大负荷运动后骨骼肌核心时钟基因Bmal1/Clock、Cry1/Per1的节律性振荡变化趋势

目的:探讨大负荷运动对骨骼肌核心时钟基因节律性表达的影响。方法:将208只8周龄SD大鼠随机分为对照(control,C)组与运动(Exercise,E)组,E组予以一次大负荷运动训练。每6 h取各组比目鱼肌,采用透射电镜观察骨骼肌纤维超微结构,通过实时荧光定量PCR实验测定骨骼肌核心时钟基因Bmal1、Clock、Cry1、Per1表达量,并使用余弦分析软件circacompare(R package)获取拟合余弦曲线参数,分析其节律性振荡的变化趋势。结果:1)C组Bmal1、Clock、Cry1、Per1 mRNA在72 h内呈现3个完整近日节律周期;E组Bmal1 mRNA、Cry1和Per1mRNA在0~24 h、Clock mRNA在0~72 h近日节律消失。2)与C组相比,E组Bmal1 mRNA在0、6、12和18 h显著升高,Clock mRNA在0 h时显著升高;Cry1、Per1 mRNA在0、12 h显著降低。3)C组各时相肌纤维超微结构正常,E组0、24和48 h均出现不同程度肌小节结构破坏、线粒体肿胀及聚集等改变,72 h有所缓解。结论:一次大负荷运动可诱发骨骼肌核心时钟基因Bmal1/Clock、Cry1/Per1节律振荡紊乱,其变化趋势与肌纤维超微结构损伤时相基本一致。

生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭迁移及与JAK2-STAT3通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭转移及上皮-间质转化(EMT)的影响,并阐述其与JAK2-STAT3信号通路相关蛋白的关系。方法:实时荧光定量PCR法(qPCR)以及蛋白质印迹法(WB)检测CNE2细胞中Per1基因及蛋白水平;构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体并转染CNE2细胞;实验分为过表达组(Per1-OE)、过表达对照组(Per1-OENC)、干扰组(Per1-sh)、干扰对照组(Per1-shNC);利用划痕愈合、Transwell实验检测Per1基因对各组细胞侵袭、迁移能力;WB检测Per1基因对EMT相关蛋白:E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达的影响;WB检测Per1基因对JAK2-STAT3信号通路相关蛋白表达的影响。结果:WB和PCR结果显示:与人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,Per1在鼻咽癌细胞CNE2中表达降低。通过构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体,有效地上调和下调了CNE2中Per1在转录及蛋白水平的表达,并分别成功筛选出稳转细胞株。划痕实验结果显示:Per1-OE组较Per1-OENC组24 h、48 h细胞迁移率均明显下降(P=0.04,P=0.01),Per1-sh组较Per1-shNC组24 h、48 h细胞迁移率均明显升高(P=0.01,P=0.005)。Transwell实验结果显示:Per1-sh组较Per1-shNC组穿过Transwell小室细胞数明显增加(P=0.02),Per1-OE组较Per1-OENC组穿过Transwell小室细胞数明显减少(P=0.001)。WB结果显示:JAK2、p-JAK2、STAT3蛋白在各组细胞中表达无统计学差异(P>0.05)。Per1-sh组较Per1-shNC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达下降,E-cadherin表达升高(P<0.05),Per1-OE组较Per1-OENC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达均升高,E-cadherin表达下降(P<0.05)。结论:过表达Per1基因后可抑制鼻咽癌细胞CNE2侵袭、迁移,使N-cadherin、Vimentin、p-STAT3蛋白表达下降,E-cadherin表达增加;干扰Per1基因后则相反,进而表明Per1基因在鼻咽癌细胞CNE2中可能扮演着抑癌基因的角色;同时我们推测Per1基因与p-STAT3的表达有一定的相关性,但其具体作用机制有待进一步研究。

改进竞争性RT-PCR法在定量PER1基因表达中的应用

目的研究使用不同样品稀释液及变性高效液相色谱(DHPLC)梯度条件对定量检测PER1基因表达的影响。方法竞争性RT-PCR与DHPLC结合定量检测基因表达。结果样品稀释液中含有载体可极大提高实验的重复性、准确性;不同DHPLC梯度条件对定量结果无明显影响。结论建立定量PER1基因mRNA表达水平的竞争性RT-PCR系统有助于精确检测微量标本中节律基因表达的变化,探寻生物节律与疾病状态间的关系。

