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大鼠骨髓单个核细胞诱导扩增为内皮祖细胞的细胞分离方法、接种数目、培养瓶包被条件
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作者 孙白羽 陈静依 姜志超 《山东医药》 CAS 2024年第21期44-48,共5页
目的筛选大鼠骨髓单个核细胞(BMMNCs)诱导扩增为内皮祖细胞(BM-EPCs)的细胞分离方法、接种数目、培养瓶包被条件,构建一个高效、高产量、高纯度的骨髓来源BM-EPCs分离培养诱导扩增方法。方法取2周龄雄性SD大鼠,脱颈处死后分离大鼠双侧... 目的筛选大鼠骨髓单个核细胞(BMMNCs)诱导扩增为内皮祖细胞(BM-EPCs)的细胞分离方法、接种数目、培养瓶包被条件,构建一个高效、高产量、高纯度的骨髓来源BM-EPCs分离培养诱导扩增方法。方法取2周龄雄性SD大鼠,脱颈处死后分离大鼠双侧胫骨和股骨,收集骨髓细胞悬液。配制30%、50%、60%和70%浓度的Percoll细胞分离液,通过Percoll密度梯度离心法分离出大鼠BMMNCs种子细胞,并计算活细胞比例。将获得的BMMNCs分为1×10^(5)、5×10^(5)、1×10^(6)、2.5×10^(6)、5×10^(6)、1×10^(7)六个组别,分别接种于25 cm^(2)无菌培养瓶中,培养7 d后镜下观察各组细胞集落形成数目,并计算每10^(6)细胞的集落形成数。运用Graphpad prism9.5软件进行Logistic拟合曲线,根据相关系数R^(2)确定相关性,根据其P值将有统计学差异的接种数目纳入范围,随后使用R语言编程定义计算函数,根据已知种子细胞总数及相关性函数限制下,通过迭代寻找最佳的BMMNCs细胞接种数目。分别配制20、50、100 nmol/L浓度的人纤连蛋白(FN)溶液,以不添加FN的空白溶液为对照,分别包被空白培养瓶2、6、12、24 h,将收集的48 h未贴壁BMMNCs接种于FN包被的各培养瓶中,静置培养3 d后计算各组集落形成数目,确定FN包被的最佳浓度与时间。接种48 h未贴壁BMMNCs于25 cm^(2)培养瓶底,使用EGM-2完全培养基定向诱导,于显微镜下观察集落形成及诱导扩增进程。取培养14 d的BM-EPCs,分别采用双阳性染色法和流式细胞术鉴定BM-EPCs的纯度。结果使用Percoll分离法可把BMMNCs细胞清晰的分为5层,其中30%与50%Percoll细胞分离层之间为BMMNCs活细胞比率最高。BMMNCs的最优接种数目为2.5×10^(6)个。以50 nmol/L的FN溶液包被24 h或以100 nmol/L的FN溶液包被6 h皆可有效促进细胞集落形成。细胞接种7 d后获得形态良好的铺路石样细胞并建立生长优势,表明BMMNCs已经诱导成为形态良好的BM-EPCs。Dil-Ac-LDL/FITC-UEA-1双阳性细胞占比为91.89%±5.77%,CD31+KDR阳性率为90.73%±0.61%、CD14阳性率为0.53%±0.17%、CD45阳性率0.77%±0.34%,说明获得的BM-EPCs纯度良好。结论大鼠BMMNCs诱导扩增为BM-EPCs过程中,可使用Percoll密度梯度离心法分离BMMNCs,BMMNCs的最优细胞接种数目为2.5×10^(6)个,细胞培养瓶包被条件为以50 nmol/L的FN溶液包被24 h或以100 nmol/L的FN溶液包被6 h,分离培养诱导获得的BM-EPCs形态和纯度均良好。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 骨髓来源内皮祖细胞 单个核细胞 骨髓单个核细胞 Percoll密度梯度离心法 人纤连蛋白 骨组织工程 细胞分离方法 细胞培养方法
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Phase Transitions and Seepage Characteristics during the Depletion Development of Deep Condensate Gas Reservoirs
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作者 Qiang Liu Rujun Wang +6 位作者 Yintao Zhang Chong Sun Meichun Yang Yuliang Su Wendong Wang Ying Shi Zheng Chen 《Energy Engineering》 EI 2024年第10期2797-2823,共27页
Deep condensate gas reservoirs exhibit highly complex and variable phase behaviors,making it crucial to understand the relationship between fluid phase states and flow patterns.This study conducts a comprehensive anal... Deep condensate gas reservoirs exhibit highly complex and variable phase behaviors,making it crucial to understand the relationship between fluid phase states and flow patterns.This study conducts a comprehensive analysis of the actual production process of the deep condensate gas well A1 in a certain oilfield in China.Combining phase behavior analysis and CMG software simulations,the study systematically investigates phase transitions,viscosity,and density changes in the gas and liquid phases under different pressure conditions,with a reservoir temperature of 165°C.The research covers three crucial depletion stages of the reservoir:single-phase flow,two-phase transition,and two-phase flow.The findings indicate that retrograde condensation occurs when the pressure falls below the dew point pressure,reachingmaximum condensate liquid production at around 25MPa.As pressure decreases,gas phase density