掺伪葡萄酒中外源红米红色素难以鉴别检测的难题。

基于标准提取物的欧洲越橘提取物质量控制方法及药效活性关联研究

目的建立对照品非依赖性的20种花青素类成分定量分析方法,并利用该法对市售欧洲越橘Vaccinium myrtillus提取物进行质量控制,同时筛选出代表性抗氧化活性成分。方法以欧洲越橘标准对照提取物替代对照品,采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)联用技术,建立一种针对20种花青素类成分的定量方法,并利用该法对10批市售欧洲越橘提取物中的花青素类成分含量进行研究。采用DPPH自由基清除法和总抗氧化能力测试法评价不同欧洲越橘提取物的抗氧化能力。结果方法学验证结果显示,20种花青素类成分线性良好,r为0.9994~1.0000,精密度RSD为0.05%~4.23%,稳定性RSD为0.29%~3.38%,平均加样回收率为98.1%~102.1%,RSD为0.50%~4.12%。样品分析结果显示,不同样品中部分花青素类成分含量存在显著差异,其中锦葵素变化最大,RSD为18.23%。欧洲越橘提取物具有较好的DPPH自由基清除能力和总抗氧化能力。其中矢车菊素与DPPH自由基率相关性为0.94,芍药素-3-O-半乳糖苷与总抗氧化活性相关性为0.93。二者有望作为欧洲越橘提取物清除DPPH自由基活性和总抗氧化活性的潜在质控成分。结论基于UPLC-QQQ-MS/MS所建立的对照品非依赖性的欧洲越橘提取物中20种花青素类成分定量分析方法,灵敏度高,准确性好,方法简单,适用于欧洲越橘提取物中20种花青素类成分的含量测定,为中药对照提取物替代单体对照品在中药质量控制中的应用提供了数据支撑,为中药材质量控制研究提供新的研究思路。

芍药色素下调miR-21并激活SIRT1/FOXO1同路进而保护CCl_(4)诱导的大鼠急性肝损伤

目的考察芍药色素是否通过微小RNA-21(miR-21)调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框转录因子O1(FOXO1)通路保护四氯化碳(CCl_(4))诱导的大鼠急性肝损伤。方法将72只SD大鼠分为正常组、模型组(CCl_(4)处理)、芍药色素组(芍药色素处理)、芍药色素+miR-21组(芍药色素+miR-21处理)、EX527组(SIRT1特异性抑制剂EX527处理)和芍药色素+EX527组(芍药色素+EX527处理),每组12只。大鼠在第3、6和9天分别灌胃给予0.1、0.2和0.3 ml的CCl_(4),第10~16天灌胃给予芍药色素或静脉注射miR-21激动剂、腹腔注射EX527处理,1次/d。称重法检测大鼠的肝脏指数,全自动生化分析仪检测大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,TUNEL染色检测各组大鼠肝细胞凋亡,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,免疫印迹实验(Western blot)分析大鼠肝组织中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、SIRT1、FOXO1和磷酸化FOXO1(p-FOXO1)表达水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定大鼠肝组织中miR-21表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠肝脏指数、ALT、AST、MDA水平、肝细胞凋亡数量、Bax蛋白、miR-21的表达水平和FOXO1/p-FOXO1值升高(P<0.05),SOD水平、Bcl-2、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1蛋白的表达水平降低(P<0.05),大鼠急性肝损伤造模成功。与模型组比较,芍药色素组大鼠的肝脏指数、ALT、AST、MDA水平、肝细胞凋亡数量、Bax蛋白、miR-21的表达水平和FOXO1/p-FOXO1值降低(P<0.05),SOD水平、Bcl-2、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1蛋白的表达水平升高(P<0.05)。与芍药色素组比较,芍药色素+miR-21组大鼠肝组织的SIRT1、FOXO1和p-FOXO1蛋白水平降低(P<0.05),FOXO1/p-FOXO1值升高(P<0.05)。EX527组大鼠SIRT1、FOXO1和p-FOXO1蛋白水平降低(P<0.05),FOXO1/p-FOXO1水平升高(P<0.05)。而芍药色素+miR-21组或芍药色素+EX527组大鼠的肝脏指数、ALT、AST、MDA水平、肝细胞凋亡数量和Bax蛋白表达升高,SOD水平和Bcl-2表达水平降低(P<0.05)。结论芍药色素可下调miR-21并激活SIRT1/FOXO1同路,进而保护CCl_(4)诱导的大鼠急性肝损伤。