生物钟基因Per1对人口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤的影响及机理

目的探讨生物钟基因Per1对细胞周期相关基因的调控作用,以及对人口腔鳞状细胞癌细胞SCC15增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤的影响。方法构建3组针对Per1 RNA的短发夹RNA(sh RNA)慢病毒重组质粒,转染SCC15细胞,用蛋白质印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测筛选RNA干扰作用最强组为实验组,对照组(Control-sh RNA)为对任何基因均无干扰效应的sh RNA序列的质粒,空白组为未做任何处理的SCC15细胞。用q RT-PCR检测各组细胞中细胞周期相关基因Per1、p53、Cyclin D1、Cyclin E、Cyclin A2、Cyclin B1、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6、p16、p21、Wee1、cdc25、E2F、Rb1 mRNA的表达;用流式细胞仪检测各组细胞增殖、凋亡和细胞周期分布;将实验组和空白组细胞分别接种于裸鼠背部皮下,观察成瘤情况。结果成功构建了3组Per1-sh RNA慢病毒质粒,通过q RT-PCR和Western blot证明Per1-sh RNA-Ⅰ组沉默效果最佳,作为实验组。Per1-sh RNA-Ⅰ组中Cyclin D1、Cyclin E、Cyclin B1、CDK1和Wee1 mRNA的表达水平高于Control-sh RNA组和SCC15组(P<0.05),p53、Cyclin A2、p16、p21和cdc25 mRNA的表达水平降低(P<0.05);Control-sh RNA组和SCC15组中各基因mRNA的表达水平无差异(P>0.05)。CDK2、CDK4、CDK6、E2F和Rb1 mRNA的表达水平在3组中均无统计学差异(P>0.05)。Per1-sh RNA-Ⅰ组中细胞增殖指数高于Control-sh RNA组和SCC15组(P<0.05),凋亡指数降低(P<0.05),S期的细胞数降低(P<0.05),G2/M期的细胞数增加(P<0.05)。Control-sh RNA组和SCC15组细胞的增殖指数和凋亡指数无统计学差异(P>0.05)。Per1-sh RNA-Ⅰ组细胞体内成瘤能力显著增强(P<0.05)。结论生物钟基因Perl是重要的抑癌基因,Perl能调控下游众多的细胞周期基因,其表达变化影响细胞周期进程、增殖和凋亡的平衡失调及体内成瘤能力,对Per1深入研究有可能进一步明确癌症的发生发展机制,为癌症的治疗提供新的有效分子靶点。

钟控基因PER1、PER2在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:研究钟控基因PER1、PER2在乳腺癌中的表达,明确时钟基因表达在乳腺癌中的作用。方法:取60例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织,分别用免疫组化办法检测PER1、PER2基因蛋白表达,与病理和临床结果进行统计学分析。结果:PER1、PER2基因在乳腺癌细胞和癌旁组织中阳性表达率有显著差异(P<0.01)。乳腺癌PER1蛋白表达和ER、PR、c-erb B2表达、组织分级有显著相关性,和年龄、肿瘤大小和分期无相关性。PER2表达和c-erb B2、组织分级有显著相关性,和年龄、ER、PR、肿瘤大小和分期无相关性。结论:钟控基因PER1、PER2表达缺失和乳腺癌发生有关,在乳腺癌发生过程中具有重要作用。

核酶阻断per1表达对吗啡成瘾小鼠海马c-fos转录及表达的影响

目的研究用特异性核酶阻断生物节律基因per1的表达对吗啡成瘾小鼠海马c-fos基因转录及表达的影响。方法制备吗啡成瘾小鼠模型,向小鼠脑室内注射脂质体包裹的重组质粒pcDNA3.1—per1RZDNA,在脑内产生特异性核酶-per1RZ,阻断小鼠脑内生物节律基因per1的表达。作脑组织冰冻切片,用原位杂交和免疫组化法测定小鼠海马c-fos基因转录及表达的变化。结果per1RZ能使吗啡成瘾小鼠海马的c-fos基因转录及表达明显减弱。结论重组质粒表达的per1RZ可以干扰生物节律基因per1的表达,抑制海马c-fos基因的转录和表达,从而控制吗啡成瘾的发生。