and viscosity gradually decrease,while liquid phase density and viscosity show an increasing trend.In the initial single-phase flow stage,maintaining a consistent gas-oil ratio is observed when both bottom-hole and reservoir pressures are higher than the dew point pressure.However,a sudden drop in bottom-hole pressure below the dew point triggers the production of condensate oil,significantly reducing subsequent gas and oil production.In the transitional two-phase flow stage,as the bottom-hole pressure further decreases,the reservoir exhibits a complex flow regime with coexisting areas of gas and liquid.In the subsequent two-phase flow stage,when both bottom-hole and reservoir pressures are below the dew point pressure,a significant increase in the gas-oil ratio is observed.The reservoir manifests a two-phase flow regime,devoid of single-phase gas flow areas.For lowpressure conditions in deep condensate gas reservoirs,considerations include gas injection,gas lift,and cyclic gas injection and production in surrounding wells.Additionally,techniques such as hot nitrogen or CO_(2) injection can be employed to mitigate retrograde condensation damage.The implications of this study are crucial for developing targeted development strategies and enhancing the overall development of deep condensate gas reservoirs. 展开更多
关键词 Deep condensate gas reservoirs depletion development phase behavior percolation laws dynamic production analysis
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High-performance fiber strain sensor of carbon nanotube/thermoplastic polyurethane@styrene butadiene styrene with a double percolated structure
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作者 Dong XIANG Libing LIU +8 位作者 Xiaoyu CHEN Yuanpeng WU Menghan WANG Jie ZHANG Chunxia ZHAO Hui LI Zhenyu LI Ping WANG Yuntao LI 《Frontiers of Materials Science》 SCIE CSCD 2022年第1期99-110,共12页
In this work,a high-performance fiber strain sensor is fabricated by constructing a double percolated structure,consisting of carbon nanotube(CNT)/thermoplastic polyurethane(TPU)continuous phase and styrene butadiene ... In this work,a high-performance fiber strain sensor is fabricated by constructing a double percolated structure,consisting of carbon nanotube(CNT)/thermoplastic polyurethane(TPU)continuous phase and styrene butadiene styrene(SBS)phase,incompatible with TPU(CNT/TPU@SBS).Compared with other similar fiber strain sensor systems without double percolated structure,the CNT/TPU@SBS sensor achieves a lower percolation threshold(0.38 wt.%)and higher electrical conductivity.The conductivity of 1%-CNT/TPU@SBS(4.12×10^(-3) S·m^(-1))is two orders of magnitude higher than that of 1%-CNT/TPU(3.17×10^(-5) S·m^(-1))at the same CNT loading of 1 wt.%.Due to double percolated structure,the 1%-CNT/TPU@SBS sensor exhibits a wide strain detection range(0.2%-100%)and an ultra-high sensitivity(maximum gauge factor(GF)is 32411 at 100%strain).Besides,the 1%-CNT/TPU@SBS sensor shows a high linearity(R^(2)=0.97)at 0%-20%strain,relatively fast response time(214 ms),and stability(500 loading/unloading cycles).The designed sensor can efficiently monitor physiological signals and movements and identify load distribution after being woven into a sensor array,showing broad application prospects in wearable electronics. 展开更多