胃癌组织PER1和CRY1蛋白表达及其对患者预后的影响

目的观察分析胃癌组织中PER1和CRY1的表达情况,并探讨其与患者预后的相关性。方法选取我院2008—2012年收治的106例胃癌患者,将106份癌组织标本作为研究组,106份癌旁正常组织标本作为对照组,所有标本组织均行PER1和CRY1蛋白检测。比较两组PER1和CRY1蛋白表达水平,不同临床特征和预后患者间PER1和CRY1蛋白表达水平,并进一步行多因素Cox比例风险回归模型分析寻找影响胃癌患者预后的因素。结果研究组中PER1蛋白和CRY1蛋白阳性表达率显著高于对照组,差异均有统计学意义(P <0. 01)。不同浸润深度、组织学分化程度、是否淋巴结转移以及TNM分期的胃癌患者在PER1和CRY1蛋白表达阳性率方面存在差异(P <0. 05或P <0. 01)。PER1表达阴性和阳性患者5年总生存率分别为100. 00%和68. 63%,差异有统计学意义(χ~2=3. 264,P=0. 048);而CRY1表达阴性和阳性患者5年总生存率分别为79. 31%和58. 33%,差异有统计学意义(χ~2=5. 484,P=0. 019)。经多因素Cox比例风险回归模型分析显示:肿瘤浸润浆膜、低分化肿瘤、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、出现淋巴结转移、PER1阳性及CRY1阳性为胃癌患者预后的独立危险因素。结论胃癌组织中PER1和CRY1蛋白均呈过高表达,且为患者预后的独立危险因素,故可将PER1和CRY1蛋白作为评估胃癌患者预后的指标。

生物钟PER1基因在口腔鳞癌中的昼夜节律变化及与体内肿瘤生长的关系

目的探讨生物钟PER1基因在口腔鳞癌中的昼夜节律变化情况和与肿瘤体内生长的关系。方法 60只裸鼠置于12 h光照和12 h黑暗交替环境中饲养3周后,将人颊鳞癌BcaCD885细胞接种于裸鼠颊部,建立口腔颊鳞癌模型。3周成瘤后,在24 h内按灯亮后4、10、16、22 h(4 HALO、10 HALO、16 HALO、22 HALO)的4个时间点分别处死15只裸鼠,取出肿瘤,称量,常规切片在HE染色下计算各时间点肿瘤的有丝分裂指数(MI);分别用S-P免疫组化、Western blot和Real-time RT-PCR检测各时间点癌细胞中PER1蛋白和mRNA的表达;分别用方差分析和余弦分析检验各指标在4个时间点的差异性和是否具有昼夜节律性。结果颊鳞癌细胞PER1蛋白、PER1 mRNA、肿瘤MI和肿瘤质量在昼夜不同时间点具有显著性差异(P<0.01),其变化波动具有昼夜节律性特征(P<0.05);肿瘤MI和肿瘤质量与PER1的表达水平呈反比关系,PER1 mRNA表达的峰值与肿瘤MI和质量的谷值均位于活动相的中期,而PER1 mRNA表达的谷值与肿瘤MI和质量的峰值均位于休息相中期。结论口腔鳞癌中PER1的表达、肿瘤MI和质量在昼夜不同时间点的波动具有24 h昼夜节律性规律,PER1在口腔鳞癌中为抑癌基因。

per1,per2 3′UTR双荧光素酶报告基因重组质粒的构建

构建了包含目的片段小鼠节律基因per1,per2 3′UTR全长的重组质粒,为初步分析转录后可能调控per1,per2基因的miRNAs提供了有效手段。用反转录试剂盒将从小鼠肝脏组织提取的RNA反转录得到cDNA,以获得的cDNA为模板PCR扩增per1,per2 3′UTR全长,经回收纯化、酶切后将目的片段定向克隆到PGL3-promoter质粒上,再经转化扩增挑取克隆进行菌落PCR,对获得的阳性克隆进行酶切鉴定并测序。PCR产物鉴定结果表明,目的片段per1,per2 3′UTR序列扩增成功;菌落PCR及单酶切鉴定结果表明,per1,per2 3′UTR已插入PGL3-promoter载体中;测序结果表明,per1,per2 3′UTR插入序列,插入方向正确。per1,per2 3′UTR双荧光素酶报告基因重组质粒的成功构建为进一步研究节律基因转录后的调控机制奠定了基础。

生物钟基因Per1对人口腔鳞癌细胞生物学行为的影响和调控机制

目的探讨生物钟基因Per1对人口腔鳞癌细胞SCC15增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及调控机制。方法采用RNA干扰技术沉默SCC15细胞内Per1基因,应用流式细胞仪检测沉默后细胞的增殖和凋亡水平,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力的改变,实时荧光定量PCR检测Ki-67、鼠双微基因2(MDM2)、c-Myc、p53、Bax、Bcl-2、金属蛋白酶(MMP)2、MMP9和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达情况。结果沉默SCC15癌细胞内Per1基因后促进了细胞的增殖,抑制了细胞凋亡,增强了细胞的迁移和侵袭能力(P均<0.05)。Per1基因的低表达显著提高了Ki-67、MDM2、Bcl-2、MMP2和MMP9 mRNA的表达(P均<0.05),降低了c-Myc、p53和Bax mRNA的表达(P均<0.05),而VEGF mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论生物钟基因Perl能调控下游重要的肿瘤相关基因Ki-67、MDM2、c-Myc、p53、Bax、Bcl-2、MMP2和MMP9,其表达变化影响癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭,对Per1深入研究有可能进一步明确癌症的发生发展机制,为癌症的治疗提供新的有效分子靶点。

左旋精氨酸对AR42J细胞节律基因Per1表达的影响

目的:研究左旋精氨酸对大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)节律基因Per1表达的影响。方法:采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐诱导AR42J细胞节律基因表达。在Per1 RNA表达出现稳定近日节律后,设置实验组与对照组,实验组中加入含L-Arg培养液,对照组加入等量不含L-Arg培养液,采用RT-PCR法检测不同时间点AR42J细胞中Per1 RNA的表达水平。结果:RT-PCR结果显示加入L-Arg实验组的Per1 RNA表达量比对照组明显降低(P<0.05)。结论:L-Arg可引起胰腺腺泡细胞中的Per1 RNA表达降低,提示氨基酸可影响节律基因的表达。

近日节律基因Per1对恶性肿瘤的侵袭、转移及凋亡影响的研究进展

近日节律基因是细胞中的一组能够通过自身表达和调控形成自激震荡产生近日节律变化的基因。这些基因能够维持和调控生物的许多生理生化活动,使其按照一定的周期性规律、有序地运行,从而更好地适应周围环境。Period1(Per1)基因是一种重要的近日节律基因,在近日节律系统中处于核心地位。研究表明,Per1的异常表达和节律改变与多种恶性肿瘤的发生发展高度相关,但机制尚未完全明确。本文将就Per1对恶性肿瘤的侵袭、转移、凋亡的影响及相关机制作一综述。

Per1与Per2基因在胆管癌中的表达

目的分析人类生物钟基因Per1与Per2在人类胆管癌中的表达,研究其表达与人类胆管癌的关系。方法获取人原发胆管癌标本58份,另取距离肿瘤边缘2 cm外组织作为正常对照。采用免疫组织化学方法检测人原发胆管癌标本与正常对照组织中Per1与Per2基因蛋白产物(Per1、Per2蛋白)的表达。结果 58份人原发胆管癌标本与正常对照组织中均见Per1与Per2蛋白表达,但胆管癌标本中Per1与Per2蛋白的表达较正常对照组织明显下降(P<0.05)。结论生物钟基因Per1与Per2蛋白可能与人类胆管癌的发生及发展有关。

蝙蝠核心生物钟基因Per1昼夜表达节律与适应性进化研究

长期以来,生物钟相关研究一直是生命科学领域的热点话题。以往研究表明核心生物钟基因Per1广泛参与哺乳动物昼夜节律调控。然而,Per1基因在具有不同昼夜节律活动模式的哺乳动物中是否发生了遗传位点改变,以及这些改变是否促进了哺乳动物昼夜活动模式的形成和稳定仍有待研究。本研究通过荧光定量PCR、基因克隆测序与分子进化分析方法,对核心生物钟基因Per1开展了深入的分子进化分析,明确了Per1基因在夜行性蝙蝠脑区的昼夜振荡规律,由休息状态到睡眠状态对应着Per1基因表达量的由高到低,睡眠状态的表达量最低,而由觉醒状态到活动状态对应着Per1基因表达量的持续升高,与Per1基因维持中枢生物钟调控功能高度相关;检测到Per1基因序列上的15个潜在受正选择位点与2个显著受正选择位点,其中在夜行性动物中检测到的显著受正选择的1118A氨基酸位点恰好位于该基因编码蛋白的功能域上;通过滑窗分析结果显示,Per1基因在夜行性哺乳动物中的进化速率均普遍高于其在日行性哺乳动物中的进化速率,可能促进了哺乳动物夜行性活动模式的形成和稳定。本研究为深入理解哺乳动物自身稳态维持与适应环境周期性变化的关键分子基础提供新的认知,为生物钟相关研究提供思路和参考。