关键词 double percolated structure strain sensor FIBER carbon nanotube NANOCOMPOSITE
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Rigidity Symmetry Line for Thermodynamic Fluid Equations-of-State
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作者 Leslie V. Woodcock 《Journal of Modern Physics》 2024年第5期613-633,共21页
We report progress towards a modern scientific description of thermodynamic properties of fluids following the discovery (in 2012) of a coexisting critical density hiatus and a supercritical mesophase defined by perco... We report progress towards a modern scientific description of thermodynamic properties of fluids following the discovery (in 2012) of a coexisting critical density hiatus and a supercritical mesophase defined by percolation transitions. The state functions density ρ(p,T), and Gibbs energy G(p,T), of fluids, e.g. CO<sub>2</sub>, H<sub>2</sub>O and argon exhibit a symmetry characterised by the rigidity, ω = (dp/dρ)<sub>T</sub>, between gaseous and liquid states along any isotherm from critical (T<sub>c</sub>) to Boyle (T<sub>B</sub>) temperatures, on either side of the supercritical mesophase. Here, using experimental data for fluid argon, we investigate the low-density cluster physics description of an ideal dilute gas that obeys Dalton’s partial pressure law. Cluster expansions in powers of density relate to a supercritical liquid-phase rigidity symmetry (RS) line (ω = ρ<sub>rs</sub>(T) = RT) to gas phase virial coefficients. We show that it is continuous in all derivatives, linear within stable fluid phase, and relates analytically to the Boyle-work line (BW) (w = (p/ρ)<sub>T</sub> = RT), and to percolation lines of gas (PB) and liquid (PA) phases by: ρ<sub>BW</sub>(T) = 2ρ<sub>PA</sub>(T) = 3ρ<sub>PB</sub>(T) = 3ρ<sub>RS</sub>(T)/2 for T T<sub>B</sub>. These simple relationships arise, because the higher virial coefficients (b<sub>n</sub>, n ≥ 4) cancel due to clustering equilibria, or become negligible at all temperatures (0 T T<sub>B</sub>)<sub> </sub>within the gas phase. The Boyle-work line (p/ρ<sub>BW</sub>)<sub>T</sub> is related exactly at lower densities as T → T<sub>B</sub>, and accurately for liquid densities, by ρ<sub>BW</sub>(T) = −(b<sub>2</sub>/b<sub>3</sub>)<sub>T</sub>. The RS line, ω(T) = RT, defines a new liquid-density ground-state physical constant (ρ<sub>RS</sub>(0) = (2/3)ρ<sub>BW</sub>(0) for argon). Given the gas-liquid rigidity symmetry, the entire thermodynamic state functions below T<sub>B</sub> are obtainable from b<sub>2</sub>(T). A BW-line ground-state crystal density ρ<sub>BW</sub>(0) can be defined by the pair potential minimum. The Ar<sub>2</sub> pair potential, ∅ij</sub>(r<sub>ij</sub>) determines b<sub>2</sub>(T) analytically for all T. This report, therefore, advances the salient objective of liquid-state theory: an argon p(ρ,T) Equation-of-state is obtained from ∅<sub>ij</sub>(r<sub>ij</sub>) for all fluid states, without any adjustable parameters. 展开更多
关键词 Liquid-State Theory Cluster Physics Percolation Lines Fluid Thermodynamics Boyle Line Rigidity-Symmetry Line
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In situ infiltration-precipitation processes in some rock systems
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作者 Zahraa Ibrahim Rabih Sultan 《Acta Geochimica》 EI CAS CSCD 2023年第5期870-878,共9页
We carry out a chemical treatment(acidization or basification)of typical rock specimens in-situ,and characterize the emerging pattern resulting from the infil-tration-precipitation scenario.Galena and limestone sam-pl... We carry out a chemical treatment(acidization or basification)of typical rock specimens in-situ,and characterize the emerging pattern resulting from the infil-tration-precipitation scenario.Galena and limestone sam-ples were treated with sulfuric acid,while pyrite was reacted with sodium hydroxide.Various infiltration tech-niques were employed,after selection of the most feasible method for each rock separately.The patterns of anglesite(PbSO_(4)),anhydrite(CaSO_(4))and goethite(FeOOH)depo-sition presented different alteration modes of the bare rock textures.Among the three deposited minerals,only the anhydrite(CaSO_(4))displayed a band stratification.The formation of a Liesegang pattern in the rock of highest porosity indicates a plausible correlation between the band formation and a minimum porosity requirement.A banded rock of compact texture could then be formed by a cementation mechanism,governing the long time evolution of the rock. 展开更多
关键词 Liesegang LIMESTONE GALENA PYRITE Anglesite GOETHITE Reaction–diffusion PERCOLATION Porosity Pattern formation
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Phase behavior and percolation in an equilibrium system of symmetrically interacting Janus disks on the triangular lattice
6
作者 张希贤 胡皓 《Chinese Physics B》 SCIE EI CAS CSCD 2023年第8期216-225,共10页
A Janus particle has two distinct areas on its surface.Denoting the two areas as P(patch)and N(nonpatch),when two particles come close to each other,the strength of the PP interaction is usually different from that of... A Janus particle has two distinct areas on its surface.Denoting the two areas as P(patch)and N(nonpatch),when two particles come close to each other,the strength of the PP interaction is usually different from that of the NN interaction.Recently the interplay between a rotational-symmetry-breaking continuous phase transition and percolation has been explored for an equilibrium system of asymmetrically interacting(i.e.,attractive PP interaction,zero NN and PN interactions)Janus disks on the triangular lattice.By Monte Carlo simulation and finite-size scaling analysis,in this work we study an equilibrium system of symmetrically interacting(i.e.,attractive PP and NN interactions with the same strength,zero PN interaction)Janus disks on the same lattice.By definition,the phase diagram in the T-θplane is symmetric for systems with patch sizesθbelow and above 90°.We determine the phase diagram and compare it with that of the asymmetric system.Similar to the latter system,for 60°<θ<90°,a rotational-symmetry-breaking continuous phase transition and an anisotropic percolation transition are found in the symmetric system,though the transition points in the two systems are quite different.Phase crossover curves are found to be different,e.g.,a continuous varying crossover line extends betweenθ=0°and 90°for the symmetric model;and in the range 0°<θ≤30°,along the crossover lines of the two models,the trends of 1/T vs.