乌龙丹对慢性脑缺血大鼠松果体钟基因表达的影响

目的初步探讨慢性脑缺血对大鼠睡眠钟基因表达的影响及乌龙丹对其的调控作用。方法 24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、乌龙丹给药组。采用改良式双侧颈总动脉永久性结扎法建立大鼠慢性脑缺血模型,造模3周后,灌胃给药3周,并持续监测各组大鼠体重,应用实时荧光定量PCR检测大鼠松果体钟基因Clock、Bmal1、Per1表达的变化。结果模型组较假手术组Clock mRNA、Per1mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05),Bmal1基因表达无显著差异(P>0.05);乌龙丹给药组的Clock基因水平高于模型组(P<0.01),Bmal1基因表达较假手术组降低(P<0.05),Per1无显著变化(P>0.05)。结论慢性脑缺血可能成为睡眠障碍的潜在病因,乌龙丹对慢性脑缺血引起的睡眠障碍有一定的治疗作用。

hPer_1bHLH-PAS结构域酵母双杂交系统的构建

目的构建hPer1bHLH PAS结构域的酵母双杂交系统 ,以寻找与hPer1相互作用的新蛋白。方法构建pGBKT7 hPer1bHLH PAS重组诱饵质粒及 pGADT7 Rec 脑cDNA文库质粒 ;将两种质粒顺序转染至酵母细胞AH1 0 9中 ,进行营养缺陷筛选阳性克隆株。结果经酶切和基因测序鉴定 ,证实重组诱饵质粒 pGBKT7 hPer1bHLH PAS构建成功。脑cDNA文库转化效率为 1 .2× 1 0 6/3μgpGADT7 Rec。结论 酵母双杂交文库筛选得到 2 4个阳性克隆。这为寻找脑组织中与hPer1相互作用的未知蛋白奠定了基础。

基于生物钟基因的胃癌预后风险评估模型的建立

目的分析影响胃癌患者预后的生物钟基因,建立基于生物钟基因的胃癌预后风险评估模型。方法下载NCBI中GSE62254数据集,筛选出298例胃癌患者样本。分析不同生物钟基因表达水平的胃癌患者总生存期(OS)的差异,筛选影响胃癌患者OS的关键生物钟基因,分析关键生物钟基因表达水平与胃癌临床病理参数的关系。在关键生物钟基因及性别、年龄、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、腹膜转移等临床病理参数中筛选胃癌预后的独立影响因素,在此基础上构建胃癌预后风险(RS)评估模型,绘制RS评分预测胃癌预后的ROC曲线,计算曲线下面积和约登指数最大时的敏感度和特异度。结果生物种基因CLOCK、PER1、PER3、CRY2、NPAS2、RORA高表达的胃癌患者较低表达者OS更短,TIMELESS高表达的胃癌患者较低表达者OS更长(P均<0.05)。在生物钟基因中,PER1、CRY2和RORA是胃癌患者OS的独立危险因素;PER1高表达与低龄、浸润深度较深、TNM分期较晚、腹膜转移有关,CRY2高表达与浸润深度较深、TNM分期较晚、淋巴结转移、腹膜转移有关,RORA高表达与低龄、浸润深度较深、TNM分期较晚、淋巴结转移、远处转移、腹膜转移有关(P均<0.05)。多因素分析结果显示,淋巴结转移、远处转移、腹膜转移和PER1高表达是影响胃癌预后的独立危险因素(P均<0.05)。根据公式RS=0.692×淋巴结转移+0.747×远端转移+1.013×腹膜转移+0.638×PER1表达建立胃癌预后风险评估模型。RS评分预测胃癌预后的ROC曲线下面积为0.817,敏感度为0.642、特异度为0.899。结论生物钟基因PER1、CRY2、RORA与胃癌预后密切相关,基于PER1联合淋巴结转移、远端转移、腹膜转移等临床病理参数建立的胃癌预后风险评估模型具有较好的应用效能。