θare opposite in the two systems.We understand the latter by analytically solving the models with two particles in 0°<θ≤30°.These results are helpful for understanding close-packed systems of Janus disks with more complex interactions. 展开更多
关键词 Janus particles phase transitions PERCOLATION Monte Carlo methods
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Percolation transitions in edge-coupled interdependent networks with directed dependency links
7
作者 高彦丽 于海波 +2 位作者 周杰 周银座 陈世明 《Chinese Physics B》 SCIE EI CAS CSCD 2023年第9期586-595,共10页
We propose a model of edge-coupled interdependent networks with directed dependency links(EINDDLs)and develop the theoretical analysis framework of this model based on the self-consistent probabilities method.The phas... We propose a model of edge-coupled interdependent networks with directed dependency links(EINDDLs)and develop the theoretical analysis framework of this model based on the self-consistent probabilities method.The phase transition behaviors and parameter thresholds of this model under random attacks are analyzed theoretically on both random regular(RR)networks and Erd¨os-Renyi(ER)networks,and computer simulations are performed to verify the results.In this EINDDL model,a fractionβof connectivity links within network B depends on network A and a fraction(1-β)of connectivity links within network A depends on network B.It is found that randomly removing a fraction(1-p)of connectivity links in network A at the initial state,network A exhibits different types of phase transitions(first order,second order and hybrid).Network B is rarely affected by cascading failure whenβis small,and network B will gradually converge from the first-order to the second-order phase transition asβincreases.We present the critical values ofβfor the phase change process of networks A and B,and give the critical values of p andβfor network B at the critical point of collapse.Furthermore,a cascading prevention strategy is proposed.The findings are of great significance for understanding the robustness of EINDDLs. 展开更多
关键词 edge-coupled interdependent networks with directed dependency links percolation transitions cascading failures robustness analysis
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1层和2层梯度离心法分离精子的效果评价 被引量:11
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作者 周其赵 冯春琼 +5 位作者 邹亚光 舒文 李铁求 李飞 刘存东 毛向明 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期217-219,共3页
目的:评价1层和2层Percoll密度梯度离心法分离精子的效果。方法:20份精液标本分别行50%1层,90%和45%Percoll2层密度梯度离心分离,处理前后应用SCA(sperm class analyzer)精子质量分析仪分析精子密度、活力和圆形细胞密度。结果:1层法分... 目的:评价1层和2层Percoll密度梯度离心法分离精子的效果。方法:20份精液标本分别行50%1层,90%和45%Percoll2层密度梯度离心分离,处理前后应用SCA(sperm class analyzer)精子质量分析仪分析精子密度、活力和圆形细胞密度。结果:1层法分离后精子回收率为(65.5±12.8)%,明显高于2层法(P<0.01);1层和2层法分离后a级精子百分率明显高于处理前(P<0.05,P<0.01),而1层法分离后a级精子百分率明显低于2层法(P<0.05);1层法分离精子后c级精子百分率明显高于2层法(P<0.05),与处理前相比没有明显差异(P>0.05);2层法分离后a+b级精子百分率明显高于处理前(P<0.05),1层法分离后a+b级精子百分率与处理前相比没有明显差异(P>0.05);1层和2层法分离后圆形细胞密度明显低于处理前(P<0.05,P<0.01),两种方法之间没有差异(P>0.05)。结论:1层法分离后精子回收率较高,精子的活力改变不大;2层法分离后精子回收率较低,精子的活力明显改善;1层和2层法都可以较好地把精子与圆形细胞分开。两种方法各有优势,在精子体外处理中都有着重要的应用价值。 展开更多
关键词 精子 PERCOLL 密度梯度离心 圆形细胞
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成人睾丸间质细胞的培养和鉴定 被引量:15
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作者 孙祥宙 邓春华 +1 位作者 郭海彬 刘建中 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期356-358,共3页
目的寻求一种有效的体外分离、纯化成人睾丸间质细胞的方法。方法利用4个梯度(60%、34%、26%、21%)的Percoll液分离、纯化成人睾丸间质细胞。对分离的细胞进行细胞学观察、锥虫蓝染色、3β羟基类固醇脱氢酶(3βHSD)染色、分泌睾酮能力... 目的寻求一种有效的体外分离、纯化成人睾丸间质细胞的方法。方法利用4个梯度(60%、34%、26%、21%)的Percoll液分离、纯化成人睾丸间质细胞。对分离的细胞进行细胞学观察、锥虫蓝染色、3β羟基类固醇脱氢酶(3βHSD)染色、分泌睾酮能力和绒毛膜促性腺激素(hCG)对分离睾丸间质细胞的作用等检测。结果通过该方法能够获得高纯度(>90%)的成人睾丸间质细胞,并通过上述实验检测证实分离、纯化的睾丸间质细胞有良好的分泌睾酮能力。结论采用该方法对成人睾丸间质细胞进行初步的分离和纯化是简单有效的。 展开更多
关键词 睾丸间质细胞 Percoll液 分离 纯化 成年人
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大鼠睾丸间质细胞的原代培养、鉴定与功能监测 被引量:15
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作者 应锋 龚昳 +2 位作者 孙佳音 沈洁 韩晓冬 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2008年第1期7-10,共4页
目的:采用改良方法对大鼠睾丸间质细胞进行分离、纯化和原代培养,以得到更高纯度和稳定的间质细胞原代培养体系。方法:采用酶消化法分离大鼠睾丸间质细胞,再用Percoll连续密度梯度离心除去生精细胞、支持细胞等杂细胞,实现进一步纯化;用... 目的:采用改良方法对大鼠睾丸间质细胞进行分离、纯化和原代培养,以得到更高纯度和稳定的间质细胞原代培养体系。方法:采用酶消化法分离大鼠睾丸间质细胞,再用Percoll连续密度梯度离心除去生精细胞、支持细胞等杂细胞,实现进一步纯化;用3β-HSD特异性染色法鉴定间质细胞,同时采用放射免疫法测定间质细胞睾酮分泌活性。结果:培养的间质细胞纯度达到95%以上,每个睾丸可获取间质细胞约1×106个;通过3β-HSD特异性染色鉴定,该间质细胞胞质呈蓝黑色,而且细胞具有分泌睾酮的活性。结论:酶消化后以Percoll连续密度梯度离心可分离得到高纯度且具有睾酮分泌活性的间质细胞,操作简单易行,实验方法稳定。 展开更多
关键词 间质细胞 Percoll密度梯度离心 原代培养 3β-HSD染色 大鼠
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Percoll法处理牛精子对体外受精胚胎发育的影响 被引量:13
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作者 陈善军 梁冠生 +3 位作者 张嘉保 王艳军 关宏 刘健 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期394-397,共4页
牛冷冻精液解冻后,在Percol梯度液中400g离心24min,有效地获得了57.87%±8.0%的精子回收率;对照组上游法精子回收率仅为15.87%±1.9%(P<0.05)。Percol和上游2种方法分离... 牛冷冻精液解冻后,在Percol梯度液中400g离心24min,有效地获得了57.87%±8.0%的精子回收率;对照组上游法精子回收率仅为15.87%±1.9%(P<0.05)。Percol和上游2种方法分离的精子在受精液中8、18h后的活率,分别为60%、10%和70%、20%。2种浓度Percol法分离的精子对不同成熟处理的卵母细胞体外受精(IVF)卵裂率的影响:精子最终浓度为2×106/mL时,成熟组Ⅰ(LH+FSH)和成熟组Ⅱ(PMSG+hCG)的卵裂率分别为56.19%和58.16%;精子最终浓度为5×106/mL时,2组的卵裂率分别为59.30%和62.77%,卵裂率在精子浓度不同组间及添加不同激素组间的差异不显著。本试验还研究了2种方法处理的精子对不同成熟处理组的卵裂率和囊胚率,用Percol法处理的精子(2×106/mL)在成熟组Ⅰ获得了57.16%的卵裂率和25.58%的囊胚率,而上游法分别为61.95%和19.02%,2种方法相差不显著(P>0.05);在成熟组Ⅱ获得了62.18%的卵裂率和24.77%的囊胚率,而上游法分别为71.18%和20.96%,2种方法的卵裂率相差显著(P<0.? 展开更多
关键词 Percoll法 冷冻精子 体外受精 胚胎
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采用Percoll法分离、纯化鲫肝细胞 被引量:6
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作者 张高峰 郭彤 +1 位作者 魏华 马珂 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期208-214,共7页
以Ⅳ型胶原酶消化法分离鲫(Carassius auratus)肝细胞,然后将其分成2组,一组不再经过进一步处理(即对照组);另一组再用Percoll液密度梯度离心纯化肝细胞(即实验组),然后将2组细胞接种于DMEM/F12培养基中培养10 d。在倒置显微镜下观察2... 以Ⅳ型胶原酶消化法分离鲫(Carassius auratus)肝细胞,然后将其分成2组,一组不再经过进一步处理(即对照组);另一组再用Percoll液密度梯度离心纯化肝细胞(即实验组),然后将2组细胞接种于DMEM/F12培养基中培养10 d。在倒置显微镜下观察2组肝细胞的形态并绘制细胞生长曲线;采用台盼蓝染色法比较2组肝细胞的存活率;通过HE染色法在光镜下检测肝细胞的纯度;采用MTT比色法测定2组肝细胞的增殖率;收集肝细胞培养上清液检测白蛋白、尿素以及乳酸脱氢酶的水平以检测2组肝细胞功能。结果表明,对照组鲫肝细胞存活率为80.6%,纯度为83.2%;实验组肝细胞存活率和纯度明显高于对照组(P<0.05),分别为94.2%和95.1%。实验中发现,从开始接种到大部分肝细胞贴壁生长,实验组比对照组肝细胞的增殖明显加快(P<0.05)。白蛋白分泌功能、尿素合成能力及乳酸脱氢酶检测结果表明,实验组培养上清液中白蛋白分泌量、尿素合成能力明显高于对照组(P<0.05);而乳酸脱氢酶含量明显低于对照组(P<0.05)。结论认为,用Percoll梯度液分离纯化肝细胞,可提高肝实质细胞纯度和活力,适合体外原代培养。 展开更多