酸枣仁汤对睡眠剥夺大鼠视交叉上核生物钟基因Period 1及Period 2表达的影响

目的观察酸枣仁汤对睡眠剥夺大鼠视交叉上核(Suprachiasmaticnucleus,SCN)生物钟基因Period1(Per1)和Period2(Per2)表达的影响,并探讨酸枣仁汤改善睡眠的可能机制。方法将实验大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、褪黑素组和酸枣仁汤组,除空白组外,其他各组腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)以制定睡眠剥夺模型,褪黑素组给予褪黑素溶液(36mg·kg^-1·d^-1,10mL·kg^-1·d^-1),酸枣仁汤组给予酸枣仁汤水煎液(4.86g·kg^-1·d^-1,10mL·kg^-1·d^-1),空白组和模型组给予等体积的0.9%氯化钠溶液(10mL·kg^-1·d^-1),连续灌胃2周,1次/天。末次给药后24h,用自主活动测试仪记录大鼠自主活动时间,Realtime-PCR、免疫组化和Westernblot检测SCN中Per1和Per2的基因和蛋白表达水平。结果自主活动时间检测结果:空白组活动时间为(377.79±39.55)s,模型组为(478.43±38.89)s,褪黑素组为(394.09±31.27)s,酸枣仁汤组为(412.40±36.24)s,空白组大鼠活动时间较少,造模后,与空白组比较,模型组大鼠活动时间明显增加(P<0.01);给药后,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠活动时间与模型组比较,都有不同程度减少(P<0.01,P<0.05)。Realtime-PCR和Westernblot检测结果:空白组大鼠SCN中Per1和Per2的基因和蛋白表达水平较高,造模后,模型组大鼠SCN中Per1和Per2的基因蛋白表达水平下降(P<0.01),给药后,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠SCN中Per1和Per2的基因和蛋白表达上升(P<0.01,P<0.05)。免疫组化检测结果:空白组大鼠SCN中Per1和Per2表达水平较高,造模后,模型组大鼠SCN中Per1和Per2表达水平下降(P<0.01),给药后,褪黑素组大鼠SCN中Per1和Per2表达上升(P<0.01,P<0.05),酸枣仁汤组大鼠SCN中Per1表达也上升(P<0.05),Per2表达上升但差异无统计学意义(P>0.05)。结论酸枣仁汤可以通过调节大鼠SCN中Per1和Per2的表达进而改善睡眠剥夺大鼠的睡眠状态。

细菌双杂交筛选肿瘤细胞中与人生物钟蛋白PER1相互作用的蛋白

目的筛选肿瘤细胞中与生物钟分子振荡系统的重要组成部分PERl蛋白（period circadian protein homolog1）相互作用的蛋白质分子，为生物钟基因在肿瘤发生发展过程中的功能研究提供条件。方法应用细菌双杂交技术与人宫颈癌Hela细胞cDNA文库，以pBT为载体，构建pBT-PERl融合表达诱饵质粒，与pTRG连接的人宫颈癌HeIa细胞cDNA文库质粒共转化双杂交系统报告菌株，利用培养基的特殊选择性，筛选出阳性克隆并测序分析。结果筛选出14个蛋白编码基因，其中4个包含完整的蛋白编码序列，包括与线粒体动力学相关的OPA3蛋白，与铜代谢相关的CUTA蛋白，与细胞运动、定位等细胞事件相关的蛋白，与物质合成、代谢等生物化学反应相关的蛋白，还有在信号转导中发挥作用的相关蛋白。结论肿瘤细胞中与PER1蛋白存在潜在相互作用新蛋白的筛选和鉴定为研究人生物钟基因PERI在肿瘤发生发展中的功能提供了条件。

β-细辛醚对抑郁模型大鼠昼夜节律周期基因Per1表达的影响

目的:探讨β-细辛醚对抑郁模型大鼠昼夜节律周期基因Per1(period1)表达的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、阿戈美拉汀组(40 mg·kg-1·d-1)、β-细辛醚低剂量组(12.5 mg·kg-1·d-1)、β-细辛醚高剂量组(25 mg·kg-1·d-1)共5组,每组20只。通过28 d慢性不可预见性应激刺激复制大鼠抑郁模型,于给药前及造模后对大鼠进行敞箱实验与糖水偏爱度行为学评估,应用实时定量PCR和Western blot检测各组大鼠脑中昼夜节律基因Per的表达。结果:行为学检测结果显示,与空白对照组相比,模型组的水平活动次数和糖水偏爱度均显著减少;与模型组相比,3个给药组的水平活动次数和糖水偏爱度均显著增加。PCR和Western blot检测检测结果显示,与空白对照组比较,模型组昼夜节律基因Per1的mRNA与蛋白表达均明显增高(P<0.05),而与模型组相比,阿戈美拉汀组和β-细辛醚高低剂量组昼夜节律基因Per1的mRNA与蛋白表达水平明显低于模型组(P<0.05)。结论:β-细辛醚可能通过影响抑郁大鼠昼夜节律基因Per1的脑表达进而改善大鼠的抑郁状态。