关键词 肝细胞 分离 纯化 Percoll法
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PureSperm离心法在宫腔内人工授精周期中优选精子的应用 被引量:12
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作者 张燕 钱云 +2 位作者 冯婷 蔡令波 刘嘉茵 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期348-350,共3页
目的 :探讨PureSperm离心法在宫腔内人工授精 (IUI)周期中优选精子的效果。 方法 :采用PureSperm单、双梯度离心法及Percoll双梯度离心法分别处理精液 ,比较 3种方法的处理效果 ,并将处理后的精子悬液施行夫精IUI。 结果 :单梯度PureS... 目的 :探讨PureSperm离心法在宫腔内人工授精 (IUI)周期中优选精子的效果。 方法 :采用PureSperm单、双梯度离心法及Percoll双梯度离心法分别处理精液 ,比较 3种方法的处理效果 ,并将处理后的精子悬液施行夫精IUI。 结果 :单梯度PureSperm较双梯度的PureSperm及Percoll洗涤后精子密度显著增加 (P <0 .0 1) ,双梯度PureS perm及Percoll离心法两者差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,3种方法在洗涤后精子活率、畸形率及妊娠率比较差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。洗涤后正常形态的精子数量明显增加 ,白细胞、上皮细胞及细胞碎片等非精子成分明显减少。 结论 :PureSperm离心法是一种高效、简便、安全的IUI精液处理方法。 展开更多
关键词 宫腔内人工授精 PureSperm离心法 Percoll梯度离心法 精液洗涤
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柿属植物叶绿体DNA提取方法优化 被引量:11
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作者 傅建敏 梁玉琴 +2 位作者 孙鹏 姬燕晓 谭晓风 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期25-28,33,共5页
利用Percoll密度梯度离心法,对4种柿属植物君迁子D.lotus L.、油柿D.oleifera Cheng、浙江柿D.glaucifolia Metc.、金枣柿D.kaki spp.进行叶绿体DNA(cp DNA)提取方法的优化,结果显示优化后的柿属植物cp DNA提取方法具有高效、简便、重... 利用Percoll密度梯度离心法,对4种柿属植物君迁子D.lotus L.、油柿D.oleifera Cheng、浙江柿D.glaucifolia Metc.、金枣柿D.kaki spp.进行叶绿体DNA(cp DNA)提取方法的优化,结果显示优化后的柿属植物cp DNA提取方法具有高效、简便、重复性好、稳定性高的特点;经检验,利用此方法提取的cp DNA质量好,浓度与纯度均较高,能够满足后续叶绿体PCR扩增、基因组测序等分子生物学试验。 展开更多
关键词 柿属植物 叶绿体 DNA提取 Percoll密度梯度离心
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小鼠睾丸精子细胞的分离与鉴定 被引量:11
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作者 朱培元 黄宇烽 徐建平 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2002年第1期28-31,共4页
目的 :建立一种简单、可有效分离小鼠睾丸精子细胞的方法。 方法 :用组合酶消化成年小鼠睾丸制备睾丸细胞悬液 ,然后经 6层非连续Percoll梯度 (15 %、2 2 %、30 %、4 0 %、5 0 %和 6 0 % )离心法分离 ,通过形态学和流式细胞术鉴定各个P... 目的 :建立一种简单、可有效分离小鼠睾丸精子细胞的方法。 方法 :用组合酶消化成年小鼠睾丸制备睾丸细胞悬液 ,然后经 6层非连续Percoll梯度 (15 %、2 2 %、30 %、4 0 %、5 0 %和 6 0 % )离心法分离 ,通过形态学和流式细胞术鉴定各个Percoll梯度中精子细胞的含量 ,并以伊红Y排斥试验测定细胞的存活率。 结果 :组合酶消化后获得的睾丸细胞悬液中 ,97%以上细胞仍然存活。经Percoll梯度离心 ,共形成 6条细胞带 ,其中 2 2 %梯度中主要为精子细胞 (平均 86 .7% ,P <0 .0 5 ) ,85 .5 %以上细胞存活 ;而 30 %梯度中细胞密度最高 (P <0 .0 5 ) ,含有各级未成熟生精细胞 ,存活细胞超过 92 %。 结论 :采用组合酶消化结合非连续Percoll梯度离心法 。 展开更多
关键词 精子细胞 Percoll梯度离心 睾丸 分离 鉴定 组合酶消化
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Percoll密度梯度离心分离牛精子初探 被引量:5
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作者 陈元明 黄美玉 +3 位作者 邵桂芝 崔可仕 吕奇 于德洪 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 1991年第3期12-14,共3页
用2.9%柠檬酸钠将奶牛原精密度调到5×10~8/ml,取其3ml经26%Percoll洗涤(1700转,25分钟),置于pH7.0、渗透压300mmol/kg的9级Percoll梯度溶液上分离(1000转,15分钟)从第9层取得精子作去Percoll处理(2500转,20分钟),再用含甘油和卵... 用2.9%柠檬酸钠将奶牛原精密度调到5×10~8/ml,取其3ml经26%Percoll洗涤(1700转,25分钟),置于pH7.0、渗透压300mmol/kg的9级Percoll梯度溶液上分离(1000转,15分钟)从第9层取得精子作去Percoll处理(2500转,20分钟),再用含甘油和卵黄的牛冷冻稀释液平衡滴冻,解冻后活力可达0.4左右。分离后精子的受胎率为52.2%(47/90),母犊率为44.2%(19/43),对照组母犊率为36.8%(21/57)。说明分离后精子可正常受胎,并有提高母犊率的趋势。 展开更多
关键词 精子 分离 PERCOLL
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Percoll密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞 被引量:8
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作者 许小兵 李敏利 +2 位作者 郭婧芸 吴文娟 朱人敏 《医学研究生学报》 CAS 2009年第6期668-669,672,共3页
关键词 肝星状细胞 密度梯度离心 PERCOLL
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人胚胎滋养细胞和胎盘间充质干细胞的分离与纯化 被引量:9
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作者 沙文琼 王自能 王冬菊 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1833-1837,共5页
背景:胎盘的细胞成分较复杂,其中所包含的滋养细胞在母胎免疫耐受过程中起重要作用,胎盘间充质干细胞具有多向分化潜能以及抑制淋巴细胞增殖的特性,常规分离方法通常难以获得大量且纯度较高的上述两种细胞。目的:拟建立一次操作即可同... 背景:胎盘的细胞成分较复杂,其中所包含的滋养细胞在母胎免疫耐受过程中起重要作用,胎盘间充质干细胞具有多向分化潜能以及抑制淋巴细胞增殖的特性,常规分离方法通常难以获得大量且纯度较高的上述两种细胞。目的:拟建立一次操作即可同时获得大量、较高纯度的滋养细胞和胎盘间充质干细胞的操作方案。方法:人胎盘组织洗净剪碎,采用胰蛋白酶和DNAseⅠ共同消化,分3个阶段,每个阶段在恒温37℃下180r/min消化2min。重悬消化产物,200目筛网过滤后采用Percoll密度梯度分离液分离,分别收集滋养细胞层和胎盘间充质干细胞层。滋养细胞层以差速贴壁法去除成纤维细胞,胎盘间充质干细胞直接接种于75cm2培养瓶中培养。观察胎盘组织消化情况,计数滋养细胞数量及其细胞角蛋白7的表达,观察胎盘间充质干细胞生长增殖、表型及成骨分化潜能。结果与结论:经胰蛋白酶和DNAseⅠ消化后,胎盘组织仅剩少许残渣。差速贴壁后,滋养细胞数达(5.48±1.98)×108个,细胞角蛋白7阳性率为(90±4.36)%。胎盘间充质干细胞接种19~21d达90%融合,细胞数为(1.96±0.24)×106个,强表达CD29,CD44和HLA-ABC,不表达CD34,CD45,CD14和HLA-DR,诱导后茜素红染色呈鲜艳橙红色,可向成骨细胞方向分化。提示采用胰蛋白酶和DNAseⅠ共同消化胎盘组织,并结合Percoll不连续密度梯度分离液分离细胞,可同时一次性获得大量的滋养细胞和较多的胎盘间充质干细胞,细胞纯度和活性均较好。 展开更多
关键词 胎盘组织 滋养细胞 胰蛋白酶 DNAseⅠ PERCOLL 纯度 胎盘间充质干细胞
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Percoll梯度离心前后精子功能指标分析 被引量:20
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作者 林海萍 商学军 傅健 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期161-163,共3页
目的 :通过分析Percoll梯度离心法处理前后精子相关功能指标 ,评价该法在精子体外处理中的作用。 方法 :采用多次曝光摄影技术、瑞 姬氏染色法、低渗肿胀实验 ,观察处理前后精子运动速度、顶体完整率和低渗肿胀率的变化。 结果 :2 5... 目的 :通过分析Percoll梯度离心法处理前后精子相关功能指标 ,评价该法在精子体外处理中的作用。 方法 :采用多次曝光摄影技术、瑞 姬氏染色法、低渗肿胀实验 ,观察处理前后精子运动速度、顶体完整率和低渗肿胀率的变化。 结果 :2 5例不育病人精液标本经Percoll梯度离心法处理前后 ,精子运动速度 (2 0 .5 6± 8.13μm/s和 2 5 .18± 8.30 μm/s ,P <0 .0 5 )、顶体完整率 (6 1.2 0 %± 2 1.11%和 70 .36 %± 17.70 % ,P <0 .0 1)和低渗肿胀率 (6 8.2 8%±17.33%和 76 .76 %± 17.10 % ,P <0 .0 5 )均有显著差异。 结论 :精液标本经Percoll梯度离心法处理后 ,各项精子功能指标均较处理前有明显改善 ,该法可广泛应用于辅助生殖医学中。 展开更多
关键词 Percoll梯度离心法 精子 运动速度 顶体完整率
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Percoll分离法与多重PCR快速检测肉品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌 被引量:7
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作者 刘道文 陈萍 +1 位作者 魏琼 李月红 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期871-874,共4页
为从食品中有效分离致病菌,去除PCR反应的抑制因子,提高多重PCR检测灵敏度,本研究利用Percoll密度梯度离心的前处理法从鲜肉样品中高效分离沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌,以沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因和志贺氏菌ipa... 为从食品中有效分离致病菌,去除PCR反应的抑制因子,提高多重PCR检测灵敏度,本研究利用Percoll密度梯度离心的前处理法从鲜肉样品中高效分离沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌,以沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因和志贺氏菌ipaH基因为靶基因,经过PCR分别扩增出255 bp、506 bp、620 bp的DNA片段,DNA测序证实这些片段为目的扩增产物。该体系检测猪肉匀浆液中3种致病菌的灵敏度为6.2×103 cfu/mL、1.2×103 cfu/mL和2.4×103 cfu/mL,检测时间约6 h。Percoll前处理法与多重PCR检测肉中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌为同时检测肉类样品中多种致病菌提供了有效的检测方法。 展开更多
关键词 多重PCR Percoll分离法 食源性致病菌 鲜猪肉
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